韓嵐嵐，陳 娟，趙奎軍*，邴玉成，朱 琳，張雯林，高麗瞳，肖建飛，金明國

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，哈爾濱 150030，2.朝鮮桂應(yīng)祥沙里院農(nóng)業(yè)大學(xué)蠶學(xué)研究室，朝鮮 沙里院 999903）

大豆蚜（Aphis glycines）屬半翅目（Hemiptera）、蚜科（Aphididae）、蚜屬（Aphis），是栽培大豆常發(fā)性害蟲之一。大豆蚜在我國分布于各大豆主產(chǎn)區(qū)[1]，2000 年入侵美洲和大洋洲[2-3]，為全球性害蟲[4-5]。大豆蚜集中在植株生長點(diǎn)、葉背，以刺吸方式產(chǎn)生危害，引起植株矮化、葉片老化等[6]。嚴(yán)重可使大豆減產(chǎn)達(dá)50%以上，影響大豆品質(zhì)[7]。目前，大豆蚜防治仍以有機(jī)磷類、菊酯類和新煙堿類殺蟲劑[8]等為主，但長期使用化學(xué)藥劑可使大豆蚜產(chǎn)生抗藥性。

熱休克蛋白70（Heat shock protein 70，HSP70）是在應(yīng)激條件下產(chǎn)生的自我保護(hù)應(yīng)激蛋白，具有應(yīng)激誘導(dǎo)表達(dá)特性。韓嵐嵐等研究表明，大豆蚜受吡蟲啉脅迫時，hsp70 基因表達(dá)量上升[9]。郝春鳳等研究發(fā)現(xiàn)，花絨寄甲（Dastarcus helophoroides）受高溫脅迫時，hsp70 基因表達(dá)量呈先升后降動態(tài)變化[10]，當(dāng)果蠅（Drosophila melanogaster）發(fā)生滯育時誘導(dǎo)hsp70 基因表達(dá)[11]，而敲低hsp70 和hsc70 基因?qū)е吕ハx對長期饑餓的抵抗力降低[12]，研究結(jié)果表明，hsp70 表達(dá)量和昆蟲生長發(fā)育及應(yīng)對非生物脅迫的能力密切相關(guān)。

RNA 干擾是由雙鏈RNA 介導(dǎo)，具有特異性強(qiáng)、沉默效果顯著等特點(diǎn)。主要通過浸泡、注射、飼喂等方法將dsRNA 或siRNA 導(dǎo)入昆蟲體內(nèi)。其中浸泡法不適合大多數(shù)昆蟲；顯微注射法對于體型微小昆蟲易產(chǎn)生機(jī)械損傷，對操作技術(shù)精準(zhǔn)度要求極高；飼喂法易于操作，省時省力，適合大田推廣，不會造成機(jī)械損傷，適用小型昆蟲RNA 干擾，但缺點(diǎn)為干擾不同昆蟲時siRNA 使用量需先開展大量重復(fù)試驗(yàn)驗(yàn)證。研究者通過飼喂法對小型刺吸類害蟲蘋果黃蚜（Aphis citricola）[13]、麥二叉蚜（Schizaphis graminum）[14]細(xì)胞色素P450 基因作RNA干擾，均顯著抑制目的基因表達(dá)。

本文旨在分析siRNA hsp70 干擾后大豆蚜體內(nèi)內(nèi)源物質(zhì)和激素等物質(zhì)表達(dá)動態(tài)情況，尋找大豆蚜對siRNA hsp70 干擾后代謝表現(xiàn)最劇烈時間點(diǎn)，為大豆蚜防治提供理論依據(jù)，以期減少農(nóng)藥使用量。

1 材料與方法

1.1 供試蟲源

供試大豆蚜為未接觸過農(nóng)藥，經(jīng)單克隆繁殖、定期復(fù)壯實(shí)驗(yàn)室穩(wěn)定種群，置于溫度（25±1）℃、光照（L∶D）=14∶10、相對濕度70%恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)至2齡。

1.2 siRNA hsp70獲得

根據(jù)大豆蚜hsp70 mRNA（GenBank 登錄號KF 771049）序列設(shè)計雙鏈小干擾RNA，即siRNA hsp70（見表1），由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司合成。

表1 引物信息Table 1 Primers information

1.3 siRNA hsp70干擾大豆蚜方法

siRNA hsp70 干擾濃度：根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)siRNA hsp70 濃度為0.33 μg·μL-1時，對hsp70 基因表達(dá)抑制效果良好，因此，選擇該濃度為試驗(yàn)濃度。為更準(zhǔn)確分析siRNA hsp70 干擾效果，本試驗(yàn)采用陰性和清水雙對照，陰性對照為siRNA-NC，為無意義雙鏈（由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司提供）（見表1），清水為空白對照。

采用飼喂法，將siRNA及陰性對照分別稀釋至0.33 μg·μL-1，取5 μL 稀釋液，加入含1%瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)皿中，將2.5 cm2大豆三出復(fù)葉迅速、平整貼在滴有處理液的瓊脂培養(yǎng)基上，每皿放置10頭2 齡大豆蚜。以清水作對照，設(shè)置1、2、3、12、24、48、72 h等7個取食時長處理，從觀察到大豆蚜取食后開始計時，每個處理10 次重復(fù)，選取葉片保濕，大豆蚜活躍度一致2 齡大豆蚜為試驗(yàn)試蟲。取食處理結(jié)束后將大豆蚜轉(zhuǎn)移至1.5 mL EP 管中，饑餓處理1 h（每個時間處理各取30 頭，用于RNA 提取；再各取30 頭，每10 頭放入一支EP管中，用于測定內(nèi)源物質(zhì)），-80 ℃保存。

1.4 siRNA hsp70干擾大豆蚜后轉(zhuǎn)錄表達(dá)量測定

為檢測siRNA hsp70干擾后大豆蚜hsp70基因表達(dá)量，提取1.3處理后大豆蚜總RNA，反轉(zhuǎn)成cDNA，根據(jù)大豆蚜hsp70基因設(shè)計實(shí)時熒光定量PCR引物F2 和R2（見表1），內(nèi)參基因查詢蚜蟲模式昆蟲所得，分別為NM001162323-F 和NM001162323-R（見表1）。熒光定量PCR 反應(yīng)條件：95 ℃60 s；95 ℃15 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40個循環(huán)。采用2-△△Ct法作PCR相對定量分析。

1.5 siRNA hsp70干擾大豆蚜后內(nèi)源物質(zhì)及激素的測定方法

將經(jīng)1.3處理的大豆蚜置于冰上，加入300 μL PBS 緩沖液，組織研磨器充分研磨，8 500 r·min-1離心10 min，取上清用于測定內(nèi)源物質(zhì)及激素含量。

總蛋白質(zhì)檢測參見TaKaRa Bradford Protein Assay Kit說明書。

總糖檢測參照硫酸蒽酮法，參見北京索萊寶科技有限公司試劑盒說明書。

HSP70 蛋白、羧酸酯酶、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶、蛻皮激素、保幼激素檢測參考雙抗體夾心法，參見江蘇酶標(biāo)生物科技有限公司試劑盒使用說明書。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用Excel 2007 數(shù)據(jù)處理軟件分析、作圖，使用DPS 2006 軟件作單因素方差分析，通過Ducan"s新復(fù)極差法作顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 siRNA對2齡大豆蚜hsp70基因表達(dá)的影響

由圖1 可知，經(jīng)siRNA hsp70 干擾的2 齡大豆蚜hsp70 表達(dá)量在1 h 時低于陰性對照，差異不顯著，顯著低于清水對照（P＜0.05）；2、3 h時顯著低于陰性對照（P＜0.05），極顯著低于清水對照（P＜0.01）；12 h 時高于陰性對照，差異不顯著，顯著高于清水對照（P＜0.05）；24、48 h時極顯著高于陰性和清水對照（P＜0.01）；72 h時顯著高于陰性和清水對照（P＜0.05）。

2.2 siRNA hsp70對2齡大豆蚜體內(nèi)熱休克蛋白70（HSP70）表達(dá)的影響

由圖2 可知，HSP70 蛋白表達(dá)量在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分別是陰性對照的1.0143、1.0750、0.6575、0.8984、0.7550、0.8749、0.8884 倍，與陰性對照相比，HSP70 蛋白表達(dá)量在1 h 時差異不顯著，2、3、48 h 時差異極顯著（P＜0.01），12、24、72 h 時差異顯著（P＜0.05）；HSP70 蛋白表達(dá)量在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 時分別是清水對照的1.0290、 1.0729、0.7191、0.8339、0.7590、0.8405、0.9091倍，和清水對照相比，HSP70 蛋白表達(dá)量在1、72 h 時差異不顯著，2、3、12、48 h 時差異極顯著（P＜0.01），24 h時差異顯著（P＜0.05）。

siRNA hsp70 處理組2 齡大豆蚜HSP70 蛋白表達(dá)量在1～2、3～12、24～72 h 呈上升趨勢，2～3、12～24 h 呈下降趨勢，72 h 時HSP70 蛋白表達(dá)量最高，為0.26084 pg·per-1，1 h 時HSP70 蛋白表達(dá)量最低，為0.08336 pg·per-1；陰性對照組2齡大豆蚜HSP70 蛋白表達(dá)量在1～3、24～72 h 呈上升趨勢，3～24 h呈下降趨勢，72 h時2齡大豆蚜HSP70蛋白表達(dá)量最高，為0.29361 pg·per-1，1 h時2齡大豆蚜HSP70 蛋白表達(dá)量最低，為0.08219 pg·per-1；清水對照組2 齡大豆蚜HSP70 蛋白表達(dá)量在1～12、24～72 h 呈上升趨勢，12～24 h 呈下降趨勢，72 h時2 齡大豆蚜HSP70 蛋白表達(dá)量最高，為0.28692 pg·per-1，1 h 時2 齡大豆蚜HSP70 蛋白表達(dá)量最低，為0.08102 pg·per-1。

2.3 siRNA hsp70對2齡大豆蚜體內(nèi)內(nèi)源物質(zhì)的影響

由圖3 可知，總蛋白質(zhì)含量在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜1、2、3、12、24、48、72 h 后分別是陰性對照的0.9752、1.0707、0.8933、1.0267、0.9622、0.8937、0.9816 倍，與陰性對照相比，總蛋白質(zhì)含量7個時間處理差異均不顯著；總蛋白質(zhì)含量在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分 別 是 清 水 對 照 的1.0541、1.1510、0.9007、0.9783、0.9464、0.8993、0.8593倍，與清水對照相比，總蛋白質(zhì)含量在7個時間處理差異均不顯著。

siRNA hsp70 處理組和陰性對照組2 齡大豆蚜總蛋白質(zhì)含量在1～2、3～72 h 呈上升趨勢，2～3 h呈下降趨勢，兩處理均在72 h時2齡大豆蚜總蛋白質(zhì)含量最高，分別為0.00431、0.00439 μg·per-1，3 h時2齡大豆蚜總蛋白質(zhì)含量最低，分別為0.00198、0.00222 μg·per-1；清水對照組2齡大豆蚜總蛋白質(zhì)含量在1～72 h呈上升趨勢，72 h時2齡大豆蚜總蛋白質(zhì)含量最高，為0.00501 μg·per-1，1 h時2齡大豆蚜總蛋白質(zhì)含量最低，為0.00208 μg·per-1。

由圖4可知，總糖含量在siRNA hsp70干擾2齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分別是陰性對照的0.9690、0.9775、0.9759、0.9907、1.0042、1.0124、1.0439倍，與陰性對照相比，總糖含量在1、2 h 時差異顯著（P＜0.05），3、72 h 時差異極顯著（P＜0.01），12、24、48 h時差異不顯著；總糖含量在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分別是清水對照的0.9553、0.9629、0.9743、0.9851、1.0021、1.0369、1.0740倍，與清水對照相比，總糖含量在1 h時差異顯著（P＜0.05），2、3、48、72 h 時差異極顯著（P＜0.01），12、24 h時差異不顯著。

siRNA hsp70 處理組和陰性對照組2 齡大豆蚜總糖含量在1～3、24～72 h 呈上升趨勢，3～24 h 呈下降趨勢，兩處理皆在3 h 時2 齡大豆蚜總糖含量最高，分別為0.00867 和0.00889 μg·per-1，24 h時2 齡大豆蚜總糖含量最低，分別為0.00807 和0.00804 μg·per-1；清水對照組2 齡大豆蚜總糖含量在1～3 h呈上升趨勢，3～72 h呈下降趨勢，在3 h時2 齡大豆蚜總糖含量最高，為0.00890 μg·per-1，72 h 時2 齡大豆蚜總糖含量最低，為0.00801 μg·per-1。

由圖5 可知，羧酸酯酶活性在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分別是陰性對照的0.6262、0.8642、1.2532、0.9447、0.9724、1.0357、1.0984 倍，與陰性對照相比，羧酸酯酶活性在1、2、3 h 時差異極顯著（P＜0.01），12、24、48、72 h時差異不顯著；羧酸酯酶活性在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分別是清水對照的0.5766、0.8431、1.3595、1.0450、0.9790、1.0414、1.1050倍，與清水對照相比，羧酸酯酶活性在1、2、3 h差異極顯著（P＜0.01），12、24、48、72 h時差異不顯著。

siRNA hsp70 處理組2 齡大豆蚜羧酸酯酶活性在1～3、24～72 h 呈上升趨勢，3～24 h 呈下降趨勢，3 h 時羧酸酯酶活性最高，為0.00070 U·per-1，1 h時羧酸酯酶活性最低，為0.00035 U·per-1；陰性和清水對照組2 齡大豆蚜羧酸酯酶活性在1～2 h 呈上升趨勢，2～72 h 呈下降趨勢，兩種處理皆在2 h 時2 齡大豆蚜羧酸酯酶活性最高，分別為0.00065 和0.00067 U·per-1，在72 h 時2 齡大豆蚜羧酸酯酶活性最低，均為0.00039 U·per-1。

由圖6可知，谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分別是陰性對照的1.0127、0.9550、1.0553、1.0292、1.0183、0.9766、0.9747 倍，與陰性對照相比，谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性在1、12 h時差異不顯著，2、3、48 h 時差異極顯著（P＜0.01），24、72 h時差異顯著（P＜0.05）；谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分別是清水對照的1.0079、0.9608、1.0737、1.0679、1.0388、0.9754、0.9518倍，與清水對照相比，谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性在1 h差異不顯著，2、3、12、24、48、72 h 時差異極顯著（P＜0.01）。

siRNA hsp70 處理組2 齡大豆蚜谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性在1～2、3～72 h 呈下降趨勢，2～3 h 呈上升趨勢，3 h 時2 齡大豆蚜谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性最高，為0.00016 IU·per-1，72 h 時谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性最低，為0.00014 IU·per-1；陰性對照組2齡大豆蚜谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性在1～2 h呈上升趨勢，2～72 h 呈下降趨勢，2 h 時2 齡大豆蚜谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性最高，為0.00016 IU·per-1，72 h時2 齡大豆蚜谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性最低，為0.00014 IU·per-1；清水對照組2齡大豆蚜谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性在1～2、24～72 h呈上升趨勢，2～24 h呈下降趨勢，2 h 時2 齡大豆蚜谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性最高，為0.00016 IU·per-1，24 h時2齡大豆蚜谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性最低，為0.00014 IU·per-1。

2.4 siRNA hsp70對2齡大豆蚜體內(nèi)激素表達(dá)的影響

由圖7 可知，蛻皮激素含量在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分別是陰性對照的0.8023、0.8844、1.5699、1.1127、1.0423、0.8887、0.8151 倍，與陰性對照相比，蛻皮激素含量在1、3、12、48、72 h 差異極顯著（P＜0.01），2、24 h 差異顯著（P＜0.05）；蛻皮激素含量在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分 別 是 清 水 對 照 的0.8133、0.8590、1.6458、1.3603、1.0237、0.8482、0.8083倍，與清水對照相比，蛻皮激素含量在1、2、3、12、48、72 h差異極顯著（P＜0.01），24 h差異不顯著。

siRNA hsp70 處理組2 齡大豆蚜蛻皮激素含量在1～2、3～12 h呈上升趨勢，2～3、12～72 h呈下降趨勢，2 h 時2 齡大豆蚜蛻皮激素含量最高，為0.00025 ng·per-1，1 h時2齡大豆蚜蛻皮激素含量最低，為0.00010 ng·per-1；陰性對照組2齡大豆蚜蛻皮激素含量在1～2、3～12、24～72 h 呈上升趨勢，2～3、12～24 h 呈下降趨勢，2 h 時2 齡大豆蚜蛻皮激素含量最高，為0.00029 ng·per-1，1 h 時2 齡大豆蚜蛻皮激素含量最低，為0.00013 ng·per-1；清水對照組2 齡大豆蚜蛻皮激素含量在1～2、3～72 h 呈上升趨勢，2～3 h呈下降趨勢，2 h時2齡大豆蚜蛻皮激素含量最高，為0.00030 ng·per-1，1 h 時2 齡大豆蚜蛻皮激素含量最低，為0.00012 ng·per-1。

由圖8 可知，保幼激素含量在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分別是陰性對照的0.8393、1.1783、0.8753、1.4054、0.9731、1.0117、0.9318 倍，與陰性對照相比，1、3、12 h時差異極顯著（P＜0.01），2、72 h差異顯著（P＜0.05），24、48 h差異不顯著；保幼激素含量在siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜后1、2、3、12、24、48、72 h 分別是清水對照的0.9104、1.1656、0.8798、1.7140、0.9948、0.9840、0.9486倍，與清水對照相比，保幼激素含量在1、2、72 h 差異顯著（P＜0.05），3、12 h 差異極顯著（P＜0.01），24、48 h差異不顯著。

siRNA hsp70 處理組2 齡大豆蚜保幼激素含量1～2、3～24 h 呈上升趨勢，2～3、24～72 h 呈下降趨勢，24 h 時2 齡大豆蚜保幼激素含量最高，為0.00150 ng·per-1，1 h時2齡大豆蚜保幼激素含量最低，為0.00039 ng·per-1；陰性和清水對照組2齡大豆蚜保幼激素含量1～3、12～24 h 呈上升趨勢，3～12、24～72 h呈下降趨勢，兩種處理皆在24 h時保幼激素含量最高，分別為0.00154和0.00151 ng·per-1，其含量皆在1 h 時最低，分別為0.00047 和0.00043 ng·per-1。

3 討論與結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)siRNA hsp70（0.33 μg·μL-1）干擾2齡大豆蚜并未死亡，與大豆蚜取食量有關(guān)，大豆蚜通過刺吸含siRNA hsp70 大豆汁液對其產(chǎn)生影響，雖不致大豆蚜死亡，但對大豆蚜hsp70 表達(dá)量、HSP70 蛋白表達(dá)量、總蛋白質(zhì)含量、總糖含量、羧酸酯酶活性、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性、蛻皮激素含量、保幼激素含量在7個時長處理組產(chǎn)生不同程度影響。

本研究發(fā)現(xiàn)，siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜1～3 h時，hsp70基因表達(dá)量被抑制，干擾3～72 h表現(xiàn)為促進(jìn)hsp70 基因表達(dá)，表達(dá)高蜂出現(xiàn)在24 h，表明大豆蚜為減弱干擾而發(fā)生補(bǔ)償性表達(dá)，與Jarosch等[15]、王錦達(dá)[16]研究結(jié)果一致。張偉研究認(rèn)為，RNA干擾產(chǎn)生基因沉默并非固定不變[17]。

干擾后補(bǔ)償表達(dá)在大豆蚜HSP70 蛋白表達(dá)量、總糖含量、羧酸酯酶活性、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性、蛻皮激素含量、保幼激素含量中表現(xiàn)，與大豆蚜在干擾壓力下啟動自我應(yīng)激保護(hù)作用有關(guān)。

經(jīng)siRNA hsp70 干擾后，2 齡大豆蚜HSP70 蛋白表達(dá)量在2 h 時極顯著高于陰性和清水對照（P＜0.01），可能是大豆蚜受siRNA hsp70干擾時，啟動應(yīng)激保護(hù)致HSP70 蛋白表達(dá)量上升；在3～72 h 時呈波動變化，但始終低于陰性和清水對照組，siRNA hsp70 干擾對HSP70 蛋白表達(dá)有抑制作用，但兩者無線性關(guān)系，因HSP70蛋白由hsp70 家族基因共同調(diào)控。HSP70蛋白作為應(yīng)激蛋白可穩(wěn)定細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞維持正常生理功能[18]，此時HSP70蛋白含量下降是修復(fù)其他被破壞功能蛋白結(jié)構(gòu)所致。

siRNA hsp70干擾后，7個時間處理的2齡大豆蚜總蛋白質(zhì)含量與陰性和清水對照組差異均不顯著，表明siRNA hsp70 干擾雖使HSP70 蛋白表達(dá)相對對照差異顯著，對總蛋白未產(chǎn)生顯著影響。但對總糖含量產(chǎn)生影響，干擾壓力可激發(fā)體內(nèi)一些糖代謝反應(yīng)。

研究發(fā)現(xiàn)，作為解毒酶的羧酸酯酶活性在siRNA hsp70干擾2齡大豆蚜1、2 h時均極顯著低于對照組，3 h 時極顯著高于對照組，呈先抑制后補(bǔ)償效應(yīng)，之后12～72 h羧酸酯酶活性差異不顯著，干擾對羧酸酯酶活性變化影響不明顯，這一結(jié)果與王龍江等球孢白僵菌對羧酸酯酶活性影響隨時間延長無顯著抑制作用一致[19]；而作為解毒酶的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性在經(jīng)siRNA hsp70干擾后，呈較大波動，2 h時谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性表現(xiàn)為極顯著低于對照組，3 h 時表現(xiàn)為極顯著高于對照組，至48 h 處理組呈極顯著低于對照組，從兩種酶經(jīng)siRNA hsp70 干擾后活性變化看，干擾對谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性影響更大。

siRNA hsp70 干擾2 齡大豆蚜對其體內(nèi)蛻皮激素、保幼激素含量變化產(chǎn)生明顯影響，干擾后蛻皮激素是3、12 h處理組出現(xiàn)補(bǔ)償性極顯著高于對照組，1、2、48、72 h 處理組均顯著低于對照組，而保幼激素含量在2、12 h 處理組顯著高于對照組，1、3、72 h處理組均顯著低于對照組，蛻皮激素、保幼激素在經(jīng)siRNA hsp70 干擾后含量變化說明這種干擾對大豆蚜繁殖產(chǎn)生影響。這與Kosano和Prapapanich等研究結(jié)果一致[20-21]，但具體調(diào)節(jié)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果表明，大豆蚜受siRNA hsp70 干擾后其體內(nèi)內(nèi)源物質(zhì)及激素發(fā)生變化，表明干擾引起大豆蚜體內(nèi)相應(yīng)代謝變化，為干擾技術(shù)應(yīng)用于害蟲防治提供技術(shù)支持，可在干擾后大豆蚜處于自我保護(hù)最薄弱時施藥（本研究為干擾3 h 時最薄弱），在不增加施藥量情況下，提高防治效果。