黃愛瓊

【摘要】 目的 探究核酸檢測（NAT）在獻(xiàn)血者標(biāo)本內(nèi)乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）檢測中的應(yīng)用價值。方法 51份獻(xiàn)血者乙肝檢驗可疑標(biāo)本， 所有標(biāo)本均分別施以電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECLIA）、酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）以及NAT檢測。以ECLIA檢測結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)， 對比其余兩種檢測方法對HBV檢測的準(zhǔn)確率、靈敏度和特異度。結(jié)果 ECLIA檢測結(jié)果顯示， 51份獻(xiàn)血者乙肝檢驗可疑標(biāo)本中HBV檢測陽性17例， 陰性34例， HBV陽性檢出率為33.33%。NAT對HBV檢測的準(zhǔn)確率、靈敏度、特異度依次為98.04%、100.00%、97.06%， ELISA對HBV檢測的準(zhǔn)確率、靈敏度、特異性依次為76.47%、70.59%、79.41%， NAT對HBV檢測的準(zhǔn)確率、靈敏度、特異度均明顯高于ELISA， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 乙肝患者HBV檢測中采用NAT可有效提高檢測特異度、敏感度和準(zhǔn)確率， 減少窗口期， 提高檢測安全性， 值得臨床信賴和進(jìn)一步推廣。

【關(guān)鍵詞】 核酸檢測;酶聯(lián)免疫吸附測定法;乙型肝炎;乙型肝炎表面抗原

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.14.021

乙肝是一種由病毒引發(fā)的傳染病， 臨床表現(xiàn)為食欲減退、惡心、上腹部不適、肝區(qū)痛、乏力， 患者肝功能明顯下降， 該疾病若不能被有效控制可能導(dǎo)致多種肝臟疾病如肝硬化等[1]。截止2018年， 全球約有乙肝感染者2.57億， 我國約有乙肝感染者9000萬， 對于該疾病的快速診斷和治療已成為全球性公共衛(wèi)生問

題[2]。HBV為一種反轉(zhuǎn)錄病毒及DNA病毒， 乙肝表面抗原（HBsAg）為HBV感染的診斷標(biāo)志， 對其精準(zhǔn)判斷可以對乙肝進(jìn)行快速診斷[3]。HBV可經(jīng)血及血液制品傳播， 對輸血安全構(gòu)成威脅， 同時HBV感染是社會上一個比較敏感的問題， 感染者在學(xué)習(xí)、生活和工作中， 尤其是一些特殊的崗位以及行業(yè)會受到限制。

因而， 準(zhǔn)確診斷是否感染HBV具有重要的臨床意義。我國現(xiàn)行的獻(xiàn)血法明確規(guī)定， HBsAg陽性血液不得用于臨床輸血。乙肝檢測存在一個窗口期的難題， 為了減少受血者通過輸血感染病毒的風(fēng)險， 保證臨床用血的安全。ELISA作為一種較早的檢測方法， NAT與其存在一定的差異， 為探究NAT應(yīng)用于獻(xiàn)血工作中HBV檢測中的價值， 現(xiàn)以本中心2018年1月～2019年3月收集的51份獻(xiàn)血者乙肝檢驗可疑標(biāo)本作為研究對象， 對比ELISA和NAT對HBV檢測的準(zhǔn)確率、靈敏度和特異度， 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2018年1月～2019年3月本中心收集的51份獻(xiàn)血者乙肝檢驗可疑標(biāo)本， 所有獻(xiàn)血者均符合現(xiàn)行的衛(wèi)生部（現(xiàn)衛(wèi)健委）發(fā)布的《獻(xiàn)血者健康檢查要求》（GB18467-2001）。獻(xiàn)血者年齡18～50歲， 平均年齡（29.32±6.90）歲;男24例， 女27例。

1. 2 方法 所有標(biāo)本均分別施以ECLIA、ELISA以及NAT檢測。所有獻(xiàn)血者標(biāo)本均分別取3份靜脈血， 各5 ml， 分別置于EDTA-K2抗凝管和核酸專用管中， 分別進(jìn)行血清學(xué)檢查和相應(yīng)的診斷檢測[4]。

1. 3 儀器與相關(guān)試劑 檢測儀器：離心機， 酶標(biāo)儀， 羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀， 羅氏Roches201核酸檢測儀器， 酶聯(lián)免疫檢測分析儀（瑞士Hamilton FAME24/30）， 自動酶聯(lián)免疫檢測加樣儀（瑞士Hamilton， STAR）。所用試劑為北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供的HBsAg血清學(xué)標(biāo)志物檢測試劑盒、羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀配套試劑、羅氏ROCHEs201核酸檢測試劑。

1. 4 觀察指標(biāo) 以ECLIA檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)， 對比兩種檢測方法對HBV檢測的準(zhǔn)確率、靈敏度和特異度。

1. 5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

ECLIA檢測結(jié)果顯示， 51份獻(xiàn)血者乙肝檢驗可疑標(biāo)本中HBV檢測陽性17例， 陰性34例， HBV陽性檢出率為33.33%。NAT對HBV檢測的準(zhǔn)確率、靈敏度、特異度均明顯高于ELISA， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1， 表2， 表3。

3 討論

HBV由禽嗜肝DNA病毒屬、正嗜肝DNA病毒屬組成， 正嗜肝DNA病毒是引起乙肝的主要菌屬[5]。近年來， 隨著我國醫(yī)療科技、基因檢測技術(shù)的不斷發(fā)展， 基因診斷在疾病的治療中發(fā)揮著重要作用， 提取核酸是基因診斷成功的關(guān)鍵所在。乙肝的血清學(xué)檢查是檢查肝炎病毒的金標(biāo)準(zhǔn)， 主要針對病毒表面抗原的檢測[6]。HBsAg、乙肝表面抗體（抗-HBs）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（抗-HBe）、乙肝核心抗體（抗-HBc）被稱為是乙肝五項， 是HBV感染常用的檢測指標(biāo)[7]。如在乙肝者血液檢查中檢測出HBV的HBsAg、HBeAg、抗-HBc為陽性， 在臨床上稱為“大三陽”;在其血液中檢測出HBV的HBsAg、抗-HBe、抗-HBc為陽性， 在臨床上稱為“小三陽”[8]。HBV的主要傳播途徑是血液傳播， 包括血制品和輸血兩方面， 其次是母嬰傳播， 即在分娩前后， 母體攜帶HBV， 并將HBV傳染給新生兒， 母乳喂養(yǎng)也會傳播HBV[9]。

ELISA是臨床檢測HBV常用方法之一， 方便、快捷、簡單、準(zhǔn)確率較高， 但ELISA的檢查存在一定的窗口期， 患病初期可能因病毒水平低而引起假陰性結(jié)果， 漏診率較高。NAT是近幾年逐漸推廣的診斷技術(shù)， 可從基因水平進(jìn)行病毒DNA檢測， 準(zhǔn)確率高， 可有效縮短窗口期， 有效彌補了ELISA的不足， 同時降低病毒經(jīng)血液傳播的風(fēng)險， 安全性更高[10]。NAT是直接檢測病毒核酸， 視為降低血清學(xué)窗口期漏檢風(fēng)險最直接、最可靠的方法， 降低輸血感染的風(fēng)險， 同時減少血液浪費。ECLIA為HBV檢查的常用方法， 通過三聯(lián)吡啶釕與蛋白質(zhì)、半抗原激素、核酸等各種化合物結(jié)合， 對HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc進(jìn)行檢查。ECLIA在免疫檢驗期間沒有外來光源介入， 消除檢驗中的光散射問題， 消除噪音信號干擾， 提高HBV標(biāo)志物檢驗靈敏度。

綜上所述， 乙肝患者HBV檢測中采用NAT可有效提高檢測特異度、敏感度和準(zhǔn)確率， 減少窗口期， 提高檢測安全性， 值得信賴， 并進(jìn)一步在血站推廣， 提高用血安全。

參考文獻(xiàn)

[1] 李俊英， 王藝芳， 葛文超， 等. 一種核酸檢測系統(tǒng)應(yīng)用于血液檢測前的性能確認(rèn). 中國輸血雜志， 2019， 32（1）：73-75.

[2] 吳曉敏， 仝巧云， 劉偉. 慢性乙型肝炎的免疫治療. 臨床肝膽病雜志， 2019， 35（11）：2569-2572.

[3] 楊華軍， 甘業(yè)美. HBsAg ELISA-/NAT+的HBV血清學(xué)模式和病毒變異分析. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志， 2017， 38（18）：2569-2572， 2575.

[4] 王志宏， 李輝. 核酸檢測法對血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒的檢測價值分析. 河北醫(yī)學(xué)， 2016， 22（12）：2097-2099.

[5] 董劍， 許小華. 乙肝病毒DNA檢測2種不同核酸提取方法的性能驗證情況分析. 醫(yī)療衛(wèi)生裝備， 2019， 40（6）：40-43.

[6] 周丹. 血清纖維化標(biāo)志物檢測評估慢性丁型肝炎肝纖維化程度的臨床意義. 中國實驗診斷學(xué)， 2019， 23（3）：408-410.

[7] 劉宓， 魏興， 王偉， 等. 慢性乙肝患者病毒血清學(xué)指標(biāo)與HBV DNA及肝酶的相關(guān)性分析. 中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2015， 25（21）：3676-3678， 3684.

[8] 楊傳信. PreS1抗原和HBV血清學(xué)標(biāo)志物與HBV DNA的相關(guān)性及臨床意義. 臨床輸血與檢驗， 2019， 21（1）：53-55.

[9] 金建懷， 許友山， 陳波， 等. 化學(xué)發(fā)光法檢測HBsAg在血液初篩中的應(yīng)用評估. 中國輸血雜志， 2019， 32（7）：707-709.

[10] 何麗葦， 陳會欣. 乙肝病毒外膜大蛋白檢測在臨床診斷與治療中的意義. 臨床血液學(xué)雜志， 2018， 31（8）：588-592.

[收稿日期：2020-02-12]