文 飛，李 志，趙 敏，羅開源，穆建穩(wěn)*

（1.六盤水市鐘山區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 六盤水 553000；2.六盤水市鐘山區(qū)都市型現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)園區(qū)管理委員會，貴州 六盤水 553000；3.六盤水市山地特色生態(tài)產(chǎn)品研究中心，貴州 六盤水 553000；4.貴陽海關(guān)出入境檢驗檢疫綜合技術(shù)中心國家果蔬檢測重點實驗室（六盤水），貴州 六盤水 553000）

猴頭菇（Hericium erinaceus）屬于珍稀食用菌，由于食用菌中的基質(zhì)比蔬菜復(fù)雜，除含有脂肪外，還含有多糖、蛋白質(zhì)等成分[1-3]，其前處理過程比蔬菜較為復(fù)雜。由于其生產(chǎn)過程中存在病蟲害，一些菇農(nóng)為了控制病蟲害，不可避免使用各種農(nóng)藥[4-5]，從而造成食用菌農(nóng)藥殘留，影響人體健康和食用菌產(chǎn)品的出口。目前，我國在農(nóng)產(chǎn)品方面的農(nóng)藥殘留檢測方法主要有氣相色譜法（gas chromatography，GC）[6-7]、高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）[8-10]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）[11-12]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）[13-14]，前兩種方法在檢測方面存在靈敏度低和假陽性，且對于基質(zhì)較為復(fù)雜的樣品，不能準(zhǔn)確定性、定量分析[15]，而氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法不僅具有高靈敏度和高分辨的特點，而且能同時快速檢測多個樣品并進行定性、定量檢測分析，極大地提高了農(nóng)殘檢測效率[16-17]。

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（gas chromatography-tandem mass spectrometry，GC-MS/MS）法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatographic-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）法已成為我國國家標(biāo)準(zhǔn)檢測農(nóng)產(chǎn)品中果蔬類農(nóng)藥殘留主要方法。近年來，已有相關(guān)學(xué)者報道利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定食用菌中的農(nóng)藥殘留分析研究，如戚文華等[18]利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法建立了測定鮮香菇中25種有機磷農(nóng)藥殘留分析的檢測方法；白冰等[19]采用固相萃?。╯olid phase extraction，SPE）對新鮮雙孢蘑菇和香菇進行萃取并通過氨基柱凈化方式建立了氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雙孢蘑菇和香菇中的67種農(nóng)藥殘留分析方法。韓梅等[15]通過凝膠滲透色譜凈化，采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測香菇中6種氨基甲酸酯類（速滅威、仲丁威、抗蚜威、克百威、三羥基克百威、甲萘威等）農(nóng)藥殘留。楊曉鳳等[20]報道了利用氣質(zhì)色譜聯(lián)用檢測食用菌中干木耳、干茶樹菇和鮮金針菇、鮮平菇、鮮雙胞菇的農(nóng)藥殘留。

目前關(guān)于食用菌的農(nóng)殘檢測報道主要以新鮮香菇、雙孢蘑菇、平菇、木耳、金針菇的農(nóng)殘為主，還鮮見以氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定猴頭菇中的農(nóng)藥殘留分析報道，因此，本研究以氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對猴頭菇中16種有機農(nóng)藥殘留進行測定，以期為猴頭菇農(nóng)藥殘留的快速檢測研究提供參考，以滿足日常食用菌農(nóng)藥殘留檢測分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮猴頭菇：由六盤水市大河食用菌基地提供。

16種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（100 μg/mL）：中國計量科學(xué)研究院；乙腈、正己烷、丙酮、甲苯（均為色譜純）：美國飛世爾（Fisher）公司；氯化鈉、無水硫酸鎂（均為分析純）：國藥集團化學(xué)試劑有限公司；0.45 μm有機過濾膜：美國Millipore 公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

TSQTM9000氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：賽默飛世爾科技（中國）有限公司；TGL-16M臺式高速冷凍離心機：上海盧湘儀離心機儀器有限公司；DLAB D-500 均質(zhì)/分散機：大龍興創(chuàng)實驗儀器（北京）有限公司；恒奧HSE-12B固相萃取儀：北京東南儀誠實驗室設(shè)備有限公司；DZKW-D-6數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋：上海楚柏實驗室設(shè)備有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品的制備

猴頭菇樣品經(jīng)勻漿機粉碎，混勻成均勻漿狀，備用。

1.3.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取10 g勻漿試樣（精確至0.000 1 g）于50 mL的離心管中，加入15 mL乙腈、5 g氯化鈉，旋渦振蕩10 min，于5 000 r/min離心5 min，收集上清液于茄型瓶中，殘渣再用15 mL乙腈重復(fù)提取一次，離心，合并兩次上層有機相，在40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)濃縮至1 mL左右，待凈化。

凈化：在固相萃取柱中加入2 cm的無水硫酸鈉，再加入10 mL乙腈-甲苯（3∶1，V/V）混合液對固相萃取柱進行活化，舍棄流出液，放入固定架上，將上述樣品濃縮液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中，用2 mL乙腈-甲苯（3∶1，V/V）混合液洗滌樣品瓶，并將洗滌液移入柱中，重復(fù)3次，再用25 mL乙腈-甲苯（3∶1，V/V）混合液洗滌小柱，收集上述所有洗脫液轉(zhuǎn)移至50 mL茄型瓶中，40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1 mL左右，加入5 mL正己烷進行溶劑交換，再次重復(fù)上述操作，混勻后，過0.45 μm有機濾膜后，定容至1 mL，待氣相色譜-質(zhì)譜測定分析。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

參照文獻[21]方法進行質(zhì)量濃度為10 μg/mL混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制。以質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，定量離子對的峰面積（y）為縱坐標(biāo)進行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。

1.3.4 氣相色譜-質(zhì)譜條件[22]

氣相色譜條件：毛細(xì)管柱DB-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；升溫程序：初始溫度40 ℃，保持1 min，以30 ℃/min的速率升溫至130 ℃，再以5 ℃/min的速率升溫至250 ℃，最后以10 ℃/min的速率升溫至300 ℃，保持5 min；載氣為氦氣（He）（純度≥99.999%），流速1.2 mL/min；進樣口溫度290 ℃；進樣量1.0 μL；進樣方式：不分流進樣。

質(zhì)譜條件：電離方式為電子電離（electronic ionization，EI）源；電子能量70 eV；離子源溫度230 ℃；GC-MS接口溫度280 ℃；駐留時間2.5 min；溶劑延遲時間3 min；質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測（multiple reaction monitoring，MRM）參數(shù)見表1。

表1 16種農(nóng)藥組分CAS號、多反應(yīng)監(jiān)測模式參數(shù)Table 1 CAS number and multiple reaction monitoring parameters of 16 pesticide components

2 結(jié)果與分析

2.1 16種農(nóng)藥混標(biāo)溶液總離子流色譜圖及線性回歸方程

16種農(nóng)藥的保留時間和線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)R2見表2。

表2 16種農(nóng)藥標(biāo)品的保留時間、線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)Table 2 Retention time,linear regression equation and correlation coefficient of 16 kinds of pesticide standards

由表2可知，在確定的色譜柱及儀器分析條件下，16種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品在0.05～1.00 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系均良好，相關(guān)系數(shù)（R2）均＞0.998，可以滿足定量分析的要求。

2.2 猴頭菇中16種農(nóng)藥殘留檢出限、精密度和回收率試驗

以空白基質(zhì)產(chǎn)生3倍信噪比（signal-to-noise ratio，S/N）計算檢出限[24-25]。分別向空白猴頭菇基質(zhì)中添加16種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，加標(biāo)量為0.05 mg/kg、0.20 mg/kg和0.40 mg/kg 3個水平，每個水平重復(fù)測定6次，依步驟1.3利用GC-MS/MS測定，并利用外標(biāo)法進行定量分析，檢出限、回收率和精密度測定結(jié)果見表3。由表3可知，猴頭菇樣品中16種農(nóng)藥殘留的檢出限為0.010～0.075 mg/kg，平均回收率為86.08%～93.63%，回收率符合大多數(shù)農(nóng)藥殘留70%～110%范圍之間要求，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）為3.96%～8.92%。此外，16種有機農(nóng)藥中甲胺磷、敵敵畏、速滅磷、甲基嘧啶磷、殺螟硫磷、毒死蜱、喹硫磷和乙硫磷等8種有機磷類農(nóng)藥的平均回收率為86.48%～93.63%，檢出限為0.018～0.054mg/kg，RSD為4.49%～8.81%。猴頭菇樣品中16種農(nóng)藥殘留的回收率均在80%～100%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均＜10%，符合痕量殘留分析要求[14]。

表3 猴頭菇中16種有機農(nóng)藥檢出限、回收率和精密度試驗Table 3 Detection limits,recovery rates and precision of 16 kinds of organic pesticides in Hericium erinaceus

2.3 實際樣品的檢測

以六盤水市當(dāng)?shù)厮a(chǎn)猴頭菇作為待測樣品，選擇3份樣品，每份10 g，按照上述所建立的檢測方法對16種農(nóng)藥殘留進行測定，檢測結(jié)果見表4。

表4 猴頭菇樣品的檢測結(jié)果Table 4 Determination results of Hericium erinaceus samples

由表4可知，16種農(nóng)藥殘留量檢測在六盤水市大河食用菌基地所產(chǎn)猴頭菇中均未檢出，表明該猴頭菇不含有以上農(nóng)藥殘留，為安全的食用菌農(nóng)產(chǎn)品。

3 結(jié)論

本研究建立了猴頭菇中的16種農(nóng)藥殘留氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的分析方法。在0.05～1.00 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)16種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的線性關(guān)系均良好，相關(guān)系數(shù)（R2）均＞0.998。在確定的氣相色譜-質(zhì)譜法聯(lián)用的條件下，16種農(nóng)藥在3個加標(biāo)水平下的平均回收率為86.08%～93.63%，檢出限為0.010～0.075mg/kg，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.96%～8.92%，該方法的回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均符合痕量殘留分析要求，說明本方法靈敏度較高、穩(wěn)定性好，可用于猴頭菇中16種農(nóng)藥殘留分析的檢測方法。通過實際檢測，當(dāng)?shù)厮a(chǎn)新鮮猴頭菇樣品中16種農(nóng)藥殘留均未檢出，說明本地猴頭菇為安全農(nóng)產(chǎn)品，可放心食用和流通市場。