孫素靈，胡高武，王鳴，胡華軍

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院普外科，上海)

0 引言

化療致惡心嘔吐(chemotherapy-induced nausea and vomiting，CINV)是患者化療過程中常見的化療藥物副反應(yīng)之一，不僅影響患者的化療進(jìn)程和全身營養(yǎng)狀況，而且大幅度降低了腫瘤患者的生活質(zhì)量?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，目前臨床主要通過5-羥色胺受體拮抗劑聯(lián)合地塞米松抑制嘔吐，其對急性嘔吐有明顯的療效，但仍有約30%的急性嘔吐和50%的延遲性嘔吐尚未得到有效的控制[1]。腫瘤患者的生活質(zhì)量降低和生理心理負(fù)擔(dān)加重，甚至使患者拒絕進(jìn)一步治療。溫胃貼膏治療化療惡心嘔吐在臨床中已取得顯著療效，為探討該方法治療CINV 的可能作用機(jī)制。該實(shí)驗(yàn)采用家鴿腹腔注射順鉑法誘發(fā)惡心嘔吐模型，觀察家鴿嘔吐頻率、并利用RT-PCR 法檢測家鴿小腸下段組織c-kitmRNA 相對表達(dá)量，探索溫胃貼膏治療CINV 的可能作用機(jī)制，為中醫(yī)藥外治法治療CINV提供科學(xué)客觀的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 分組

取清潔健康成年家鴿50 只，體重約為400±50g，分籠飼養(yǎng)，雌雄各半，飼養(yǎng)期間自由攝食飼料和清水。保持飼養(yǎng)環(huán)境清潔通風(fēng)。采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為5 組，分別為模型組、陽性格拉司瓊對照組，高劑量組，中劑量組，低劑量組(溫胃膏貼敷高、中、低劑量組分別為人臨床劑量的12 倍，6 倍，3 倍)。

2 造模

常規(guī)喂養(yǎng)一周。家鴿腹腔注射順鉑4mg/kg，連續(xù)觀察3 天，每天給藥后，自由攝食和飲水，觀察家鴿嘔吐情況，每天觀察5h，記錄注射順鉑后家鴿初次嘔吐的時(shí)間及5h 內(nèi)的嘔吐次數(shù)。嘔吐觀察標(biāo)準(zhǔn)以家鴿兩翼稍抬，頭部向前，上下伸脖，吐食或不吐食，繼后抬頭，恢復(fù)平靜，記為一次。出現(xiàn)嘔吐，標(biāo)志造模成功。

3 方法

(1)模型組，腹腔注射與其應(yīng)注射鹽酸格拉斯瓊注射液相等量的生理鹽水(d1-4，第一天到第四天，每天同一時(shí)間相同劑量的注射)，腹腔注射順鉑4mg/kg(d2，第二天開始)，連續(xù)觀察3 天(d2-4，第二天到第四天)，每天5h。

(2)陽性對照組，腹腔注射鹽酸格拉斯瓊注射液0.24mg/kg(成人格拉司瓊40ug/kg，家鴿用藥量是成人的6 倍，藥液按1：10 稀釋后注射(d1-4，第一天到第四天，每天同一時(shí)間相同劑量的注射)，注射鹽酸格拉斯瓊1 后腹腔注射順鉑4mg/kg(d2)，第二天開始，連續(xù)觀察3 天(d2-4，第二天到第四天)，每天5h。

(3)溫胃膏貼敷組，每只家鴿腹腔注射鹽酸格拉斯瓊注射液0.24mg/kg，分大、中、小三種劑量組，0.6g/kg 0.3g/kg 0.15g/kg (成人3g/60kg，家鴿用藥量為成人的6 倍)外敷1cm2(d1-4 第一天開始到第四天)，(因家鴿無肚臍選擇家鴿胸脯后三分之一的無毛區(qū)貼藥，此處皮薄易吸收，不易被家鴿啄到，且解剖結(jié)構(gòu)上與肚臍相似)[2]。注：模型的建立和用藥劑量參照腫瘤藥物用藥指南及動物實(shí)驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)。

4 檢測家鴿小腸中c-kitmRNA 相對表達(dá)量

留取家鴿小腸，放入凍存管保存于-80 ℃ 冰箱[3]。采用RTPCR 法檢測家鴿小腸下段組織c-kitmRNA 相對表達(dá)量引物由生工合成，c-kit 上游引物5-GCCAACCAAGACAGACAAGAGG-3，下游引物 5-AAATCATCCAGGTCCAGAGCC-3(22bp)。取食管下段組織(約100mg)，用Trizol 提取總RNA，行常規(guī)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(PT-PCR)。反應(yīng)結(jié)束后核對擴(kuò)增曲線和熔解曲線，以GAPDH 為內(nèi)參，通過2-DDet 法計(jì)算小腸下段組織c-kit 的相對表達(dá)量[4]。

5 結(jié)果

表1 各組家鴿嘔吐次數(shù)

表2 各組c-kitmRNA 相對表達(dá)量比較

6 討論

化療藥物大多毒性強(qiáng)，攻擊癌細(xì)胞的同時(shí)，耗傷正氣，臟腑輸泄功能失司，氣機(jī)升降失于調(diào)暢，導(dǎo)致清氣不升，濁氣不降，水液不運(yùn)，停留胃腸，久之內(nèi)生痰濕，進(jìn)一步阻遏氣機(jī)，本虛邪盛，導(dǎo)致惡心嘔吐。溫胃貼膏采用吳茱萸，半夏，肉桂，陳皮，附子制成，諸藥配伍，散降有序，氣機(jī)暢則嘔吐止，共奏燥濕化痰，理氣止嘔之功。溫胃貼膏，通過促使局部穴位皮膚發(fā)皰，產(chǎn)生溫?zé)岬拇碳ぃ柰ń?jīng)脈，聯(lián)絡(luò)臟腑表里，扶正祛邪[5]。本次試驗(yàn)穴位采用神闕穴，因其的解剖位置在臍中，臍部的生理解剖特點(diǎn)是表皮菲薄、皮下脂肪組織少及周圍毛細(xì)血管豐富，這些特點(diǎn)均有利于藥物透皮吸收。選擇家鴿胸脯后三分之一的無毛區(qū)貼藥，此處皮薄易吸收，不易被家鴿啄到，且解剖結(jié)構(gòu)上與肚臍相似。家鴿實(shí)驗(yàn)中觀察到格拉斯瓊+大劑量組、格拉斯瓊+中劑量組和陽性對照組嘔吐次數(shù)均低于模型組，且格拉斯瓊+溫胃貼膏大劑量組嘔吐次數(shù)低于陽性對照組，因此，造模成功的家鴿在使用格拉斯瓊的基礎(chǔ)上，加用大劑量溫胃貼膏可有效減少家鴿嘔吐次數(shù)。

c-kit 是一種原癌基因[6]，編碼III 型酪氨酸激酶受體，通過與干細(xì)胞因子(SCF)結(jié)合使信號途徑激活，在ICC 生長發(fā)育及細(xì)胞表型具有重要的調(diào)節(jié)作用[7]。有研究表明，敲除大鼠小腸c-kit 基因后，胃腸運(yùn)動功能紊亂，c-kit 是ICC 特異性的標(biāo)志蛋白[8]。ICC在控制胃腸道運(yùn)動中起著重要的作用，是胃腸漫波活動的起搏器和傳道者[9]?；熕聬盒膰I吐與胃腸功能紊亂有著密不可分的關(guān)系，化療藥物可能使家鴿小腸中c-kit 基因表達(dá)量減少，進(jìn)而影響ICC 含量，導(dǎo)致胃腸功能紊亂。因此本實(shí)驗(yàn)主要通過檢測溫胃貼膏對c-kit mRNA 的表達(dá)量的影響，推測溫胃貼膏對順鉑所致惡心嘔吐家鴿可能的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，溫胃貼膏通過促進(jìn)c-kitmRNA 的表達(dá)，使ICC 含量恢復(fù)正常，進(jìn)而減輕由順鉑引起的惡心嘔吐。

本研究通過建立家鴿惡心嘔吐模型，格拉斯瓊+大劑量組、格拉斯瓊+中劑量組和陽性對照組家鴿嘔吐次數(shù)均低于模型組；格拉斯瓊+大劑量組家鴿嘔吐次數(shù)均低于陽性對照組；格拉斯瓊+大劑量組、格拉斯瓊+中劑量組和陽性對照組c-kit mRNA 的表達(dá)均高于模型組。說明溫胃貼膏可有效防治順鉑所致家鴿的惡心嘔吐，其作用機(jī)制可能是通過增加腸道c-kit 基因表達(dá)的數(shù)量，從而使腸道ICC 數(shù)目增加，趨于正常水平。腸道蠕動加快，腸道氣機(jī)調(diào)暢，溫胃貼膏的藥物對穴位持續(xù)緩慢的刺激進(jìn)而起到止吐的作用。