係夢琪 李曉碩 葛東宇 董瑞娟 任秀君

摘要 目的：觀察電針對高血脂合并腦缺血大鼠側(cè)腦室外側(cè)壁巢蛋白（Nestin）和增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）表達(dá)的影響。方法：41只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組和高脂飼料喂養(yǎng)組，高脂飼料喂養(yǎng)組大鼠用高脂飼料喂養(yǎng)42 d造成高脂血癥模型后，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、電針1組、電針2組。電針1組電針“豐隆”，1次/d，連續(xù)7 d。第50天，電針組和模型組用FeCl3化學(xué)誘導(dǎo)造成腦缺血，術(shù)后電針組電針“豐隆”“百會”，1次/d，連續(xù)14 d。用神經(jīng)功能缺損評分評定行為學(xué)變化，生物化學(xué)法檢測血脂四項(xiàng)，HE染色觀察缺血半暗帶形態(tài)學(xué)改變，免疫組化檢測缺血側(cè)側(cè)腦室外側(cè)壁Nestin和PCNA的表達(dá)。結(jié)果：術(shù)后14 d模型組TC、LDL升高（P<0.01），HDL降低（P<0.01）;電針組TC、LDL降低（P<0.05），HDL升高（P<0.05）。模型組神經(jīng)功能缺損評分增高，HE染色組織形態(tài)呈腦缺血改變，Nestin、PCNA陽性細(xì)胞個數(shù)增多（P<0.05）;電針治療可降低神經(jīng)功能缺損評分（P<0.05），缺血半暗帶細(xì)胞形態(tài)接近正常，Nestin、PCNA陽性細(xì)胞數(shù)升高（P<0.05），術(shù)后7 d時達(dá)到高峰，且電針1組高于電針2組（P<0.05）。結(jié)論：電針“豐隆”“百會”可調(diào)節(jié)血脂，促進(jìn)缺血側(cè)側(cè)腦室外側(cè)壁Nestin、PCNA的表達(dá)，改善神經(jīng)功能，且在高血脂階段進(jìn)行針刺干預(yù)效果更佳。

關(guān)鍵詞 電針;腦缺血;高脂血癥;側(cè)腦室;神經(jīng)干細(xì)胞

Effect of Electroacupuncture on the Expression of Nestin and Proliferating Cell Nuclear Antigen of Rats with Hyperlipemia and Cerebral Ischemia

XI Mengqi1，LI Xiaoshuo1，GE Dongyu2，DONG Ruijuan2，REN Xiujun1

（1 School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 2 School of Traditional Chinese Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Abstract Objective：To observe the effect of electroacupuncture（EA）on the expression of Nestin and proliferating cell nuclear antigen（PCNA）in the lateral ventricle wall（LVW）of rats with hyperlipemia and cerebral ischemia.Methods：A total of 41 adult male SD rats were randomly divided into a normal group and a high fat diet group（HFD）.Rats in HFD group were fed with HFD for 42 days to establish hyperlipidemia model，and then randomly divided into a sham-operation group，a model group，a EA1 and EA2 group.Rats in EA1 group were needled at ST40 with EA（2/100 Hz，1～3 mA）20 minutes，once daily for 7 days.On the 50th day，rats in model and EA groups were induced to cerebral ischemia by 50% FeCl3.Rats in EA groups were needled at ST40 and GV20，once daily for 14 days.The behavior was assessed by neurological deficit score（NDS）.Four items of blood lipids were detected by biochemical method.HE staining was used to observe the morphological changes of ischemic penumbra.Immunohistochemistry was used to detect the expression of Nestin and PCNA in the lateral ventricle wall.Results：After 14 d operation，TC，LDL increased（P<0.01）and HDL decreased（P<0.01）in model group.TC，LDL reduced（P<0.05）and HDL rose（P<0.05）in EA group.Rats in model group had higher NDS.HE stained tissue morphology showed cerebral ischemic changes，and the number of Nestin and PCNA positive cells increased（P<0.05）.Electroacupuncture treatment could reduce the neurological deficit score（P<0.05），the morphology of ischemic penumbra cells was close to normal，the number of Nestin and PCNA positive cells increased（P<0.05），7 days after operation，and the number of Nestin and PCNA positive cells in EA group 1 was higher than that in EA 2 group（P<0.05）.Conclusion：EA at Fenglong（ST40）and Baihui（GV20）can regulate blood lipid metabolism，promote Nestin and PCNA expression in lateral ventricle wall of ischemic lateral ventricle，improve nerve function.And EA at hyperlipemia stage is more effective than EA after hyperlipemia with cerebral ischemia.

Keywords Electroacupuncture; Cerebral ischemia; Hyperlipemia; Lateral ventricles; Neural stem cell

中圖分類號：R245-33文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.23.015

缺血性腦中風(fēng)是世界范圍內(nèi)三大主要致死疾病之一，發(fā)病率、致殘率、死亡率均高，給人們的工作和生活造成了嚴(yán)重的影響[1]。腦缺血主要是腦內(nèi)血液供應(yīng)障礙引起的大腦局部缺血缺氧，以大腦中動脈梗阻最為常見[2]。有大量證據(jù)表明高脂血癥與缺血性神經(jīng)血管損傷密切相關(guān)，血脂異常會引起氧化應(yīng)激，內(nèi)皮功能障礙，血腦屏障紊亂和血管炎性反應(yīng)等一系列與腦缺血損傷密切相關(guān)的血管事件[3-4]。因此，改善血脂異常，可以有效預(yù)防缺血性腦血管病的發(fā)生。

西醫(yī)治療中風(fēng)常用溶栓、降壓、調(diào)脂、改善腦循環(huán)等方法，但在實(shí)際臨床應(yīng)用中仍有一定風(fēng)險[5]。針灸作為中醫(yī)藥的一部分，其治療缺血性中風(fēng)的作法可以追溯到中國古代，且目前在世界范圍內(nèi)仍然普遍存在[6]。針灸治療中風(fēng)及其后遺癥具有方便快捷，效果顯著，不良反應(yīng)較小等特點(diǎn)[7]。研究表明，針灸在血液供應(yīng)中斷后可調(diào)節(jié)腦血流量，促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生，以及缺血性損傷后的神經(jīng)可塑性[8-9]。臨床上治療中風(fēng)的針灸處方有很多，我們根據(jù)“化痰開竅”理論選擇“豐隆”“百會”兩穴相配。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在高血脂階段電針“豐隆”，高血脂合并腦缺血術(shù)后電針“豐隆”“百會”可通過調(diào)節(jié)血脂水平改善高血脂合并腦缺血大鼠神經(jīng)功能，減小腦梗死體積，促進(jìn)側(cè)腦室室管膜下區(qū)（Subventricular Zone，SVZ）的神經(jīng)細(xì)胞增殖[10]。

巢蛋白（Nestin）又名神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白，是第VI類中間絲蛋白，Nestin主要在神經(jīng)干細(xì)胞中表達(dá)，因此常作為神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)志物[11]。增殖細(xì)胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA）是一種DNA修復(fù)蛋白，在增殖細(xì)胞的細(xì)胞核中表達(dá)，因而成為評價細(xì)胞增殖狀態(tài)和DNA修復(fù)的重要指標(biāo)[12]。本實(shí)驗(yàn)通過高血脂合并腦缺血模型，研究在高血脂階段進(jìn)行電針“豐隆”預(yù)處理，腦缺血術(shù)后電針“豐隆”“百會”對模型大鼠缺血側(cè)側(cè)腦室外側(cè)壁Nestin、PCNA表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SPF級成年雄性SD大鼠41只，體質(zhì)量（200±20）g，均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，動物許可證號：SCXK（京）2012-0001。大鼠飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院實(shí)驗(yàn)室，保持12 h光照/12 h黑暗的自然生物節(jié)律，實(shí)驗(yàn)室溫度（24±1）℃，濕度（50±10）%，自由攝食飲水。

1.1.2 試劑與儀器 一次性使用無菌針灸針（北京中研太和醫(yī)療器械有限公司，型號：0.30 mm×25 mm），韓氏穴位神經(jīng)刺激儀（北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)公司，型號：LH202H），低溫高速離心機(jī)（Eppendorf公司，德國，型號：Centrifuge 5810R），石蠟切片機(jī)（Leica公司，德國，型號：Leitz-1516），顯微鏡（Olympus公司，日本，型號：BX40F4），數(shù)碼相機(jī)（Olympus公司，日本，型號：E-330）。Nestin抗體（Abcam公司，美國，批號：GR3149934-4），PCNA抗體（武漢博士德生物工程有限公司，批號：PC10），聚合HRP標(biāo)記抗小鼠IgG（武漢博士德生物工程有限公司，批號：13L10A01），DAB顯色液（武漢博士德生物工程有限公司，批號：13K30C22）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將大鼠隨機(jī)分為普通飼料喂養(yǎng)組（正常組）5只，高脂飼料喂養(yǎng)組（High Fat Diet，HFD）36只。參照前期工作，HFD大鼠用特殊配比的高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)造成高血脂模型[13]。同期喂養(yǎng)42 d后，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將HFD大鼠分為假手術(shù)組、模型組、電針1組、電針2組各9只。43～49 d電針1組大鼠電針雙側(cè)“豐隆”，1次/d，其余各組每天抓取一次，不做其他處理。第50天，模型組和電針1、2組用FeCl3化學(xué)誘導(dǎo)造成腦缺血模型[14]：用戊巴比妥鈉溶液（40 mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠，將其固定于右側(cè)臥位上，從左眶上緣與外耳道連線的中點(diǎn)縱向切開一個2 cm左右的切口，暴露顳骨，用咬骨鉗咬除部分左側(cè)顳骨，做一個直徑為3～5 mm的骨窗，暴露大腦中動脈（Middle Cerebral Artery，MCA），將浸有50%FeCl3（用0.1 mol/L HCL配置）溶液約10 μL的定量濾紙敷于暴露的MCA上20 min，去掉濾紙，逐層縫合，局部使用少許青霉素粉消炎抗菌。假手術(shù)組用生理鹽水濾紙貼敷，其余操作同模型組。腦缺血術(shù)后電針1、2組電針“豐隆”“百會”，1次/d，治療14 d。除正常組外，其余每組分為腦缺血術(shù)后1、7、14 d 3個時間點(diǎn)，生存期滿后取材。

1.2.2 干預(yù)方法 大鼠腧穴按《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[15]所附的常用實(shí)驗(yàn)動物針灸穴位圖定位。豐?。⊿T40）：膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨正中，在腓骨小頭下約7 mm處。百會（GV20）：頂骨正中處。“豐隆”直刺7 mm，“百會”及“百會”前2 mm各向后斜刺2 mm;雙側(cè)“豐隆”“百會”及“百會”前2 mm處分別接電針，連續(xù)波，頻率為2/100 Hz交替，刺激強(qiáng)度1-2-3 mA，以大鼠肢體輕微顫動為度，時間20 min。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1.2.3.1 神經(jīng)功能缺損評分（Neurological Deficit Score，NDS） 腦缺血后24 h用改良的Bederson5分級評分法[16]對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分。完全正常，無運(yùn)動功能缺損（正常）為0分;提尾時對側(cè)前肢不能伸展（輕度）為1分;向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈（中度）為2分;不能向?qū)?cè)運(yùn)動（重度）為3分;不能自主運(yùn)動，意識水平低下（極重度）為4分。評分大于或等于1分，納入實(shí)驗(yàn)。

1.2.3.2 血脂4項(xiàng) 腦缺血術(shù)后14 d，大鼠戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，腹主動脈取血2 mL，取血12 h前禁食，自由飲水。在4 ℃下離心15 min（轉(zhuǎn)速3 000 r/min，離心半徑12 cm），取上清液-20 ℃冷凍保存。由北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門檢驗(yàn)科檢測血清中血脂四項(xiàng)。用酶法測定總膽固醇（Total Cholesterol，TC），GPO-POD法測定三酰甘油（Triglycerides，TG），直接法測定低密度脂蛋白（Low-density Lipoprotein，LDL）和高密度脂蛋白（High-density Lipoprotein，HDL）。

1.2.3.3 缺血后組織形態(tài)觀察 大鼠存活期滿后，經(jīng)戊巴比妥鈉腹腔麻醉，開胸，暴露心臟和升主動脈，先用灌注針灌注生理鹽水約300 mL沖洗血管，大鼠血液顏色變淡、肝肺顏色變白后，用預(yù)冷的4%多聚甲醛繼續(xù)灌注，至大鼠肢體僵硬。斷頭取腦，浸入10%中性甲醛中固定，石蠟浸潤、包埋，制備蠟塊，常溫保存?zhèn)溆谩Ｃ恐粍游镉谀X缺血術(shù)后24 h隨機(jī)選取2張?jiān)趥?cè)腦室水平的切片（片厚5 μm），蘇木精-伊紅染色法（Hematoxylin-eosin Staining，HE）觀察缺血后細(xì)胞的形態(tài)變化。

1.2.3.4 Nestin、PCNA免疫組織化學(xué)檢測 石蠟切片脫蠟至水，PBS磷酸鹽緩沖液沖洗3 min×3次，用3% H2O2室溫孵育10 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶活性。切片放入配好的0.01 mol/L PBS-枸橘酸緩沖液中做抗原熱修復(fù)45 min，自然冷卻至室溫后滴加5%BSA封閉液，37 ℃孵育30 min后甩干，勿洗。分別滴加Nestin抗體（1∶400）、PCNA抗體（1∶100），在濕盒中4 ℃孵育過夜，PBS沖洗3 min×3次，滴加聚合HRP標(biāo)記抗鼠IgG，37 ℃孵育30 min，PBS浸泡3 min×3次，DAB顯色，顯微鏡下控制顯色時間，終止反應(yīng)后用自來水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片。用0.01 mol/L的PBS緩沖液做陰性對照。染色結(jié)果以缺血側(cè)側(cè)腦室外側(cè)壁為主要觀察部位，每個時間點(diǎn)2只大鼠，隨機(jī)選取9個視野，統(tǒng)一放大400倍。用光學(xué)顯微鏡BX40F4鏡下觀察，用E-330型照相機(jī)采集圖片，胞質(zhì)染成棕黃色顆粒的為Nestin陽性細(xì)胞，細(xì)胞核染成棕褐色顆粒的為PCNA陽性細(xì)胞。應(yīng)用Image Pro Plus軟件獲得每100 μm×100 μm視野中陽性細(xì)胞個數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。NDS以中位數(shù)（四分位區(qū)間）[Md（P25，P75）]表示，用Kruslal-Wallis H秩和檢驗(yàn)，兩兩比較采用Dunn′s multiple comparison test。其他數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。血脂用單因素方差分析，免疫組化用析因設(shè)計(jì)方差分析，組間兩兩比較用LSD-t法、Dunnett-t法或Dunn′s multiple comparison test。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)功能缺損評分 腦缺血術(shù)后24 h，模型組大鼠體質(zhì)量減輕，右側(cè)上肢不能伸展，個別向右側(cè)轉(zhuǎn)圈，未見神志不清、不能進(jìn)食等癥狀。與模型組比較，電針1組、電針2組神經(jīng)功能缺損評分均有所降低（P<0.05），且電針1組較電針2組更為明顯。見表1。

2.2 血脂結(jié)果 與正常組比較，腦缺血術(shù)后14 d模型組TC、LDL顯著升高（P<0.01），HDL降低（P<0.01）。與模型組比較，術(shù)后14 d電針1組TC、LDL降低（P<0.05），HDL升高（P<0.01）;電針2組LDL降低（P<0.01），HDL升高（P<0.05）。見表2。

2.3 HE染色結(jié)果 術(shù)后24 h，假手術(shù)組缺血半暗帶皮層神經(jīng)元呈圓形或橢圓形，結(jié)構(gòu)完整，排列整齊，分層明顯，細(xì)胞核淡染，核仁清晰，與正常組形態(tài)基本一致。模型組神經(jīng)元排列散亂，層次不清，可見大量皺縮的神經(jīng)元，細(xì)胞核固縮，染色較深，核周出現(xiàn)空泡，血管中有紅細(xì)胞滲出，組織形態(tài)整體上呈腦缺血改變。電針1組形態(tài)結(jié)構(gòu)接近正常，缺血區(qū)附近正常神經(jīng)元明顯增多，偶見皺縮的細(xì)胞核。電針2組可見少量皺縮的神經(jīng)元，組織間偶見空泡樣結(jié)構(gòu)，整體上趨于正常。見圖1。

2.4 Nestin陽性細(xì)胞個數(shù) 假手術(shù)組Nestin陽性細(xì)胞數(shù)量少，染色淺。模型組Nestin陽性細(xì)胞分布比較密集，染色較深，在側(cè)腦室室管膜下區(qū)聚集。電針組Nestin陽性表達(dá)明顯增多，在側(cè)腦室外側(cè)壁呈深棕色，排列緊密，7 d時表達(dá)增多最明顯。見圖2。

模型組腦缺血術(shù)后1、7 d，Nestin陽性表達(dá)升高（P<0.05）。與模型組比較，電針1組Nestin陽性細(xì)胞個數(shù)在術(shù)后1、7、14 d均增多（P<0.05），電針2組在術(shù)后7 d時增高（P<0.05）。電針1組Nestin陽性細(xì)胞個數(shù)比電針2組高，且在腦缺血后7 d增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。側(cè)腦室外側(cè)壁Nestin陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示時間和組間存在交互作用（P<0.05），時間因素的作用隨分組的不同而不同。見表3。

2.5 PCNA陽性細(xì)胞個數(shù) 假手術(shù)組PCNA陽性細(xì)胞數(shù)量較少，染色較淺，分布稀疏。模型組PCNA陽性細(xì)胞在側(cè)腦室外側(cè)壁排列比較密集，染色加深。與模型組比較，電針2組PCNA陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增多，顏色呈棕黑色，電針1組表達(dá)更為明顯，尤其是術(shù)后7 d。見圖2。

模型組腦缺血術(shù)后1、7、14 d，PCNA陽性表達(dá)較假手術(shù)組均升高，且在1 d時差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，電針1組PCNA陽性細(xì)胞個數(shù)在術(shù)后1、7、14 d均增多（P<0.05），電針2組在術(shù)后7、14 d時增高（P<0.05）。電針1組PCNA陽性細(xì)胞個數(shù)較電針2組高，且在腦缺血后1 d增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。側(cè)腦室外側(cè)壁PCNA陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示時間和組間無交互作用（P>0.05）。見表4。

3 討論

腦缺血中風(fēng)與高脂血癥關(guān)系密切，高達(dá)70%的中風(fēng)是血栓阻塞動脈引起大腦局部缺血造成的，研究表明高血脂是引起腦中風(fēng)的獨(dú)立危險因素，人體血脂含量過高，血液中的脂肪易于在動脈中層出現(xiàn)沉積形成粥樣斑塊，造成頸動脈狹窄、大腦缺血，當(dāng)斑塊脫落堵塞腦血管，大腦血流中斷，出現(xiàn)腦卒中[17]。血脂異常是腦血管病發(fā)病的重要危險因素，血清中TC、LDL濃度增高，HDL濃度降低，明顯增加缺血性卒中的風(fēng)險[18-19]。因此，改善血脂異常，降低血脂濃度對于缺血性中風(fēng)患者的治療和預(yù)后有積極意義，在高血脂階段進(jìn)行針刺干預(yù)可能是預(yù)防中風(fēng)的有效手段。

豐隆為足陽明經(jīng)絡(luò)穴，別走于足太陰脾經(jīng)，具有通經(jīng)活絡(luò)、祛濕化痰、醒腦安神等功效，被古今醫(yī)家公認(rèn)為治痰要穴。百會位于頭頂正中，是督脈與手足三陽經(jīng)、足厥陰經(jīng)的交會穴，具有醒腦開竅、安神定志、通督定癇等作用。將具有化痰作用的豐隆與具有開竅作用的百會兩穴相配，體現(xiàn)出“化痰通絡(luò)、醒腦開竅”的配穴原則[20]。

神經(jīng)干細(xì)胞在神經(jīng)系統(tǒng)中主要作為一種儲備細(xì)胞存在，當(dāng)神經(jīng)系統(tǒng)受到損傷時，如急性缺血性腦梗死、神經(jīng)退行性疾病等，這些細(xì)胞便開始增殖、遷移及分化為相應(yīng)的組織細(xì)胞，以便實(shí)現(xiàn)結(jié)構(gòu)和功能的代償[21]。成年哺乳動物大腦中的神經(jīng)發(fā)生主要集中在2個區(qū)域：側(cè)腦室室管膜下區(qū)SVZ和海馬齒狀回的顆粒下層（Subgranular Zone，SGZ）[22]。巢蛋白在成年神經(jīng)干細(xì)胞，未成熟的神經(jīng)祖細(xì)胞中瞬時表達(dá)，并在細(xì)胞轉(zhuǎn)化為分化細(xì)胞后消失，被廣泛用作胚胎和成年大腦中神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)記物[11]。局灶性腦缺血后SVZ區(qū)Nestin陽性細(xì)胞數(shù)目迅速升高并在7 d達(dá)到高峰，神經(jīng)干細(xì)胞在缺血發(fā)作后立即被激活[23-24]。電針治療后腦缺血大鼠室管膜下區(qū)Nestin免疫陽性細(xì)胞明顯增多[25]。作為增殖標(biāo)志物，PCNA通常用于標(biāo)記積極分裂的細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)性腦缺血后，腦室下區(qū)PCNA陽性細(xì)胞個數(shù)增多，針刺可能通過增強(qiáng)腦缺血大鼠側(cè)腦室室管膜下區(qū)PCNA的表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞增殖，從而改善神經(jīng)功能[26]。Nestin和PCNA免疫熒光雙染陽性是增殖神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)志[27]。研究發(fā)現(xiàn)腦缺血損傷后缺血側(cè)側(cè)腦室室管膜下區(qū)Nestin和PCNA表達(dá)增多[28]，術(shù)后7 d達(dá)到高峰，14 d時有所下降[29]，SVZ區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖并參與了損傷后大腦的自我修復(fù)過程。然而，內(nèi)源性神經(jīng)發(fā)生不能提供足夠的細(xì)胞來修復(fù)中風(fēng)等重大事件造成的神經(jīng)損傷，因此，采取能夠刺激內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的措施是非常重要的[30]。研究發(fā)現(xiàn)，電針可以改善局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺損，促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化[31]。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，電針可以促進(jìn)高脂血癥合并腦缺血大鼠缺血側(cè)側(cè)腦室室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖，從而減輕腦缺血術(shù)后腦組織損傷[32]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腦缺血術(shù)后缺血側(cè)側(cè)腦室外側(cè)壁Nestin、PCNA陽性細(xì)胞從1 d開始增加，一直持續(xù)到術(shù)后7 d，14 d時出現(xiàn)回落趨勢，與其他研究結(jié)果相似[23-24]，提示腦缺血可能誘導(dǎo)缺血側(cè)側(cè)腦室外側(cè)壁神經(jīng)干細(xì)胞增殖。在高脂血癥狀態(tài)下電針“豐隆”，腦缺血后電針“豐隆”“百會”可增強(qiáng)側(cè)腦室外側(cè)壁Nestin和PCNA的表達(dá)，在術(shù)后7 d達(dá)到高峰，14 d時仍處于較高水平。腦缺血后電針“豐隆”“百會”治療同樣可促進(jìn)側(cè)腦室外側(cè)壁Nestin、PCNA陽性表達(dá)，但僅在術(shù)后7 d陽性細(xì)胞增多顯著。提示連續(xù)電針治療可使側(cè)腦室外側(cè)壁神經(jīng)干細(xì)胞在腦缺血后一段時間內(nèi)處于持續(xù)增殖狀態(tài)，且在7 d時增殖達(dá)到高峰，與其他研究結(jié)果一致[31]。

總之，電針豐隆、百會可調(diào)節(jié)血脂代謝，減輕腦缺血損傷，改善神經(jīng)功能，促進(jìn)側(cè)腦室外側(cè)壁神經(jīng)干細(xì)胞增殖，從而達(dá)到腦損傷后神經(jīng)的自我修復(fù)作用，在高血脂階段就進(jìn)行電針干預(yù)作用更明顯，體現(xiàn)了中風(fēng)早期防治的重要性。

參考文獻(xiàn)

[1]Verma R，Ritzel RM，Crapser J，et al.Evaluation of the Neuroprotective Effect of Sirt3 in Experimental Stroke[J].Transl Stroke Res，2019，10（1）：57-66.

[2]張?zhí)A珊，李娟娟，吳春云.腦缺血的損傷機(jī)制及相關(guān)信號通路的研究進(jìn)展[J].神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2014，30（6）：729-732.

[3]Cao XL，Du J，Zhang Y，et al.Hyperlipidemia exacerbates cerebral injury through oxidative stress，inflammation and neuronal apoptosis in MCAO/reperfusion rats[J].Exp Brain Res，2015，233（10）：2753-2765.

[4]Yan BC，Park JH，Ahn JH，et al.Effects of high-fat diet on neuronal damage，gliosis，inflammatory process and oxidative stress in the hippocampus induced by transient cerebral ischemia[J].Neurochem Res，2014，39（12）：2465-2478.

[5]Barrett KM，Lal BK，Meschia JF.Stroke：advances in medical therapy and acute stroke intervention[J].Curr Cardiol Rep，2015，17（10）：79.

[6]Zhu W，Ye Y，Liu Y，et al.Mechanisms of Acupuncture Therapy for Cerebral Ischemia：an Evidence-Based Review of Clinical and Animal Studies on Cerebral Ischemia[J].J Neuroimmune Pharmacol，2017，12（4）：575-592.

[7]Shin S，Yang SP，Yu A，et al.Effectiveness and safety of electroacupuncture for poststroke patients with shoulder pain：study protocol for a double-center，randomized，patient-and assessor-blinded，sham-controlled，parallel，clinical trial[J].BMC Complement Altern Med，2019，19（1）：58.

[8]Chen B，Tao J，Lin Y，et al.Electro-acupuncture exerts beneficial effects against cerebral ischemia and promotes the proliferation of neural progenitor cells in the cortical peri-infarct area through the Wnt/β-catenin signaling pathway[J].Int J Mol Med，2015，36（5）：1215-1222.

[9]Huang J，Ye X，You Y，et al.Electroacupuncture promotes neural cell proliferation in vivo through activation of the ERK1/2 signaling pathway[J].Int J Mol Med，2014，33（6）：1547-1553.

[10]李曉碩，葛東宇，董瑞娟，等.電針對高血脂合并腦缺血大鼠腦梗死體積及SVZ形態(tài)學(xué)影響[J].環(huán)球中醫(yī)藥，2018，11（4）：502-508.

[11]Bernal A，Arranz L.Nestin-expressing progenitor cells：function，identity and therapeutic implications[J].Cell Mol Life Sci，2018，75（12）：2177-2195.

[12]Bártová E，Suchánková J，Legartová S，et al.PCNA is recruited to irradiated chromatin in late S-phase and is most pronounced in G2 phase of the cell cycle[J].Protoplasma，2017，254（5）：2035-2043.

[13]于若凡，于雪，任秀君.電針對高血脂合并腦缺血大鼠血脂和腦梗死體積的影響及其機(jī)制探討[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2018，41（3）：227-234.

[14]Spasov AA，Kucheryavenko AF，Kosolapov VA，et al.Antithrombogenic activity of antioxidant compounds[J].Bull Exp Biol Med，2013，155（6）：775-777.

[15]張露芬，盧峻，嵇波.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：219-224.

[16]Huang Z，Huang PL，Panahian N，et al.Effects of cerebral ischemia in mice deficient in neuronal nitric oxide synthase[J].Science，1994，265（5180）：1883-1885.

[17]鐘躍，邱偉，廖珍蘭，等.缺血性腦卒中患者頸動脈粥樣硬化斑塊的超聲檢查與CT血管造影的影像表現(xiàn)分析[J].中國CT和MRI雜志，2018，16（9）：2.

[18]熊學(xué)輝，翟丹霞.不同類型腦卒中與血脂的關(guān)系及相互影響[J].河北醫(yī)藥，2016，38（11）：1632-1635.

[19]曹承蘭，余年，林興建，等.腦卒中高危人群的相關(guān)危險因素[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，2014，27（5）：335-337.

[20]李曉碩，于若凡，任秀君，等.“化痰開竅”辨證配穴的理論探討[J].環(huán)球中醫(yī)藥，2017，10（5）：607-610.

[21]Boese AC，Le QE，Pham D，et al.Neural stem cell therapy for subacute and chronic ischemic stroke[J].Stem Cell Res Ther，2018，9（1）：154.

[22]Ruddy RM，Morshead CM.Home sweet home：the neural stem cell niche throughout development and after injury[J].Cell Tissue Res，2018，371（1）：125-141.

[23]Huang D，Liu H，Qu Y，et al.Non-invasive remote ischemic postconditioning stimulates neurogenesis during the recovery phase after cerebral ischemia[J].Metab Brain Dis，2017，32（6）：1805-1818.

[24]Krishnasamy S，Weng YC，Thammisetty SS，et al.Molecular imaging of nestin in neuroinflammatory conditions reveals marked signal induction in activated microglia[J].J Neuroinflammation，2017，14（1）：45.

[25]王光義，趙沁慧.電針對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織Nestin及bFGF表達(dá)的影響[J].醫(yī)學(xué)信息，2013，26（21）：298-299.

[26]胡光強(qiáng)，余錄，張豐正，等.醒腦開竅針刺法對腦缺血再灌注損傷大鼠PCNA表達(dá)的影響[J].瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2014，37（5）：488-491.

[27]陳偉，陳嵐芬，張夢蓓，等.不同褪黑素治療方案對缺氧缺血性腦損傷新生大鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響[J].中國當(dāng)代兒科雜志，2019，21（8）：830-835.

[28]唐曉洪，來青偉，李青云，等.Ro25-6981對缺血再灌注大鼠腦室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響[J].解剖學(xué)雜志，2017，40（4）：425-428.

[29]來青偉，唐曉洪，李青云，等.缺血再灌注損傷對成年大鼠腦室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和NMDA受體亞單位2A表達(dá)的影響[J].神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2016，32（3）：380-384.

[30]Lapchak PA，ZHANG JH.Cellular and Molecular Approaches to Regeneration and Repair[M].Cham：Springer International Publishing，2018：101-112.

[31]Tao J，Xue XH，Chen LD，et al.Electroacupuncture improves neurological deficits and enhances proliferation and differentiation of endogenous nerve stem cells in rats with focal cerebral ischemia[J].Neurol Res，2010，32（2）：198-204.

[32]任秀君，馬惠芳，圖婭.電針對高脂血癥合并腦缺血大鼠側(cè)腦室室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響[J].針刺研究，2010，35（3）：175-181.

（2020-02-21收稿 責(zé)任編輯：王明）