王建彬，魏 然，梁春梅，廖 英，陳惠茹，賴嘉希，柯吳堅(jiān)

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染是全球最常見(jiàn)的性傳播感染[1]，可引起口腔、生殖器等部位良性病變、潛在惡性病變或惡性腫瘤[2]。近年來(lái)雖然HPV疫苗已廣泛應(yīng)用，但對(duì)于未接種HPV疫苗的男性，其HPV感染率呈逐年上升趨勢(shì)[3,4]。男性HPV感染是導(dǎo)致女性性伴宮頸HPV感染的主要危險(xiǎn)因素之一[5]。男女雙方直接生殖器-生殖器接觸在HPV感染中已得到廣泛證實(shí)，但對(duì)于口-口、口-生殖器部位HPV傳播則研究較少[6]。為進(jìn)一步明確異性戀男性口腔、生殖器HPV感染率和危險(xiǎn)因素，評(píng)估其口腔、生殖器HPV感染對(duì)其性伴傳播的影響，筆者對(duì)性病門(mén)診200例異性戀男性及其女性性伴口腔、生殖器HPV標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)和分析，具體報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

招募2016年1月—2018年1月來(lái)汕頭市皮膚性病防治院和南方醫(yī)科大學(xué)性病門(mén)診就診的異性戀男性200例。最終167例男性及其固定女性性伴（167例）完成口腔、生殖器部位標(biāo)本采集。所有入組者年齡均不＜18歲。固定性伴指過(guò)去1年內(nèi)平均每月發(fā)生性行為次數(shù)＞1次。主動(dòng)口交指過(guò)去1年內(nèi)平均每月發(fā)生主動(dòng)口交行為次數(shù)＞1次。吸煙史指過(guò)去1年內(nèi)平均每月吸至少20根煙。排除標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)固定性伴者、確診人免疫缺陷病毒（HIV）感染或性病患者、免疫功能低下者、長(zhǎng)期系統(tǒng)服用免疫抑制劑或糖皮質(zhì)激素者、并發(fā)其他系統(tǒng)疾病者。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 異性戀男性及其女性性伴在采集口腔、生殖器樣本前24 h內(nèi)必須無(wú)口交、陰道性交或肛交行為。臨床醫(yī)師用細(xì)胞刷于受試者口腔、男性包皮和龜頭、女性外陰和陰道壁內(nèi)反復(fù)10次刷取細(xì)胞收集標(biāo)本，將其放入有患者編號(hào)的取樣管中，取樣管內(nèi)提前加有專門(mén)細(xì)胞保存液，擰緊瓶蓋。標(biāo)本采集后立即低溫保存送檢。所有標(biāo)本4℃保存＜24 h，-20℃保存＜3個(gè)月。

1.2.2 HPV DNA提取[7]細(xì)胞裂解液（HybriBio）提取樣本DNA。提取方法：取 500 μl臨床樣本14 000r/m離心1 min去上清。加入400 μl事先45℃水浴中預(yù)熱的溶液Ⅰ振蕩混勻，100℃加熱15 min，室溫下放置2 min。點(diǎn)動(dòng)離心后加入400 μl溶液Ⅱ，振蕩混勻后于室溫下放置 2 min。14 000 r/m 離心 5 min 去上清，重復(fù)該步驟2次后室溫放置2 min。加入60 μl溶液Ⅲ靜置 10 min，14 000 r/m 離心 1 min。取 1 ～ 2μl加入無(wú)菌水稀釋至合適體積，用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)A260/280值。如果核酸溶液A260/280比值為1.7～2.0認(rèn)為已達(dá)到所要求的純度，將提取好的DNA置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)[7]PCR檢測(cè)采用HPV通用引物：MY09/11（MY09：5'-CGT CCM ARR GGA WAC TGA TC-3'；MY11 ：5'-GCM CAG GGW CAT AAY AAT GG-3'； M ：A/C ；R ：A/G ；W：A/T；Y：C/T），該引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，并經(jīng)PAGE純化。擴(kuò)增HPV L1片段產(chǎn)物大小為450 bp。PCR反應(yīng)總體系包含 HPV 模板 DNA、上下游引物、Go Taq Buffer（Promega）、dNTP（Thermo）、MgCl2（Sigma）、Go Taq Polymerase（Promega）和分子水（Sigma）。PCR反應(yīng)條件：95℃加熱2 min后進(jìn)入40個(gè)循環(huán)。循環(huán)條件為 95℃變性 1 min，55℃退火 1 min，72℃延伸1 min。最后72℃延伸10 min。產(chǎn)物鑒定：1.5%瓊脂糖（Sigma）凝膠70V電泳40 min，于凝膠成像儀中觀察并記錄結(jié)果。

1.2.4 人口學(xué)特征、性行為特征調(diào)查 采用問(wèn)卷形式，調(diào)查2016年1月—2018年1月167例男性及其固定女性性伴（167例）年齡、吸煙史、主動(dòng)口交史、被動(dòng)口交史。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，異性戀男性及其性伴年齡比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，異性戀男性口腔、生殖器HPV感染情況與年齡比較采用兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，異性戀男性口腔、生殖器HPV感染情況與口交、吸煙史、性伴口腔/生殖器HPV感染情況比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 異性戀男性及其女性伴口腔、生殖器HPV感染情況

167位異性戀男性平均年齡（32.57±8.86）歲，超過(guò)其固定女性性伴平均年齡（30.62±8.21）歲，二者經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=9.670，P=0.000）。男性167份口腔樣本中有14份HPV DNA陽(yáng)性，陽(yáng)性率為8.4%，高于女性的4.8%（8/167），二者經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=25.0660，P=0.000）。男性167份生殖器樣本中有97份HPV DNA陽(yáng)性，陽(yáng)性率為58.1%，高于女性56.9%（95/167），二者經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.671，P=0.002）。

2.2 年齡、主動(dòng)口交和吸煙史對(duì)異性戀男性口腔HPV感染的影響

異性戀男性口腔HPV陽(yáng)性者平均年齡為（34.14±9.29）歲，高于陰性者的（32.43±8.84）歲，二者經(jīng)兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.690，P=0.491）。采用問(wèn)卷形式獲知，異性戀男性口腔HPV陽(yáng)性者中，有主動(dòng)口交史為85.7%（12/14），高于陰性者的52.3%（80/153），二者經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.520，P=0.033）；有吸煙史為85.7%（12/14），高于陰性者的50.3%（77/153），二者經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.109，P=0.024）。提示異性戀男性口腔HPV感染與年齡無(wú)關(guān)，而與主動(dòng)口交史和吸煙史有關(guān)，見(jiàn)表1。

2.3 異性戀男性口腔HPV感染對(duì)其女性性伴HPV感染的影響

根據(jù)核酸檢測(cè)結(jié)果，異性戀男性口腔HPV感染14例中，13例（92.9%）伴有女性生殖器HPV感染，高于陰性者（82/153，53.6%），二者經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.540，P=0.011）；35.7%（5/14）伴有女性口腔HPV感染者中，高于陰性者的2.0%（3/153），二者經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=32.040，P=0.000）。提示異性戀男性口腔HPV感染可增加其女性伴侶口腔、生殖器HPV感染率，表明HPV可能通過(guò)口-口和口-生殖道途徑傳播，見(jiàn)表1。

表1 年齡、主動(dòng)口交、吸煙史及性伴對(duì)異性戀男性口腔HPV感染的影響 [例（%）]

2.4 年齡、被動(dòng)口交和吸煙史對(duì)異性戀男性生殖器HPV感染的影響

異性戀男性生殖器HPV陽(yáng)性者平均年齡為（31.93±8.45）歲，低于陰性者的（33.47±9.39）歲，二者經(jīng)兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.111，P=0.268）。異性戀男性生殖器HPV感染者97例中，有被動(dòng)口交史者49例（50.5%），高于陰性者（10/70，14.3%），二者經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=23.358，P=0.000）；有吸煙史為55.7%（54/97），高于陰性者的50.0%（35/70），二者經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.525，P=0.469）。結(jié)果提示異性戀男性生殖器HPV感染與年齡和吸煙史無(wú)關(guān)，而與被動(dòng)口交史有關(guān)，見(jiàn)表2。

2.5 異性戀男性生殖器HPV感染對(duì)其女性性伴HPV感染的影響

異性戀男性生殖器HPV感染者97例中，伴有女性生殖器HPV感染65例（67.0%），高于陰性者（30/70，42.9%），二者經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.671，P=0.002）。提示異性戀男性生殖器HPV感染可增加其女性伴侶生殖器HPV感染率，異性戀男性生殖器HPV感染者中，7.2%（7/97）伴有女性口腔HPV感染，高于陰性者的1.4%（1/70），二者經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.986，P=0.084）；提示異性戀男性生殖器HPV感染可增加其女性伴侶口腔HPV感染率，見(jiàn)表2。

表2 年齡、被動(dòng)口交、吸煙史及性伴對(duì)異性戀男性生殖器HPV感染的影響 [例（%）]

3 討論

HPV是一種雙鏈環(huán)狀閉合的DNA病毒，目前共檢測(cè)出200多種HPV亞型[1]。根據(jù)不同HPV亞型致癌性高低，可分為高危型和低危型。低危型HPV與口腔、生殖器部位良性病變相關(guān)，而高危型HPV早期編碼的E6、E7蛋白可導(dǎo)致宿主細(xì)胞的異常增殖，與口腔、生殖器部位潛在惡性病變或惡性腫瘤密切相關(guān)[2]。HPV可通過(guò)多種途徑感染人體肛門(mén)、生殖器、咽喉、鼻腔和口腔等部位的皮膚和黏膜[6]。

Cossellu等[8]對(duì)5 579例14～69歲的男女受試者進(jìn)行口腔HPV檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)口腔HPV總感染率為6.9%，其中男性HPV感染率為10.1%，高于女性的3.6%。筆者研究發(fā)現(xiàn)男女雙方口腔HPV總感染率為6.6%，男性口腔HPV感染率8.4%（14/167）高于女性的4.8%（8/167），與上述研究結(jié)果基本一致。Eisenberg等[9]發(fā)現(xiàn)吸煙是男性患者感染口腔HPV的一個(gè)危險(xiǎn)因素。筆者研究顯示，男性口腔HPV感染者有吸煙史為85.7%（12/14），明顯高于口腔無(wú)HPV感染者的50.3%（77/153）；同樣，男性生殖器HPV感染者有吸煙史為55.7%（54/97），高于生殖器無(wú)HPV感染者的50.0%（35/70）。一項(xiàng)全美營(yíng)養(yǎng)和健康調(diào)查研究中發(fā)現(xiàn)參與者吸煙強(qiáng)度越強(qiáng)，HPV感染率越高[8]。吸煙不但引起免疫抑制，還增加HPV感染的易感性[10]，提示避免吸煙是降低口腔HPV感染的方法之一。

性伴之間HPV交叉感染是導(dǎo)致HPV感染率升高的原因之一[1,2]。Zhang等[11]對(duì)1 000例18～30歲參與者進(jìn)行3個(gè)月的口腔HPV感染隨訪，研究發(fā)現(xiàn)口腔HPV感染率與口交和舌吻呈現(xiàn)正相關(guān)。筆者的研究顯示，異性戀男性口腔HPV感染者中，85.7%有主動(dòng)口交史；在男性生殖器HPV感染者中，50.5%有被動(dòng)口交史，主動(dòng)或被動(dòng)口交史均高于HPV陰性組，提示口交在HPV的傳播中發(fā)揮重要作用。同樣，異性戀男性口腔HPV感染者中，其女性性伴高達(dá)92.9%伴有生殖器HPV感染及35.7%伴有口腔HPV感染；在生殖器HPV感染者中，其女性性伴67.0%%伴有生殖器HPV感染及7.2%伴有口腔HPV感染，結(jié)果均高于陰性對(duì)照組。筆者的研究進(jìn)一步證實(shí)男性口腔HPV感染可增加其女性性伴口腔、生殖器HPV感染率，提示HPV可能通過(guò)口-口和口-生殖道途徑傳播。

性伴之間或夫妻雙方HPV交叉感染是導(dǎo)致HPV感染率升高的原因之一[12,13]。本文研究證實(shí)，HPV可通過(guò)口-口、生殖器-生殖器或者口-生殖道途徑傳播，故降低男性HPV感染率可預(yù)防或降低女性HPV感染率。