段紅梅,王丹丹,洪 豆,江宇峰,王順余,吳淑清,*,王曉紅,*

(1.長(zhǎng)春大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,吉林長(zhǎng)春 130022;2.浙江李子園食品股份有限公司,浙江金華 321031)

長(zhǎng)白楤木(AraliacontinentalisKitagwa),又名草本刺嫩芽、牛尾大活等,藥名東北土當(dāng)歸,與藥王人參同屬五加科多年生草本植物[1],營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)極為豐富,是一種珍貴的山野菜,且具有保健功效。古醫(yī)書記載其根可入藥,具有祛風(fēng)燥濕、解熱鎮(zhèn)痛、疏風(fēng)活血和利尿解毒等功效[2]?，F(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)表明長(zhǎng)白楤木己得到廣泛關(guān)注:Lim等人研究表明長(zhǎng)白楤木根的成分具有明顯的抗炎活性[3]。Kim等人研究證實(shí)長(zhǎng)白楤木富含二萜、三萜、脂肪酸、黃酮類、揮發(fā)油等多種生物活性成分,并且從中分離得到一種三萜皂苷,其具有很強(qiáng)的降糖活性[4];長(zhǎng)白楤木還富含黃酮類及苷類化合物,其具有較強(qiáng)的抗氧化活性[5]。王忠壯等人研究得到貝殼烯酸、貝殼杉醇酸、海松酸等二萜成分具有鎮(zhèn)靜作用[6]。除此之外,其根中其他成分還有降血脂、預(yù)防心腦血管、抗腫瘤和保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等功效[7]。

目前,黃酮類物質(zhì)的主要提取方法有:水-有機(jī)溶劑提取法、超聲波輔助提取法、酶法提取及微波輔助提取法等[8-9]。而酶法提取主要采用酶破壞植物組織細(xì)胞,使細(xì)胞壁疏松、破裂,降低傳質(zhì)阻力,且與溶劑乙醇聯(lián)用提取黃酮類物質(zhì)還具有協(xié)同作用[10-11],酶法提取具有得率高、反應(yīng)條件溫和、時(shí)間短、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)[12]。因此,酶法在天然產(chǎn)物提取方面越來(lái)越受到重視。近年來(lái),關(guān)于酶法提取長(zhǎng)白楤木根總黃酮的工藝及抗氧化活性的研究鮮有報(bào)道,因此試驗(yàn)采用纖維素酶/果膠酶輔助乙醇提取長(zhǎng)白楤木根總黃酮,以總黃酮提取量作為考察指標(biāo),在單因素分析的基礎(chǔ)上,通過(guò)響應(yīng)面法優(yōu)化,確定長(zhǎng)白楤木根黃酮類物質(zhì)的最佳提取工藝,并對(duì)三種自由基的抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定,以期為長(zhǎng)白楤木根黃酮的研究奠定基礎(chǔ),為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用長(zhǎng)白楤木根中活性成分提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

長(zhǎng)白楤木根 由長(zhǎng)春大學(xué)園林學(xué)院王曉紅教授的實(shí)驗(yàn)種植基地提供;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(液相濃度≥98%) 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;纖維素酶(400 U/mg)、果膠酶(50000 U/g) 美國(guó)sigma公司;水楊酸、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、鄰苯三酚 大連美侖生物技術(shù)有限公司;2,2-聯(lián)苯基-1-苦基肼基(DPPH) 上海麥克林生化科技有限公司;亞硝酸鈉、硝酸鋁、硫酸亞鐵等試劑 均為分析純,北京化工廠。

WJX-A1000型高速多功能粉碎機(jī) 上海緣沃工貿(mào)有限公司;UV-2700紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 日本島津儀器有限公司;TDL-50B低速離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;GZX-9070MBE電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 濟(jì)南榮星分析儀器有限公司;NTS-4000B型恒溫震蕩水槽 日本東京理化器械株式會(huì)社。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 長(zhǎng)白楤木根預(yù)處理 將新鮮長(zhǎng)白楤木根清洗干凈,置于溫度為50 ℃的電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥24 h,用粉碎機(jī)將烘干的樣品粉碎,過(guò)80目(0.2 mm)篩,裝入密封袋,冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 長(zhǎng)白楤木根中總黃酮的提取工藝流程 長(zhǎng)白楤木根粉→加入乙醇溶劑→酶法提取→沸水浴滅酶5 min→冷卻→離心→收集上清液→總黃酮測(cè)定

1.2.3 單因素試驗(yàn)

1.2.3.1 提取溫度對(duì)總黃酮提取量的影響 準(zhǔn)確稱取1.0000 g長(zhǎng)白楤木根粉置于150 mL三角瓶中,以50%乙醇溶液為溶劑,液料比為40∶1 (mL/g),在pH5.0的情況下,添加復(fù)合酶為5%(果膠酶∶纖維素酶=1∶1),分別在30、40、50、60、70、80 ℃水浴振蕩下提取50 min,再經(jīng)沸水浴滅酶5 min,樣液經(jīng)4000 r/min速度離心10 min后,取上清液為樣品待測(cè)儲(chǔ)備液,測(cè)定提取溫度對(duì)總黃酮提取量的影響。

1.2.3.2 復(fù)合酶(果膠酶與纖維素酶)比例對(duì)長(zhǎng)白楤木根總黃酮提取量的影響 準(zhǔn)確稱取1.0000 g長(zhǎng)白楤木根粉置于150 mL三角瓶中,以液料比為40∶1 (mL/g),50%乙醇溶液為溶劑,在pH5.0的情況下,添加復(fù)合酶(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%),即果膠酶:纖維素酶比例分別為1∶2、1∶1.5、1∶1、1.5∶1、2∶1、2.5∶1,并在50 ℃水浴振蕩下提取50 min,再經(jīng)沸水浴滅酶5 min,樣液經(jīng)4000 r/min速度離心10 min后,取上清液為樣品待測(cè)儲(chǔ)備液,測(cè)定復(fù)合酶比例對(duì)總黃酮提取量的影響。

1.2.3.3 提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取量的影響 準(zhǔn)確稱取1.0000 g長(zhǎng)白楤木根粉置于150 mL三角瓶中,以液料比為40∶1 (mL/g),50%乙醇溶液為溶劑,在pH5.0的情況下,添加復(fù)合酶為5%(果膠酶∶纖維素酶=1∶1),并在50 ℃水浴振蕩下分別提取20、30、40、50、60、70 min,再經(jīng)沸水浴滅酶5 min,樣液經(jīng)4000 r/min速度離心10 min后,取上清液為樣品待測(cè)儲(chǔ)備液,測(cè)定提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取量的影響。

1.2.3.4 液料比對(duì)總黃酮提取量的影響 準(zhǔn)確稱取1.0000 g長(zhǎng)白楤木根粉置于150 mL三角瓶中,以50%乙醇溶液為溶劑,分別在液料比為20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1、70∶1 mL/g,pH5.0的情況下,添加復(fù)合酶為5%(果膠酶∶纖維素酶=1∶1),并在50 ℃水浴振蕩下提取50 min,再經(jīng)沸水浴滅酶5 min,樣液經(jīng)4000 r/min速度離心10 min后,取上清液為樣品待測(cè)儲(chǔ)備液,測(cè)定液料比對(duì)總黃酮提取量的影響。

1.2.3.5 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮提取量的影響 準(zhǔn)確稱取1.0000 g長(zhǎng)白楤木根粉置于150 mL三角瓶中,液料比為40∶1 (mL/g),分別以30%、40%、50%、60%、70%、80%乙醇溶液為溶劑,在pH5.0的情況下,復(fù)合酶添加量為5%(果膠酶∶纖維素酶=1∶1),并在50 ℃水浴振蕩下提取50 min,再經(jīng)沸水浴滅酶5 min,樣液經(jīng)4000 r/min速度離心10 min后,取上清液為樣品待測(cè)儲(chǔ)備液,測(cè)定乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮提取量的影響。

1.2.4 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上固定提取溫度為50 ℃,根據(jù)Box-Behnken設(shè)計(jì)原理,以總黃酮提取量作為響應(yīng)值,固定選擇果膠酶與纖維素酶的比例、提取時(shí)間、液料比、乙醇體積分?jǐn)?shù)4個(gè)因素作為自變量,并根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn),試驗(yàn)因素水平見(jiàn)表1。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素及水平表Table 1 Factors and levels of response surface test

1.2.5 長(zhǎng)白楤木根總黃酮提取量的測(cè)定 將蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)110 ℃恒溫干燥至恒重并冷卻至室溫備用,準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)品10 mg,用30%的乙醇超聲溶解5 min,并定容于50 mL容量瓶中,得濃度為0.2 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液,冷藏保存?zhèn)溆肹13]。分別精密吸取0、1、2、3、4、5、6 mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液置于25 mL容量瓶,各加30%乙醇溶液至6 mL,再加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL,搖勻靜置6 min,再加入10%硝酸鋁1 mL,搖勻靜置6 min,再加4%氫氧化鈉溶液10 mL,最后用30%乙醇定容至刻度線,搖勻靜置15 min,在最大吸收波長(zhǎng)500 nm處測(cè)定吸光度,記錄數(shù)據(jù),并繪制以吸光度為縱坐標(biāo)以濃度為橫坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,所得回歸方程:y=10.232x+0.0049(R2=0.9992),式中y為吸光度,x為蘆丁質(zhì)量濃度(mg/mL),結(jié)果表明蘆丁在0.008～0.048 mg/mL濃度范圍內(nèi)與吸光度呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系[14-15]。

測(cè)定樣液時(shí),精密吸取1 mL樣液于25 mL容量瓶中,按照制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法處理,在500 nm處測(cè)定其吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算長(zhǎng)白楤木根中總黃酮含量,按公式(1)計(jì)算如下:

式(1)

式中,T:總黃酮物質(zhì)的含量,mg/g;C:通過(guò)公式計(jì)算所得的總黃酮質(zhì)量濃度,mg/mL;V:總黃酮提取液體積,mL;m:稱量的長(zhǎng)白楤木根的質(zhì)量,g;n:稀釋倍數(shù)。

1.2.6 長(zhǎng)白楤木根總黃酮抗氧化活性的研究

1.2.6.1 清除DPPH·測(cè)定 根據(jù)Zheng[16]的方法稍作修改,分別配制不同質(zhì)量濃度為0.03、0.06、0.09、0.12、0.15 mg/mL的長(zhǎng)白楤木根總黃酮和VC溶液。準(zhǔn)確吸取不同質(zhì)量濃度的總黃酮溶液2 mL和0.1 mmol/L DPPH-乙醇溶液2 mL于試管中,充分混勻,在37 ℃恒溫水浴鍋中避光保存30 min,以無(wú)水乙醇為參比,以VC作為陽(yáng)性對(duì)照,在517 nm處測(cè)定吸光度。按公式(2)計(jì)算DPPH·清除率。

式(2)

式中:A0為2 mL DPPH-乙醇溶液和2 mL蒸餾水的混合液吸光度;A1為2 mL DPPH-乙醇溶液和2 mL樣品溶液的吸光度;A2為2 mL無(wú)水乙醇和2 mL樣品溶液的吸光度。

1.2.6.2 清除羥基自由基(·OH)的測(cè)定 由李多[17]的方法稍作修改,配制不同質(zhì)量濃度為0.03、0.06、0.09、0.12、0.15 mg/mL的長(zhǎng)白楤木根總黃酮提取液,同時(shí)以VC作為對(duì)照進(jìn)行試驗(yàn),取各質(zhì)量濃度的黃酮提取液2.0 mL于試管中,向各試管中分別依次加入2 mL 6 mmol/L FeSO4溶液、6 mmol/L H2O2溶液、6 mmol/L水楊酸溶液,在37 ℃下反應(yīng)1 h,以蒸餾水為參比,在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,每個(gè)實(shí)驗(yàn)平行3次。按公式(3)計(jì)算羥自由基清除率。

式(3)

式中:A0為FeSO4溶液、H2O2溶液、水楊酸和蒸餾水混合液的吸光度;A1為FeSO4溶液、H2O2溶液、水楊酸和樣品溶液混合液的吸光度;A2為FeSO4溶液、蒸餾水、水楊酸和樣品溶液混合液的吸光度。

式(4)

式中:v0為鄰苯三酚自氧化時(shí)反應(yīng)速率;vt為加入樣品溶液后鄰苯三酚自氧化時(shí)反應(yīng)速率。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù),采用Excel 2010軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理并作圖,所得試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,采用Design-Expert 8.0.6軟件進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 提取溫度對(duì)總黃酮提取量的影響 由圖1可知,隨著提取溫度的升高,長(zhǎng)白楤木根總黃酮的提取量也逐漸增加;當(dāng)提取溫度為50 ℃時(shí),提取量達(dá)到最高為7.0 mg/g;當(dāng)提取溫度繼續(xù)升高,長(zhǎng)白楤木根總黃酮的提取量逐漸下降,由于溫度過(guò)高會(huì)使黃酮類化合物降解,導(dǎo)致酶活性部分喪失,但溫度過(guò)低不利于黃酮類化合物的溶出[19]。因此,選取提取溫度為50 ℃。

圖1 提取溫度對(duì)總黃酮提取量的影響Fig.1 Effect of extraction temperatureon extraction rate of total flavonoids

2.1.2 復(fù)合酶比例對(duì)總黃酮提取量的影響 由圖2可知,當(dāng)果膠酶與纖維素酶的比例為1∶2～1∶1時(shí),總黃酮提取量逐漸增大,并且當(dāng)復(fù)合酶比例為1∶1時(shí),此時(shí)長(zhǎng)白楤木根總黃酮的提取量最大,為7.1 mg/g,這是由于果膠酶與纖維素酶的比例逐漸增加,其對(duì)長(zhǎng)白楤木根細(xì)胞壁中網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)破壞力增強(qiáng),增加了細(xì)胞壁通透性,進(jìn)而溶解流出更多的黃酮類物質(zhì),增強(qiáng)了酶促反應(yīng)速率,使提取量逐漸增加,而在非最佳酶配比溶液中,反而導(dǎo)致酶的作用受到抑制,黃酮的提取量開(kāi)始降低[20]。因此,選取果膠酶與纖維素酶的比例為1∶1。

圖2 果膠酶與纖維素酶的比例對(duì)總黃酮提取量的影響Fig.2 Effect of pectinase to cellulase ratioon total flavonoids extraction

2.1.3 提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取量的影響 由圖3可知,隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng),總黃酮提取量先升高后降低,當(dāng)提取時(shí)間為50 min時(shí),黃酮提取量達(dá)最大值6.9 mg/g,之后提取量下降,是由于時(shí)間增加,溶液溫度略升高,從而導(dǎo)致長(zhǎng)白楤木根黃酮提取物有效成分的結(jié)構(gòu)被破壞,發(fā)生分解或轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)[21]。因此,選取提取時(shí)間為50 min。

圖3 提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取量的影響Fig.3 Effect of extraction timeon extraction rate of total flavonoids

2.1.4 液料比對(duì)總黃酮提取量的影響 由圖4可知,當(dāng)液料比低于40∶1 (mL/g)時(shí),提取量隨著液料比的增大逐漸上升,在40∶1 (mL/g)時(shí)達(dá)到最大8.2 mg/g,由于溶劑的增加,增大了提取液乙醇與提取物長(zhǎng)白楤木根總黃酮的接觸面積,使溶出的黃酮類化合物量增大;而液料比在50∶1～70∶1 (mL/g)時(shí),提取量呈現(xiàn)下降趨勢(shì),可能由于其它雜質(zhì)的溶出對(duì)總黃酮化合物產(chǎn)生拮抗作用。所以,選擇液料比為40∶1 (mL/g)。

圖4 液料比對(duì)總黃酮提取量的影響Fig.4 Effect of liquid-to-liquid ratioon extraction rate of total flavonoids

2.1.5 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮提取量的影響 由圖5可知,隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大,長(zhǎng)白楤木根總黃酮提取量呈現(xiàn)上升趨勢(shì),當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí),長(zhǎng)白楤木根總黃酮提取量達(dá)到最大為7.5 mg/g;當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%～80%時(shí),總黃酮提取量則逐漸減小。由于不同濃度的乙醇溶液極性不同,乙醇體積分?jǐn)?shù)越大,其溶劑極性越小,而黃酮類化合物的極性一般都較小,根據(jù)相似相容原理[22],所以乙醇體積分?jǐn)?shù)越高其黃酮提取量越低。因此,選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%。

圖5 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮提取量的影響Fig.5 Effect of ethanol volume fractionon extraction rate of total flavonoids

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果分析 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,基于Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,以長(zhǎng)白楤木根總黃酮提取量為響應(yīng)值,運(yùn)用Design Expert 8.0.6軟件設(shè)計(jì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn),固定提取溫度為50 ℃,考察果膠酶與纖維素酶的比例(A)、提取時(shí)間(B)、液料比(C)、乙醇體積分?jǐn)?shù)(D)間交互作用對(duì)長(zhǎng)白楤木中總黃酮提取量的影響,因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Response surface test design and results

采用Design Expert 8.0.6軟件對(duì)表2中的數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多項(xiàng)式回歸分析,結(jié)果表明,得到總黃酮提取量對(duì)果膠酶與纖維素酶的比例(A)、提取時(shí)間(B)、液料比(C)、乙醇體積分?jǐn)?shù)(D)的二次多項(xiàng)回歸方程:

總黃酮含量=8.11+0.068A+0.28B-0.080C-0.38D-0.49AB-0.32AC-0.48AD-0.12BC-0.36BD+0.096 CD-1.19A2-1.45B2-1.33C2-2.05D2。

根據(jù)響應(yīng)面設(shè)計(jì)方案,進(jìn)行方差分析,見(jiàn)表3。

表3 方差分析Table 3 Analysis of variance

采用Design-Expert 8.0.6軟件對(duì)復(fù)合酶添加量、提取時(shí)間、液料比、乙醇體積分?jǐn)?shù)4個(gè)因素間交互作用進(jìn)行響應(yīng)面分析,得到以總黃酮提取量為響應(yīng)值的響應(yīng)面。各因素之間的交互作用對(duì)響應(yīng)值的影響可用響應(yīng)面圖和等高線表示。當(dāng)響應(yīng)面圖的曲面坡度越陡峭,說(shuō)明兩因素之間交互作用就越大[23],兩個(gè)因素交互作用的響應(yīng)面和等高線圖,如圖6、圖7所示,且由表3的方差分析表可知,AB、AD偏回歸系數(shù)差異顯著(P<0.05),說(shuō)明果膠酶與纖維素酶的比例與提取時(shí)間、果膠酶與纖維素酶的比例與乙醇體積分?jǐn)?shù)兩兩之間的交互作用對(duì)長(zhǎng)白楤木根總黃酮提取量的影響顯著。而等高線是響應(yīng)面中水平方向的投影,等高線的形狀可反映出交互作用的顯著性[24]。當(dāng)?shù)雀呔€趨于橢圓形,表示兩因素之間交互作用顯著,趨于圓形則恰好相反。由圖6、圖7等高線圖可知,其中果膠酶與纖維素酶的比例和提取時(shí)間的交互作用、果膠酶與纖維素酶的比例和乙醇體積分?jǐn)?shù)的交互作用影響顯著,這與表3顯著性檢驗(yàn)結(jié)果完全一致。

圖6 果膠酶纖維素酶的比例與超聲提取時(shí)間交互作用的響應(yīng)面圖和等高線圖Fig.6 The response surface diagram and contour plot ofthe interaction between the ratio of pectinase and cellulaseand the time of ultrasonic extraction

圖7 果膠酶纖維素酶的比例與乙醇體積分?jǐn)?shù)交互作用的響應(yīng)面圖和等高線圖Fig.7 Response surface and contour plots ofthe interaction between the ratio of pectinase cellulaseand the volume fraction of ethanol

以總黃酮提取量為評(píng)價(jià)指標(biāo),分析得出響應(yīng)面法優(yōu)化長(zhǎng)白楤木根總黃酮的最佳工藝條件為:復(fù)合酶添加量(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%,纖維素酶∶果膠酶=1∶1.2)、提取時(shí)間為50.45 min、液料比為40.85∶1 (mL/g)、乙醇體積分?jǐn)?shù)為49.95%,此時(shí)總黃酮的提取量為8.6±0.04 mg/g。

2.2.2 驗(yàn)證試驗(yàn) 為了實(shí)際操作的方便性和可行性,將其改為復(fù)合酶比例(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%,纖維素酶∶果膠酶=1∶1)、提取時(shí)間為50 min、液料比為40∶1 (mL/g)、乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%。在此條件下進(jìn)行3組平行試驗(yàn)驗(yàn)證,實(shí)際測(cè)得黃酮提取量的平均值為8.6±0.05 mg/g,與預(yù)測(cè)值8.6±0.04 mg/g相接近,由此可見(jiàn),該模型可以較好的預(yù)測(cè)總黃酮的提取量。

2.3 抗氧化性試驗(yàn)

2.3.1 長(zhǎng)白楤木根總黃酮對(duì)DPPH·的清除能力 由圖8可知,隨著長(zhǎng)白楤木根總黃酮濃度的增加,DPPH·的清除作用逐漸增大,質(zhì)量濃度從0.03～0.15 mg/mL時(shí),長(zhǎng)白楤木根總黃酮對(duì)DPPH·的清除率從81.1%增加到96.3%,而對(duì)照組VC對(duì)DPPH·的清除率僅從19.1%增加到78.7%,并且在相同濃度下,與VC相比,長(zhǎng)白楤木根總黃酮具有更高的DPPH·清除能力。由此可見(jiàn),在一定濃度范圍內(nèi),長(zhǎng)白楤木根總黃酮對(duì)DPPH·有很好的清除作用。

圖8 長(zhǎng)白楤木根總黃酮對(duì)DPPH·的清除能力Fig.8 DPPH· scavenging ability of total flavonoidsfrom root of Aralia continentalis Kitagwa

2.3.2 長(zhǎng)白楤木根總黃酮對(duì)·OH的清除率能力 由圖9可知,隨著長(zhǎng)白楤木根總黃酮濃度的增加,黃酮提取液的·OH清除能力與質(zhì)量濃度呈正相關(guān),在黃酮濃度為0.03～0.09 mg/mL時(shí),清除率明顯上升,之后呈緩慢上升趨勢(shì),與VC相比,長(zhǎng)白楤木根總黃酮具有更高的清除·OH的能力。當(dāng)長(zhǎng)白楤木根總黃酮濃度在0.15 mg/mL時(shí),清除率最大為70.1%,而VC清除率最大為36.9%。

圖9 長(zhǎng)白楤木根總黃酮對(duì)·OH的清除率能力Fig.9 ·OH scavenging The ability of total flavonoidsfrom root of Aralia continentalis Kitagwa

圖10 長(zhǎng)白楤木根總黃酮對(duì)的清除率能力 scavenging ability of total flavonoidsfrom root of Aralia continentalis Kitagwa

3 結(jié)論