何田妹，晁 敏

( 1.上海海洋大學海洋生態(tài)與環(huán)境學院，上海 201306； 2. 中國水產科學研究院東海水產研究所，上海 200090)

參數的獲得是構建DEB模型不可或缺的一部分，本研究在文蛤生理學研究的基礎上通過室內實驗間接測定建立文蛤DEB模型所需的7個參數，以期為今后構建文蛤動態(tài)能量收支生長模型、量化能量在文蛤整個生活史階段的分配概況以及淺海灘涂貝類生態(tài)養(yǎng)殖容量評估奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 形狀系數 ( shape coefficient,δm)

實驗所用文蛤取自江蘇省如東縣自然海域灘涂。分別測定文蛤的殼長及軟體部組織濕重，使用游標卡尺測量殼長，用天平 ( 精度0.001 g)稱量軟體部組織濕重。軟體部組織的比重用排水法獲得為d=1.000 g·cm-3，根據公式(1)[7]回歸獲得形狀系數δm。

W=d(δmL)3

(1)

式 ( 1 ) 中，W為軟體部組織濕重 ( g ),d為軟體部組織比重 (軟體部組織濕重與體積之比,g·cm-3)，δm為形狀系數(無量綱)，L為文蛤殼長(cm)。

1.2 阿侖尼烏斯溫度(Arrhenius temperature, TA)

實驗所用文蛤清洗干凈后在實驗室循環(huán)水系統(tǒng)中暫養(yǎng)一周，然后進行實驗，文蛤相關生物學參數數據如表1所示。溫度梯度設為：10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃，同一溫度條件分為規(guī)格相同的A、B、C 3組，每組2個平行，每個平行將1個文蛤輕輕放入裝滿水的塑料瓶中，立即蓋緊瓶蓋，呼吸時間為2 h。用便攜式溶氧儀(HACH HQ400d 多參數測定儀)測定實驗前后的溶解氧。根據實驗前后的溶解氧濃度變化按公式(2)[8]計算單位時間干重耗氧率[R，mg·g-1DW·h-1]。

R=[(DO1-DO2)×V]/(Wt)

(2)

式(2)中，DO1、DO2為實驗各組實驗開始和結束時水中溶解氧的含量(mg·L-1)，V為實驗所用的塑料瓶的體積(L)，W和t分別為實驗所用文蛤的軟體部干重(g)和實驗持續(xù)時間(h)。

文蛤單位時間干重耗氧率的對數與水溫的熱力學溫度倒數的回歸計算阿侖尼烏斯溫度TA，計算公式[9]為：

lnR=a×T-1+b

(3)

阿侖尼烏斯溫度TA即為式 (3) 中斜率a的絕對值。

1.3 饑餓實驗

取同一規(guī)格的文蛤500個置于實驗室循環(huán)水系統(tǒng)中，進行饑餓實驗。文蛤生物學數據如表2所示。每7 d取文蛤5個，在溫度為 25℃條件下測定單位耗氧率，另取文蛤5個，測定總濕重、軟體部組織濕重、軟體部組織干重、軟體部組織有機物含量。軟體部組織干重是文蛤軟體部組織濕重在60 ℃的烘箱中烘3 d后的重量，軟體部組織有機物是軟體部組織干重在 450℃馬弗爐中灼燒4 h前后的質量差。饑餓實驗結束的標志為軟體部組織干重不再降低，呼吸耗氧保持穩(wěn)定。

軟體部組織干重恒定時的重量為文蛤結構物質的重量。文蛤體內單位體積存儲物質能量與單位體積結構物質能量的計算公式[8]如下：

單位體積存儲物質能量：

[EM]=k×(W0×C0-W1×C1)/V

(4)

單位體積結構物質能量：

[EG]=W1×C1×k/(Tr×V)

(5)

式(4)、式(5)中，[EM]為單位體積存儲物質能量( J·cm-3)，k為有機物能值(k=23 kJ )[5]，W0為軟體部組織干重的初始值( g )，C0為實驗初始時貝類軟體部組織有機物含量( % )，W1為實驗結束時保持恒定軟體部組織干重( g )，C1為實驗結束時貝類軟體部組織有機物含量( %)，V為軟體部組織的體積( cm3)，[EG]為單位體積結構物質能量(J·cm-3)，Tr為生長效率的轉換系數(40% )[5]。

1.4 攝食實驗

采用靜水系統(tǒng)法于25℃測定文蛤的攝食率。設置鹽度為27，扁藻 (Platymonas)濃度分別為3.00、4.00、6.00、8.00、10.00、12.00、14.00、16.00 mgPOM·L-1，每組設2個平行。每個平行選擇大、中、小 3種規(guī)格的文蛤各3個，放入容積為2.5 L的龍頭瓶中進行實驗，實驗時間為2 h。實驗前后各取1 L海水抽濾。濾膜抽濾前用蒸餾水沖洗，在450 ℃的馬弗爐中灼燒6 h后稱重W0,濾膜抽濾后用濃度為0.5 mol·L-1的甲酸銨充分漂洗后在60 ℃烘箱中烘干48 h后稱重W1，再將濾膜放入馬弗爐中450 ℃灼燒6 h后稱重W2。攝食率的計算公式如下[10]：

表1 測定耗氧率的文蛤生物學數據Tab.1 Biological parameters of M.meretrix used for oxygen consumption rate

表2 饑餓實驗文蛤生物學數據Tab.2 Biological parameters of M.meretrix in starvation experiment

攝食率：

IR=V×(C0-Ct)/(Wt)

(6)

CPOM=(W1-W2)/V

(7)

式 (6)、式(7)中，V為實驗水體體積 ( L )，W為軟體部干重 (g)，t為實驗持續(xù)時間，C0、Ct分別為實驗開始和結束時餌料的濃度，用CPOM表示 [mg·L-1，POM 為顆粒有機物 (particulate organic matter, POM )]，IR為攝食率 (mgPOM·g-1·h-1)，W1、W2值見前文。

單位時間單位體表面積最大攝食率：

(8)

單位時間單位體表面積最大吸收率：

(9)

1.5 數據處理

數據經Microsoft Excel 2010初步整理后用IBM SPSS Statistics 24.0軟件進行統(tǒng)計分析，數據以平均值±標準差( Mean±SD)表示，圖用Origin 2017軟件繪制。

2 結果與分析

2.1 文蛤形狀系數

所選文蛤殼長為2.911～4.302 cm，殼高為2.461～3.661 cm，殼寬為 1.390～2.234 cm，總濕重 6.880～23.220 g，軟體部組織濕重為1.040～3.710 g，軟體部組織干重 0.170～0.790 g。對濕肉重的立方根和殼長進行線性回歸，所得的斜率即為形狀系數 (圖1 )，結合排水法獲得軟體部的比重,由此得到文蛤的形狀系數值為0.374。

2.2 阿侖尼烏斯溫度TA

阿侖尼烏斯溫度用不同溫度下文蛤耗氧率計算得到。不同溫度文蛤耗氧率如圖2所示 :文蛤耗氧率呈現(xiàn)先升后降的趨勢，溫度為30 ℃文蛤耗氧明顯高于其他幾個溫度(P<0.05)。10～30 ℃隨著溫度的升高，文蛤的耗氧率逐漸升高，當溫度超過30 ℃后，文蛤的耗氧率開始下降。溫度為30 ℃時，耗氧率達到最大值2.78 mg·g-1DW·h-1。A、B、C 3組文蛤耗氧率對數和相應的熱力學溫度的倒數進行線性回歸 ( 圖2)，得到的回歸關系式分別為:A組:y=-5 211.39T-1+17.60(R2=0.625 2)；B組：y=-6 034.98T-1+20.61(R2=0.734 0)；C組：y=-6 301.57T-1+21.38(R2=0.707 6)。TA為線性回歸方程斜率的絕對值，獲得模型所需的阿侖尼烏斯溫度平均值為(5 849.31±328.11) K。

圖1 文蛤軟體部組織濕重與殼長的關系Fig.1 Relation between shell length(L) and somatic wet mass (W) of M.meretrix. 注：a. 殼長(L) 與軟體部組織濕重(W) 的關系；b. 殼長(L) 與軟體部濕重的立方根的關系Note: a. the relation between somatic wet mass and shell length; b. the relation between somatic wet mass and shell length

圖2 耗氧率與溫度的關系Fig.2 Relation between oxygen consumption rate and temperature注：a. 溫度對文蛤耗氧率的影響；b. A、B、C組文蛤耗氧率的阿侖尼烏斯圖Note: a. effects of temperature on oxygen consumption rate of M.meretrix；b. Arrhenius plot for the oxygen consumption rate of M.meretrix.

2.3 饑餓實驗相關參數

由圖3可以看出，隨著饑餓時間的延長，文蛤的耗氧率呈下降趨勢，至45 d后，文蛤的耗氧率幾乎不變。實驗前后文蛤的耗氧率降低了約89%，文蛤軟體部干重實驗后降低33%左右(圖4)，軟體部干重維持恒定時的值約為0.330 g。經過計算實驗前文蛤軟體部有機物含量為91.33%，實驗結束后軟體部有機物含量為82.36%。各部分的干重如圖5所示。

文蛤的軟體部組織干重在30 d后幾乎保持不變，根據實驗前后有機物的含量及有機物的能值形狀系數，得到貝類結構物質能量 [EG] 為5 682.84 J·cm-3。

貝類存儲物質能量為初始能量與饑餓后剩余的結構物質能量之差，根據式 (4) 得到存儲物質能量 [EM]為2 549.32 J·cm-3。

圖3 文蛤的耗氧率隨饑餓時間變化情況Fig.3 Changes in oxygen consumption rate ofM.meretrix during the starvation experiment

圖4 文蛤的軟體部干重隨饑餓時間變化情況Fig.4 Changes in dry flesh mass ofM.meretrix during the starvation experiment

圖5 文蛤的軟體部干重、存儲物質的干重以及結構物質的干重隨饑餓時間的變化情況Fig.5 Changes in dry mass of tissue, storage of reserves and structure ofM.meretrix during the starvation experiment

2.4 單位時間單位體表面積最大吸收率

圖6 文蛤的攝食率與初始濃度的關系Fig.6 Relationship between ingestion rate and initial food concentration of M.meretrix

3 討論

有關動態(tài)能量收支生長模型參數的估算已經有許多研究報道，涉及的物種有魚類、貝類、蟹類等，其中貝類DEB模型參數測定的研究居多，如綠唇貽貝(Pernacanaliculus)[14]、僧帽牡蠣(Saccostreacucullata)[9]、貽貝(Mytilusedulis)[6]、蝦夷扇貝(Patinopectenyessoensis)[8]等，但對文蛤動態(tài)能量收支模型參數的測定尚未見報道。

形狀系數通過殼長與軟體部組織濕重回歸得到W=(0.374L)3(R2=0.722 5)，本研究測得的形狀系數值為0.374，國外曾報道紫貽貝(M.gaiioprovincialis)形狀系數值為0.224[15]，貽貝為0.274，鳥尾蛤(Cerastodermaedule)形狀系數值為0.381[5]，國內對蝦夷扇貝的值測定為0.32。本研究結果較紫貽貝和貽貝高，而比鳥尾蛤低。有關貝類形狀系數報道顯示，δm為0.175～0.381，本研究δm在已報道范圍內。

阿侖尼烏斯溫度，其理論基于阿侖尼烏斯方程，通過該理論獲得的阿侖尼烏斯溫度已經成功應用于生物動態(tài)能量收支生長模型的構建。本研究通過耗氧率對數與熱力學溫度倒數回歸計算獲得文蛤阿侖尼烏斯溫度為(5 849.31±328.11) K。不同種生物阿侖尼烏斯溫度不同，如原綠球藻(Prochlorococcusmarinus)[16]、貽貝[5]、美洲牡蠣(Crassostreavirginica)[17]和澳洲短頸龜(Pseudemyduraumbrina)[18]阿侖尼烏斯溫度分別為7 964.5 K、5 800 K、6 920 K和19 731 K。此外，不同學者進行室內實驗對物種規(guī)格的分組情況有所差別，有的學者采用同一規(guī)格僧帽牡蠣[9]研究該物種阿侖尼烏斯溫度，有的學者采用不同規(guī)格蝦夷扇貝[8]研究其阿侖尼烏斯溫度，結果表明兩種分類方式都能較好的獲得阿侖尼烏斯溫度。本研究采用相同規(guī)格文蛤測定耗氧率，通過耗氧率計算阿侖尼烏斯溫度，有關文蛤的阿侖尼烏斯溫度尚未見報道，無法與同類結果進行比較。不同的分類獲得阿侖尼烏斯溫度值是否有差別，在今后的研究中，這是研究方向之一。另外，還可以探討其他分類方式如按不同軟體部干重等研究阿侖尼烏斯溫度, 比較不同分類之間的差別。

文蛤DEB模型參數的獲取是構建文蛤DEB模型不可缺少的一部分，有關雙殼類DEB模型的報道較多，尚未見文蛤DEB模型的有關報道。本研究通過實驗得到了建立文蛤DEB模型所需的7個參數，相關模型參數的獲得可為文蛤DEB模型構建提供基礎數據，并在文蛤養(yǎng)殖生態(tài)容量模擬研究中進一步優(yōu)化。