陳關(guān)雄，高麗艷，李瑞遠(yuǎn)，臺曉媛，魯麗芝，李瓊仙，李思銀，倖華林

(石林縣畜牧獸醫(yī)總站，云南 石林 652200)

包蟲病(echinococcosis)主要包括由細(xì)粒棘球蚴引起的囊型包蟲病和多房棘球蚴引起的泡型包蟲病[1]，是由寄生于終末宿主(犬、狼、狐貍等)小腸的棘球絳蟲中期幼蟲(棘球蚴)感染中間宿主(牛、羊、豬、駱駝、人類等)而引起的人獸共患病[2]。目前公認(rèn)的有5個(gè)獨(dú)立種，即細(xì)粒棘球絳蟲(E.granulosus)、多房棘球絳蟲(E.multilocularis)、石渠棘球絳蟲(E.shiquius)、少節(jié)棘球絳蟲(E.oligarthrus)和福氏棘球絳蟲(E.vogeli)[3]。在我國只有兩種肝包蟲病存在[4]，中間宿主如牛、羊，感染后癥狀多不明顯，僅表現(xiàn)食欲下降、被毛粗糙、消瘦等癥狀，故不會引起畜主注意[5]，是一種嚴(yán)重危害人民身體健康和社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展的人獸共患寄生蟲病。

山羊感染包蟲病后很少表現(xiàn)出臨床癥狀，或表現(xiàn)出的臨床癥狀易跟其他疾病相混淆，臨床診斷較為困難。包蟲病的檢測方法主要有病原學(xué)檢測技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、光譜學(xué)技術(shù)、影像學(xué)診斷、分子生物學(xué)技術(shù)等[6]。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)是近幾年關(guān)注較多的一種檢測包蟲病的方法[7]。ELISA檢測方法因其操作簡單、敏感性高、特異性較強(qiáng)，使用比較廣泛[8]。

本研究通過采用夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(S-ELISA)方法對石林縣7個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)采集的山羊血清進(jìn)行包蟲病抗體檢測，分析石林縣山羊包蟲病感染及流行情況，比較各鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)包蟲病感染的差異性，劃定石林縣包蟲病重點(diǎn)防控區(qū)域，為制定石林縣包蟲病預(yù)防和控制措施提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

(1)調(diào)查時(shí)間和范圍：2019年9—12月，根據(jù)石林縣7個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)山羊存欄數(shù)量，隨機(jī)選擇山羊養(yǎng)殖戶83戶，頸靜脈采集山羊血液639份。

(2) 檢測試劑：牛羊包蟲抗體檢測試劑盒，購自深圳市康百得生物科技有限公司。

(3)主要儀器設(shè)備：酶標(biāo)儀，美國伯騰儀器有限公司產(chǎn)品，型號ELX-800；洗板機(jī)，美國伯騰儀器有限公司產(chǎn)品，型號50TS；恒溫培養(yǎng)箱，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠產(chǎn)品，型號GSP-9080MBE；移液器，德國Epprndorf公司產(chǎn)品；電動(dòng)離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品，型號TDL-80-28。

1.2 方法

1.2.1樣品處理

采集的血液樣品4℃條件下保存運(yùn)輸，分離血清后冷凍保存。

1.2.2操作與判定

(1)操作步驟。山羊包蟲病抗體檢測S-ELISA操作方法，按照試劑盒提供的操作說明書進(jìn)行操作。

(2)Cut-off值(COV)=陰性對照平均OD值×2.1(陰性對照孔OD值<0.1時(shí)，按0.1計(jì))。

(3)有效性判定。陰性對照孔OD值≤0.20(若大于0.20則實(shí)驗(yàn)無效)；陽性對照孔OD值≥0.30(若小于0.30則實(shí)驗(yàn)無效)。

(4)結(jié)果判定。樣品OD值≥COV， 判定為包蟲抗體陽性；樣品OD值

1.2.3數(shù)據(jù)分析

檢測結(jié)果數(shù)據(jù)用SPSS 20軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析不同鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)檢測結(jié)果的差異性。

2 結(jié)果

2.1 總體情況

檢測的7個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)83戶養(yǎng)殖戶639份山羊血清樣品中，共檢測出山羊包蟲病抗體陽性戶32戶，戶陽性率為38.55%；抗體陽性血清50份，樣品陽性率7.82%。

2.2 不同鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)山羊包蟲病抗體檢測情況

檢測的7個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)均有不同程度山羊包蟲病抗體陽性的情況存在，戶陽性率均在23.53%以上，最高的達(dá)87.5%；樣品陽性率均在4.32%以上，最高的達(dá)14.55%(見表1)。利用SPSS 20 軟件，對不同鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)山羊包蟲病抗體檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，石林街道、板橋街道、長湖鎮(zhèn)、西街口鎮(zhèn)和大可鄉(xiāng)戶陽性率之間差異不顯著(χ2=0.173，P=0.996>0.05)，但鹿阜街道和圭山鎮(zhèn)戶陽性率之間差異顯著(χ2=6.625，P=0.010<0.05)；石林街道、板橋街道、長湖鎮(zhèn)、西街口鎮(zhèn)樣品陽性率之間差異不顯著(χ2=1.000，P=0.801>0.05)，但鹿阜街道、圭山鎮(zhèn)和大可鄉(xiāng)樣品陽性率之間差異極顯著(χ2=10.878，P=0.004<0.01)。

表1 不同鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)山羊包蟲病抗體檢測結(jié)果

2.3 不同居住地山羊包蟲病抗體檢測情況

鹿阜街道、石林街道和板橋街道為壩區(qū)，其余4個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))為山區(qū)。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，不同居住地均有山羊包蟲病抗體陽性的情況存在，戶陽性率為38.55%，樣品陽性率為7.82%(見表2)。利用SPSS 20 軟件，對不同居住地山羊包蟲病抗體檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，壩區(qū)和山區(qū)戶陽性率之間差異不顯著(χ2=1.431，P=0.232>0.05)，但山區(qū)戶陽性率高于壩區(qū)；壩區(qū)和山區(qū)樣品陽性率之間差異不顯著(χ2=1.335，P=0.248>0.05)，但山區(qū)樣品陽性率高于壩區(qū)。

表2 不同居住地山羊包蟲病抗體檢測結(jié)果

2.4 不同年齡階段山羊包蟲病抗體檢測情況

檢測的4個(gè)不同年齡階段的山羊均有不同程度的山羊包蟲病抗體陽性的情況存在，樣品陽性率均在5.52%以上，最高達(dá)15.46%(見表3)。利用SPSS 20 軟件，對不同年齡階段山羊包蟲病抗體檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，1歲以上至2歲、2歲以上至3歲和3歲以上樣品陽性率之間差異不顯著(χ2=0.413，P=0.813>0.05)，但1歲及以下和1歲以上至2歲、2歲以上至3歲、3歲以上樣品陽性率之間差異顯著(χ2=9.329，P=0.025<0.05)。

表3 不同年齡階段山羊包蟲病抗體檢測結(jié)果

3 討論

包蟲病血清學(xué)檢測方法以其操作簡便、敏感性高、特異性強(qiáng)、成本低廉等優(yōu)勢在臨床中的應(yīng)用程度越來越高[9]。龐化勝利用3種人體不同包蟲病IgG抗體檢測試劑盒與臨床確診的病例進(jìn)行了對比試驗(yàn)，結(jié)果3種ELISA試劑盒靈敏性和特異性在90%以上，與臨床診斷一致性較高[10],進(jìn)一步證明ELISA方法檢測包蟲病血清抗體可用于臨床診斷。本研究通過夾心ELISA方法檢測了山羊養(yǎng)殖戶83戶、山羊血清639份，包蟲病抗體陽性戶有32戶、陽性血清50份，戶陽性率為38.55%、樣品陽性率為7.82%。周廷宣[11]報(bào)道的2016年我國羊包蟲病感染率為2.17%，說明石林縣山羊包蟲病感染的情況較全國平均水平高，在今后的工作中應(yīng)加強(qiáng)包蟲病的防治工作。

從不同鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)山羊包蟲病抗體檢測結(jié)果來看，大可鄉(xiāng)戶陽性率和樣品陽性率均較低，這可能與大可鄉(xiāng)犬只存欄數(shù)較少，山羊接觸被犬污染的飼料和飲水的機(jī)會較少有關(guān)；而圭山鎮(zhèn)的戶陽性率和樣品陽性率均較其他鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)高，恰好圭山鎮(zhèn)犬只的存欄數(shù)量在全縣7個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)中最多，而且至今還保留著用犬牧羊的習(xí)慣，山羊接觸被犬污染的飼料和飲水的機(jī)率就大大增加，這可能是導(dǎo)致圭山鎮(zhèn)山羊包蟲病較其他鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)高的主要原因。

從不同居住地山羊包蟲病抗體檢測的結(jié)果來看，雖然山區(qū)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))和壩區(qū)街道的戶陽性率和樣品陽性率之間差異不顯著，但山區(qū)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))戶陽性率和樣品陽性率還是略高于壩區(qū)街道，可能與不同居住地山羊養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖方式和意識有很大關(guān)系。據(jù)調(diào)查，石林縣山區(qū)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))飼養(yǎng)的犬只和山羊多為放養(yǎng)，而壩區(qū)街道多為拴養(yǎng)和圈養(yǎng)，山區(qū)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))對飼養(yǎng)的犬只和山羊不注重定期驅(qū)蟲，壩區(qū)街道定期驅(qū)蟲的意識則較高，這可能是導(dǎo)致山區(qū)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))戶陽性率和樣品陽性率高于壩區(qū)街道的主要原因。

從不同年齡階段山羊包蟲病抗體檢測的結(jié)果來看，1歲及以下山羊包蟲病抗體樣品陽性率與伍衛(wèi)平等[12]調(diào)查的羊棘球蚴感染檢測率隨齒齡增加而上升的情況有所不同，而是高于其他年齡階段，這可能是因?yàn)?歲及以下山羊年齡較小，未驅(qū)過蟲或驅(qū)蟲的次數(shù)或劑量未達(dá)到控制六鉤蚴的遷移所至。其他年齡階段的山羊樣品陽性率差異不明顯，山羊包蟲病雖然隨著年齡的增加，接觸被犬污染的飼料和飲水的機(jī)率增大，但山羊包蟲病的陽性率并未隨著年齡的增加而增加，說明山羊包蟲病的感染情況與畜主是否定期驅(qū)蟲有很大關(guān)系。

4 結(jié)論

本次調(diào)查結(jié)果表明，圭山鎮(zhèn)山羊包蟲病感染情況較其他鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)嚴(yán)重，其余6個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)均有不同程度的山羊包蟲病感染。山區(qū)山羊包蟲病感染情況略高于壩區(qū)，1歲及以下山羊包蟲病感染情況高于其他年齡階段。因此，應(yīng)加強(qiáng)石林縣山羊包蟲病的防控工作，建議根據(jù)不同鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)包蟲病的感染情況，側(cè)重加大山羊包蟲病的監(jiān)測及檢疫管控力度，加大山羊養(yǎng)殖戶包蟲病的防控知識宣傳力度。定期對飼養(yǎng)的山羊特別是1歲及以下山羊及犬只的驅(qū)蟲，同時(shí)注意驅(qū)蟲藥物的選擇，對飼養(yǎng)的犬只采用圈養(yǎng)或拴養(yǎng)的方式飼養(yǎng)，犬只糞便不隨意丟棄，引導(dǎo)轉(zhuǎn)變山羊的養(yǎng)殖方式，由放牧改為圈養(yǎng)等，逐步降低或凈化山羊包蟲病的感染情況。