叢登立，王紅玉

（1.吉林大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春130021；2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院，長(zhǎng)春130021）

柴胡是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，作為藥用已有2000多年的歷史。藥典2015版規(guī)定柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifoliumWilld.的干燥根。具有疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽(yáng)氣。用于感冒發(fā)熱，寒熱往來(lái)，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)，子宮脫垂，脫肛[1]。近代研究表明柴胡具有抗炎、保肝、抗腫瘤、對(duì)心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)作用等多種生物學(xué)活性[2]。柴胡主要有效成分是柴胡皂苷[3],柴胡皂苷具有抗腫瘤作用,對(duì)多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有抑制作用[2,4,5]。腫瘤血管是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ),腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的多階段過(guò)程，包括向腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)、周圍組織的侵襲、脈管系統(tǒng)內(nèi)滲透等，柴胡皂苷具有抑制癌細(xì)胞遷移的能力[4,5]。本研究探討柴胡總皂苷在體外抑制胃癌（SNU-216）的生長(zhǎng)效應(yīng)。為今后更好開(kāi)發(fā)利用柴胡這一傳統(tǒng)中藥提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑

DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清購(gòu)自美國(guó)iGbco公司；四甲基偶氮唑鹽(MTT)和二甲基亞砜(DMSO)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；胰蛋白酶購(gòu)自Genview公司；胃癌（SNU-216）購(gòu)自中科院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所；柴胡總皂苷實(shí)驗(yàn)室提取。

1.1.2 主要儀器

倒置顯微鏡(OLYMPUS)日本；C02培養(yǎng)箱(SANYO)日本;酶標(biāo)儀（BioTeK）美國(guó);離心機(jī)(5417R型Eppendorf)德國(guó)

1.2 方法

柴胡總皂苷固體用DMSO溶解制成儲(chǔ)液,濃度為250mg/mL。

實(shí)驗(yàn)分組:I對(duì)照組不給藥組;II柴胡總皂苷0.025μmol/L組；III柴胡總皂苷0.050μmol/L組;IV柴胡總皂苷0.075μmol/L組；V柴胡總皂苷0.100μmol/L組。

胃癌（SNU-216）用含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基置于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每日觀察。待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，其細(xì)胞數(shù)為培養(yǎng)瓶90%左右時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞經(jīng)消化離心后按4×103/孔種于96孔板中，次日換液。培養(yǎng)貼壁后,加入不同濃度的藥物。對(duì)照細(xì)胞加入無(wú)血清含DMSO的培養(yǎng)液，每組6個(gè)復(fù)孔，放回細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。在加入柴胡總皂苷培養(yǎng)24、48及72h后,加入MTT(5mg/ml),每孔 20μl,繼續(xù)培養(yǎng) 4h。 3500 轉(zhuǎn)離心 10min,棄上清,每孔加入150μl DMSO,充分震蕩,振蕩待結(jié)晶物完全溶解后于酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)吸光度值(A值),并計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。

抑制率=(對(duì)照組A值-實(shí)驗(yàn)組A值)/（對(duì)照組A值-空白對(duì)照組A值）×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次且結(jié)果一致。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，t檢驗(yàn)判斷組間差異顯著性，±s表示P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

四種劑量的柴胡總皂苷均有抑制胃癌（SNU-216）細(xì)胞生長(zhǎng)作用。抑制率以劑量依賴方式增殖。結(jié)果表明:劑量為 0.025、0.050、0.075、0.100μml/L 的柴胡總皂苷實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.01),隨著柴胡總皂苷濃度增高抑制效率也在增強(qiáng)。其中在72 h以內(nèi)作用時(shí)間增加,抑制效率增強(qiáng),但在四種劑量的柴胡總皂苷作用48 h和72 h兩組間比較,抑制效率差異較24h相差明顯。胃癌（SNU-216）細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率見(jiàn)表1。

表1 柴胡總皂苷不同藥物濃度組對(duì)SNU-216細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率的變化(%,x±s,n=6)

3 討論

近年隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、人們生活質(zhì)量的提高癌癥的發(fā)病率顯著增高。柴胡總皂苷作為中藥柴胡的主要成分研究發(fā)現(xiàn)除抗炎外，還能夠通過(guò)影響多條信號(hào)通路(AMPK)抑制包括宮頸癌、前列腺癌在內(nèi)多種腫瘤的生物學(xué)行為，如增殖、遷移及侵襲等能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞具有抑制作用[7～8]。還能促進(jìn)腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性并減輕化療藥物的毒副反應(yīng)抑制多種腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移［9～10］。許多研究報(bào)道柴胡皂苷對(duì)多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有明顯的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道相似。本實(shí)驗(yàn)將柴胡總皂苷作用到體外培養(yǎng)胃癌（SNU-216）細(xì)胞,觀察不同劑量柴胡總皂苷對(duì)胃癌（SNU-216）細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，結(jié)果表明不同劑量柴胡總皂苷對(duì)胃癌（SNU-216）細(xì)胞具有明顯地抑制作用(P＜0.01),并且隨著藥物濃度增高抑制效率增強(qiáng),并呈劑量依賴關(guān)系。本研究在柴胡總皂苷給藥后作用時(shí)間上24、48、72h均有抑制作用，以在48h以內(nèi)是隨著作用時(shí)間增加,抑制效率增強(qiáng)。48 h到72h觀察抑制效率有所增強(qiáng),但是在48h到72h觀察抑制效率，兩組間比較,抑制效率沒(méi)有明顯差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明柴胡總皂苷體對(duì)外培養(yǎng)胃癌（SNU-216）細(xì)胞具有抑制作用，但這只是初步的研究結(jié)果。對(duì)于其對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。