李修政，趙慶杰，卓小斌，董家瀟，嚴(yán)佳棟*

(1.蘇州大學(xué)附屬張家港醫(yī)院，江蘇 蘇州 215000； 2.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，上海 200433)

青藤堿(sinomenine，SIN)又名(9α,13α,14α)-7,8-didehydro-4-hydroxy-3,7-dimethoxy-17-methylmorphinan-6-one，是一種從天然植物青風(fēng)藤或毛青藤的根和莖中提取的有效成分，臨床上主要用于治療風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[1]，在中國和其它亞洲國家或地區(qū)已有一千多年的應(yīng)用歷史。近年來，隨著科研人員的不斷探索，發(fā)現(xiàn)其還具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗心律失常、器官損傷后保護(hù)作用等功效[2-5]。然而，青藤堿的諸多缺點(diǎn)，如透皮吸收差、生物利用度低、生物半衰期短、給藥劑量大、釋放組胺時(shí)刺激細(xì)胞等，會(huì)導(dǎo)致患者用藥時(shí)產(chǎn)生皮疹、白細(xì)胞減少、過敏性休克和胃腸道反應(yīng)[6-10]等副作用，雖然經(jīng)過改良的給藥劑型可以大大減小副作用，但不能徹底解決生物利用度低和半衰期短的問題[11]。為了改變這一現(xiàn)狀，科研人員對天然產(chǎn)物青藤堿的結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，并在近幾十年取得了豐碩的成果，但對于臨床的普遍使用還需進(jìn)一步的探索發(fā)現(xiàn)。

本研究的設(shè)計(jì)思想是基于計(jì)算機(jī)輔助系統(tǒng)模擬青藤堿與蛋白活性腔的結(jié)合情況[11]，發(fā)現(xiàn)青藤堿發(fā)揮作用的結(jié)合位點(diǎn)主要是A環(huán)、6位羰基、17位氮甲基等位置(圖1)。通過以上模擬的結(jié)合位點(diǎn)，以鹽酸青藤堿為起始化合物，在A環(huán)1位引入疏水性基團(tuán)，目的是增強(qiáng)青藤堿母核與模擬的蛋白活性腔內(nèi)的氨基酸位點(diǎn)的范德華力，主要選擇一類穩(wěn)定性較好的芳基基團(tuán)，進(jìn)而在芳基上連接不同取代基，旨在增強(qiáng)青藤堿的血腦屏障透過率和與靶蛋白結(jié)合的穩(wěn)定性?；谝陨显O(shè)計(jì)思想，作者首先在光和熱的條件下使苯環(huán)上的自由基發(fā)生裂解，所產(chǎn)生的自由離子與引入的芳環(huán)上的氫離子結(jié)合，得到溴代青藤堿中間體，將該中間體與芳基硼酸發(fā)生經(jīng)典的Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)，并在引入的芳基上加入各種藥效基團(tuán)，以期增強(qiáng)青藤堿的藥理活性。所引入的芳基和青藤堿可以形成穩(wěn)定的C-C鍵，使其在進(jìn)入體內(nèi)后不易被迅速代謝，從而達(dá)到延長半衰期的作用。采用1HNMR、19FNMR、LC-MS等對合成的青藤堿衍生物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，并采用報(bào)告基因法研究青藤堿衍生物對NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的影響。

圖1 青藤堿模擬蛋白位點(diǎn)Fig.1 Mimic protein sites of sinomenine

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

薄層層析硅膠(CP)，探索平臺(tái)；薄層層析硅膠板，煙臺(tái)新諾化工有限公司。

小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞，第二軍醫(yī)大學(xué)免疫研究所；脂多糖(LPS)、pGL3.5XκB-Luciferase質(zhì)粒、pRL-TK-Renilla-Luci-ferase質(zhì)粒， Sigma-Aldrich中國。

無水K2CO3(AR，批號(hào) 20131206)，上海滬上試劑有限公司；N-溴代丁二酰亞胺(AR)，上海阿拉丁生化科技有限公司；氯仿、二氯甲烷(批號(hào) 20170105)、乙醇、石油醚(AR，批號(hào)1177673)、乙酸乙酯(AR)，上海沃化化工有限公司；氨水，上海麥克林生物技術(shù)有限公司；甲苯(批號(hào)10022818)、四三苯基膦鈀(Pd(PPh3)4,damas-beta)、取代苯硼酸(damas-beta，P1076906)、甲醇(AR，批號(hào)20151225)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；青藤堿標(biāo)準(zhǔn)品，上海微晶生物試劑有限公司。

DFY-5L/40型低溫恒溫反應(yīng)浴，鞏義安宇儀器有限責(zé)任公司；2XZ-2型旋片式真空泵，上海維奇真空泵廠有限公司；98-2型磁力攪拌器，上海司樂儀器有限公司；R-3型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，Buchi；ME203/02型電子天平，上海阿達(dá)瑪斯有限公司；KY2360型精密電子天平，上海良平儀器有限公司；85-2型磁力恒溫?cái)嚢杵鳎虾Ｖ境呻娖饔邢薰?；分析液相色譜(Reservoir Tray L20304301732 SL)，Shimadzu Corporation；OSB-2100型水浴鍋、DLSB-H型低溫冷卻循環(huán)泵(-40～-70 ℃)、SHZ-ⅢA型循環(huán)水式多用真空泵，上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司；半制備液相色譜(SPD-10R VP，C2099 42 71354 US)，Shimadzu USA Manufacturing Inc；LABCONCO冷凍干燥器，上海實(shí)維實(shí)驗(yàn)儀器技術(shù)有限公司；AS30600BDT型超聲波清洗器，上海超聲波儀器廠；AC-P300型核磁共振儀、AC-P400型核磁共振儀、AC-P500型核磁共振儀、AC-P600型核磁共振儀，Bruker Spectmspin；ZF-I型三用紫外分析儀。

1.2 青藤堿衍生物的合成

首先通過氨水對鹽酸青藤堿(1)進(jìn)行大量游離，得到青藤堿(2)；然后根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，嘗試Wohl-Ziegler 反應(yīng)，將原料青藤堿與N-溴代丁二酰亞胺(NBS)加熱回流6 h，經(jīng)柱層析純化，收率僅21%。經(jīng)改進(jìn)，將NBS在室溫下分兩次加入，反應(yīng)全過程持續(xù)6 h，得到收率60%[12]的中間體溴代青藤堿(3)，并進(jìn)行1HNMR確認(rèn)。將中間體溴代青藤堿(3)和芳基硼酸進(jìn)行Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)，最終確定在甲苯-乙醇(1∶1，體積比)、Pd(PPh3)4、K2CO3的條件下反應(yīng)完全，合成路線見圖2。

4a～4l，R=3-Me-C6H4，3,5-Me-C6H3，4-CN-C6H4，4-OH-C6H4，3-Ph-C6H4，3,5-tBu-C6H3，2-NH2-C6H4，

1.2.1 青藤堿(2)的合成

稱取鹽酸青藤堿(1)6.7 g (20 mmol)溶于加有二氯甲烷(DCM)的分液漏斗中，加入適量氨水，將有機(jī)相反復(fù)萃取3次，合并有機(jī)相，經(jīng)干燥、濃縮，得到白色固體青藤堿(2)，收率為97%。

1.2.2 溴代青藤堿(3)的合成

稱取青藤堿(2)990 mg(3 mmol)置于100 mL圓底燒瓶中，用20 mL氯仿溶解；加入NBS 293 mg(1.65 mmol)，室溫?cái)嚢?～4 h，再補(bǔ)加1.65 mmol NBS，全程室溫?cái)嚢? h。經(jīng)薄層色譜法(TLC)檢測反應(yīng)完全后，加入適量水淬滅反應(yīng)。用20 mL水反復(fù)萃取3次，鹽水洗滌，合并有機(jī)相，經(jīng)無水硫酸鈉干燥、濃縮，得到褐紅色溴代青藤堿粗品。采用干法上樣進(jìn)行柱層析純化，洗脫劑使用DCM-MeOH(30∶1)從小極性緩慢放大，得到關(guān)鍵中間體溴代青藤堿(3)，深黃色粉末，收率為60%。1HNMR(300 MHz,CDCl3),δ:6.94(s,1H),5.45(d,J=1.6 Hz,1H),5.32(s，1H),4.37～4.32(d,J=15.6 Hz,1H),3.84(s,3H),3.52(s,3H),3.31(s,1H),3.10～3.00(m,2H),2.58(dd,J=20.4 Hz、9.1 Hz，2H),2.48(s,3H),2.08 (d,J=4.4 Hz,1H),1.98(d,J=3.3 Hz,2H)。

1.2.3 1-苯甲基青藤堿(4a)的合成

稱取溴代青藤堿(3) 200 mg(0.5 mmol)和Pd(PPh3)458 mg(0.05 mmol)置于50 mL單口反應(yīng)管中，用10 mL甲苯將其溶解，然后將芳基硼酸82 mg(0.6 mmol)(以3-甲基苯硼酸的操作步驟為例，其它芳基硼酸操作步驟相同，但反應(yīng)時(shí)間和催化劑用量適時(shí)調(diào)整)的乙醇(10 mL)溶液加入到混合液中，最后加入1.1 eq.的K2CO3，回流20 h，整個(gè)反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行，TLC監(jiān)測反應(yīng)完成，加入飽和NaHCO3淬滅，DCM反復(fù)萃取3次，無水硫酸鈉干燥，合并有機(jī)相，濃縮后進(jìn)行柱層析，用DCM-MeOH(50∶1)洗脫，得到淡黃色固體4a173 mg，收率為82.4%。

同法制備目標(biāo)化合物4b～4l，包括引入空間位阻較大的芳基，例如萘環(huán)、菲環(huán)、芘環(huán)等。共合成12個(gè)青藤堿衍生物。

2 結(jié)果與討論

2.1 青藤堿衍生物的結(jié)構(gòu)表征

采用1HNMR、19FNMR和LC-MS等對目標(biāo)化合物4a～4l進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，其收率及表征數(shù)據(jù)如下：

化合物4a：收率82.4%。1HNMR (400 MHz，CDCl3),δ:7.32～7.28(dd,J=10.6 Hz、4.4 Hz,1H),7.18～7.17(d,J=7.6 Hz,1H),6.98 ～ 6.95(m，2H),6.58(s,1H),5.46～5.45(d,J=1.6 Hz,1H),4.45～4.41(d,J=15.5 Hz,1H),3.80(s,3H),3.55(s,3H),3.39～3.33(d,J=22.2 Hz,2H),2.86～2.83(d,J=11.2 Hz,1H),2.76～2.63(m,2H),2.57～2.53(d,J=15.6 Hz,1H),2.45(s,3H),2.40 (m，3H),2.32～2.25(td,J=11.8 Hz、4.4 Hz，1H)，2.13(dt,J= 23.6 Hz、7.9 Hz,2H)，2.29 (td,J=11.8 Hz、4.4 Hz,1H)，2.18～2.07(dt,J=23.6 Hz、7.9 Hz,2H)；LC-MS，m/z:420.71[M+H]+。

化合物4b：收率79.4%。1HNMR(500 MHz,CDCl3),δ:7.00(s,1H),6.79(s,2H),6.56(s,1H),5.47(d,J=1.8 Hz,1H),4.45～4.42(d,J=15.5 Hz，1H),3.79(s,3H),3.55(s,3H),3.29～3.21 (d,J=40.1 Hz，2H)，2.77～2.73(m,2H)，2.60～2.51(m,2H),2.40(s,3H)，2.36(s,6H),2.27～2.17(m,1H),2.10～2.01(m,2H)；LC-MS，m/z:434.61[M+H]+。

化合物4c：收率61.6%。1HNMR (400 MHz,CDCl3),δ:7.72～7.70 (d,J=8.2 Hz,2H),7.33～7.31(d,J=8.1 Hz,2H),6.53(s,1H),5.47(d,J=1.7 Hz,1H),4.44～4.40 (d,J=15.5 Hz,1H),3.82 (s,3H),3.55(s,3H),3.27 (s,1H),3.19 (s,1H),2.76～2.65(m,1H),2.64～2.54(m,2H),2.52 (s,1H)，2.37 (s,3H),2.16 (td,J=11.5 Hz、4.6 Hz,1H),2.05 (d,J=2.5 Hz,2H)；LC-MS，m/z:431.68[M+H]+。

化合物4d：收率39.7%。1HNMR(500 MHz,CDCl3),δ:7.03～7.02(d,J=8.4 Hz,2H),6.87～6.85(d,J=8.4 Hz,2H),6.56(s,1H),5.48 (d,J=1.8 Hz，1H),4.45～4.42(d,J=15.6 Hz,1H),3.80(s,3H),3.53(s,3H),3.20～3,19 (d,J= 3.8 Hz,1H),3.09(s,1H),2.74 (d,J=18.7 Hz,1H),2.64 (dd,J=11.9 Hz、2.5 Hz,1H),2.56～2.47(m,1H),2.36 (s,1H),2.18 (td,J=12.2 Hz、3.3 Hz,1H),2.03(d,J=12.0 Hz,1H),1.97(dd,J=12.6 Hz、4.3 Hz,1H)；LC-MS，m/z：422.31[M+H]+。

化合物4e：收率51.3%。1HNMR(400 MHz,CDCl3),δ:8.51(s,1H),8.09～8.05(t,J=9.1 Hz,2H),7.56～7.37(m,4H),7.29～7.26(d,J=8.4 Hz，2H),6.63(s,1H),5.3 (s,1H),4.51～4.47(d,J=15.6 Hz,1H)，3.76(s,3H),3.55(s,3H),3.15(s,1H),3.00(s,1H),2.79～2.77(d,J=11.0 Hz,1H),2.59～2.55(d,J=15.6 Hz,1H),2.39(t,J=10.8 Hz,2H),2.29(d,J=19.0 Hz,1H),2.18(d,J=12.6 Hz，1H),2.11(s,3H),2.04(s,1H)；LC-MS，m/z：482.31[M+H]+。

化合物4f：收率59.2%。1HNMR(400 MHz,CDCl3),δ:7.42(s,1H),7.02(s,2H),6.62(s,1H),5.44～5.43(d,J=1.5 Hz,1H),4.45～4.41(d,J=15.5 Hz，1H),3.81(s,3H),3.52(s,3H),3.28～3.20(d,J=28.8 Hz,2H),2.79～2.74(m,2H),2.56～2.52(d,J=15.7 Hz,1H)，2.50～2.45(m,1H),2.41(s,3H),2.3～2.2 (td,J=11.7 Hz、3.9 Hz,1H),2.11～2.01(m,2H),1.35(s,18H)；LC-MS，m/z:518.31[M+H]+。

化合物4g：收率81%。1HNMR(500 MHz,CDCl3),δ:7.20～7.16(td,J=7.8 Hz、1.5 Hz,1H),6.85～6.73(m,2H),6.55～6.54(d,J=6.4 Hz,2H)，5.54～5.43(m,1H),4.44～4.35(dd,J= 31.2 Hz、15.6 Hz,1H)，3.80～3.78(t,J=4.5 Hz,3H),3.53～3.49(m,3H),3.37(s,1H)，3.20～3.08(m,1H),3.03～3.00(m,1H),2.77～2.6 (dd,J=61.7 Hz、18.7 Hz,1H),2.57～2.52(m,2H),2.47～2.38(m,1H)，2.27(s,2H),2.18～2.07(m,1H),2.03 (dd,J=21.0 Hz、7.6 Hz,1H),1.92(ddd,J=16.7 Hz、10.3 Hz、3.6 Hz,1H)；LC-MS，m/z:482.31[M+H]+。

化合物4h：收率47.4%。1HNMR(400 MHz,CDCl3),δ:7.87(d,J=23.6 Hz,1H),7.65(d,J=18.9 Hz,2H),6.52(s,1H),5.50(s,1H),4.41～4.37(d,J=15.7 Hz,1H),3.79(s,3H),3.47(d,J=21.0 Hz,3H),3.13(s,1H),3.00(s,1H),2.60～2.56(d,J=18.8 Hz,2H),2.48～2.44(d,J=15.7 Hz,1H),2.38～2.32(dd,J=18.1 Hz、4.9 Hz,1H),2.29(s,3H),2.03(d,J=8.6 Hz,1H),1.99(d,J=13.0 Hz,1H),1.94～1.86(m,1H);19FNMR(376 MHz,CDCl3),δ:-62.81(s)；LC-MS，m/z:542.21[M+H]+。

化合物4i：收率68.0%。1HNMR(400 MHz,CDCl3),δ:7.38～7.36(d,J=8.3 Hz,2H),7.13～7.11(d,J=8.2 Hz,2H),6.51(s,1H),5.47(s,1H),4.43～4.40(d,J=15.5 Hz,1H),3.79(s,3H),3.53(s,3H),3.11～3.10(d,J=3.8 Hz,1H)，3.00 (s，1H),2.67～2.62(d,J=18.5 Hz，1H),2.56～2.52(m,2H),2.43～2.37(dd,J=18.5 Hz、5.3 Hz,1H),2.29(s,3H),2.06～2.00(m,2H),1.89(td,J=12.6 Hz、4.3 Hz,1H)；LC-MS，m/z:444.1[M+H]+。

化合物4j：收率80.8%。1HNMR(500 MHz,CDCl3),δ:8.80～8.73(m,2H),7.94～7.88(m,1H),7.72～7.64(m,4H),7.54～7.49(m,1H),7.43～7.40(d,J=7.6 Hz,1H),6.72～6.70(d,J=8.5 Hz,1H),5.41～5.38(dd,J=13.0 Hz、1.7 Hz,1H),4.52～4.47(dd,J=15.4 Hz、6.6 Hz,1H),3.80～3.79(d,J=6.8 Hz,3H),3.62～3.55(d,J=33.8 Hz,3H),3.07～3.06(m,2H),2.74(ddd,J=36.3 Hz、11.9 Hz、2.6 Hz,1H),2.66～2.50(m,1H),2.39(ddd,J=12.9 Hz、9.9 Hz、3.8 Hz,1H),2.26(s,1H),2.15(s,1H),2.05(dd,J=12.5 Hz、4.2 Hz,1H)；LC-MS，m/z:506.7[M+H]+。

化合物4k：收率62.2%。1HNMR(400 MHz,CDCl3),δ:8.26～8.20(m,2H),8.16～8.14(d,J=7.9 Hz,1H),8.11(s,2H),8.03～8.00(m,1H),7.89～7.86(dd,J=11.9 Hz、8.6 Hz,1H),7.70～7.66(t,J=7.3 Hz,1H),7.47～7.45(d,J=9.1 Hz,1H),6.76～6.73(d,J=9.8 Hz，1H),5.37(s,1H),4.51～4.47(d,J=15.6 Hz,1H),3.82～3.80(d,J=7.0 Hz,3H),3.67(s,2H),3.55(s,1H),3.24～3.21(d,J=12.5 Hz,1H),3.11～3.08(d,J=13.5 Hz,1H),2.88～2.76(dd,J=39.6 Hz、11.3 Hz,1H),2.60～2.56(d,J=15.5 Hz,1H)，2.50～2.38(dt,J=28.6 Hz、14.2 Hz,2H),2.27(d,3H),2.19～2.14(m,2H),2.10～2.09(d,J=3.8 Hz,1H)；LC-MS，m/z：530.3[M+H]+。

化合物4l：收率74.5%。1HNMR(300 MHz,CDCl3),δ:8.61～8.47 (m，2H)，7.56～7.52 (dt,J=7.8 Hz、1.9 Hz，1H),7.39～7.34 (dd,J=7.8 Hz、4.9 Hz，1H)，6.55 (s，1H)，5.45～5.45 (d,J=2.0 Hz,1H),4.45～4.40(d,J=15.5 Hz,1H),3.81(d,J=3.2 Hz,2H),3.52(s,1H)，3.46(s,1H),3.27(d,J=23.5 Hz,1H),2.74(d,J=11.4 Hz,1H),2.66～2.57(m,1H),2.53(d,J=15.6 Hz,1H),2.38(s,1H)，2.26～2.14(m,1H),2.06(dd,J=9.4 Hz、3.5 Hz,1H)；LC-MS，m/z:407.21[M+H]+。

2.2 青藤堿衍生物的體外抗炎活性

相關(guān)藥理學(xué)研究表明，青藤堿通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)的結(jié)合活性來降低TNF-α在mRNA上的表達(dá)，在NF-κB參與的炎癥反應(yīng)中起到積極作用，而NF-κB轉(zhuǎn)錄因子家族與炎癥環(huán)境中眾多基因的表達(dá)調(diào)控密切相關(guān)[11]。采用報(bào)告基因法研究青藤堿衍生物對NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的影響，將RAW264.7細(xì)胞轉(zhuǎn)染pGL3.5XκB-Luciferase報(bào)告基因24 h后，將預(yù)先加入藥物青藤堿及其衍生物(5 μL、10 μL·mL-1)處理3 h后，加入LPS(1 μL·mL-1)刺激6 h，可見LPS顯著增強(qiáng)NF-κB轉(zhuǎn)錄活性，同時(shí)設(shè)立空白對照組和只加入LPS的對照組。采用熒光素酶檢測法(Luciferase Assay)進(jìn)行檢測，記錄并分析數(shù)據(jù)。最后用TK報(bào)告基因校正，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,結(jié)果見表1。

由表1可知，所合成的青藤堿衍生物對NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性均有一定的體外抑制作用。

表1 青藤堿衍生物對LPS誘導(dǎo)的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的影響

Tab.1 Effect of sinomenine derivatives on the transcription activity of NF-κB induced by LPS

2.3 討論

從最初的計(jì)算機(jī)與蛋白P50的活性腔模擬位點(diǎn)入手，發(fā)現(xiàn)青藤堿與蛋白結(jié)合不穩(wěn)定(圖3a)，這可能是青藤堿存在諸多缺點(diǎn)的原因之一。我們成功設(shè)計(jì)并合成了一系列新型青藤堿衍生物，并初步評價(jià)了其對LPS誘導(dǎo)的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用，與青藤堿相比，合成的青藤堿衍生物均在不同程度上提高了青藤堿的抗炎活性?；衔?b和4h的抗炎活性高于其它衍生物(表1)，且都是在苯硼酸的間位取代，結(jié)合課題組之前的研究，推測在間位取代時(shí)青藤堿衍生物可能更容易與蛋白作用靶點(diǎn)結(jié)合，或者該衍生物發(fā)揮作用時(shí)與靶點(diǎn)結(jié)合更加穩(wěn)定。為了解釋這個(gè)結(jié)果，課題組將間位取代的衍生物與蛋白P50進(jìn)行對接模擬(圖3b)，結(jié)果顯示，青藤堿結(jié)構(gòu)骨架與蛋白活性腔的氨基酸主要集中在精氨酸(Arg-154、Arg-161)、谷氨酸(Glu-157)、酪氨酸(Tyr-163)區(qū)域，而間位取代的青藤堿衍生物與Tyr-163有較穩(wěn)定的結(jié)合，形成π-π共軛體系，使整體結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，從而提高生物活性，延長半衰期。另外，通過化合物4j、4k，并結(jié)合之前的研究發(fā)現(xiàn)，在1位引入大基團(tuán)，青藤堿衍生物的抗炎活性不斷降低，表明空間位阻對該結(jié)構(gòu)有一定的影響。通過其它衍生物的性質(zhì)可以發(fā)現(xiàn)，芳環(huán)上所連接的電子基團(tuán)的性質(zhì)，對藥物的脂水分配系數(shù)、與靶點(diǎn)形成氫鍵的能力等都密切相關(guān)。在后續(xù)研究中，可以更加清楚地探討炎癥與取代基之間的構(gòu)效關(guān)系，為青藤堿的廣泛應(yīng)用和機(jī)制研究提供參考。

圖3 修飾前(a)后(b)結(jié)合位點(diǎn)對照圖Fig.3 Comparison map of binding sites before(a) and after(b) modification

3 結(jié)論

通過計(jì)算機(jī)輔助系統(tǒng)，模擬青藤堿與蛋白P50活性腔周邊對接情況，以鹽酸青藤堿為起始化合物，先發(fā)生Wohl-Ziegler反應(yīng)，再通過鈀催化的Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)對其進(jìn)行修飾，得到12個(gè)新型青藤堿衍生物，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1HNMR、19FNMR、LC-MS等表征；采用報(bào)告基因法研究青藤堿衍生物對NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的影響。12個(gè)青藤堿衍生物對NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性均有一定的抑制作用，且抗炎活性優(yōu)于青藤堿對照品。對青藤堿A環(huán)1位進(jìn)行修飾可以提高抗炎活性，證明該作用靶點(diǎn)可進(jìn)行深入探討研究。