靳思玉，王立超，李苗苗，張嘉賓，王健，張愛(ài)忠，曹陽(yáng),3

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶，163000；2.黑龍江省寒區(qū)飼料資源高效利用與營(yíng)養(yǎng)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 大慶，163000；3.畜禽養(yǎng)殖污染控制與資源化技術(shù)國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150030）

0 引 言

油莎草（Cyperusesculentus L）為莎草科多年生草本植物，原產(chǎn)于地中海，于上個(gè)世紀(jì)五十年代引入我國(guó)[1]。油莎草耐旱耐澇，對(duì)土質(zhì)要求不高，除蝗蟲(chóng)以外無(wú)其他病蟲(chóng)害。分蘗速度快，產(chǎn)量高且穩(wěn)定。地下塊莖部分油脂含量高，做榨油使用。莖葉的油脂含量低，不作為深加工的原料，一般制成干草直接飼喂家畜，或是棄于田間直接焚燒，不僅破壞環(huán)境還造成資源浪費(fèi)[2]。目前畜牧業(yè)上對(duì)油莎草的認(rèn)知度并不夠，尤其缺乏對(duì)油莎草作為飼料貯藏加工方面的研究。

《名醫(yī)別錄》中記載油莎草莖葉具有行氣止痛、疏肝解郁、主胸悶不舒、風(fēng)疹瘙癢和癰伴隨腫毒等功效。研究表明黃酮是油莎草莖葉部分主要活性物質(zhì)，其主要功能就是抗炎消毒、抗腫瘤和清除自由基等作用[3]。如果可以在畜牧行業(yè)加以利用，不僅在一定程度上可以代替抗生素，還具有保護(hù)動(dòng)物健康的作用。研究表明，青綠牧草在加工干草的過(guò)程中，黃酮等功能性成分提取量較低[4]。青貯加工不僅可以保持牧草青綠多汁的特性，減少牧草中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失，還可以最大程度保留牧草中生物活性物質(zhì)[5]。而溫度對(duì)青貯發(fā)酵品質(zhì)有著重要影響，低溫環(huán)境會(huì)降低青貯發(fā)酵過(guò)程中乳酸菌等有益菌的活性，抑制其生長(zhǎng)，從而降低發(fā)酵品質(zhì)[6]。低溫影響著高寒地區(qū)低溫季節(jié)對(duì)青貯飼料的利用，目前低溫青貯飼料技術(shù)的研究報(bào)道并不多，在低溫條件下提高青貯發(fā)酵品質(zhì)，降低發(fā)酵腐敗幾率，可以促進(jìn)高寒地區(qū)對(duì)青綠飼料資源開(kāi)發(fā)與利用，對(duì)緩解高寒地區(qū)在低溫季節(jié)飼料短缺問(wèn)題具有重要意義。

糖蜜是制糖工業(yè)的副產(chǎn)品，含有許多糖類物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分[7]。Cao[8]等在添加糖蜜對(duì)全麥全混合日糧青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)及體外干物質(zhì)消失率影響的研究中發(fā)現(xiàn)，添加糖蜜可以提高青貯發(fā)酵品質(zhì)和體外干物質(zhì)消失率。本研究通過(guò)分析在不同溫度下添加糖蜜對(duì)油莎草青貯的一般化學(xué)成分、黃酮含量、發(fā)酵品質(zhì)、微生物組成以及體外消化影響，探索油莎草青貯飼料在不同溫度下調(diào)制加工技術(shù)，為其作為草食動(dòng)物飼料資源提供數(shù)據(jù)參考以及和理論依據(jù)。

1 材 料

1.1 油莎草及添加劑

油莎草采自大慶市杜爾伯特草原，于通風(fēng)處晾至半干（含水量65%左右），切短至2-3 cm。糖蜜購(gòu)自成都金糖蜜商貿(mào)有限公司，總糖（蔗糖+還原糖）≥40%，°Bé≥33.333。

1.2 培養(yǎng)基制備

配制MRS 瓊脂培養(yǎng)基（De Man，Rogosa and Sharpe Agar，MRS，培養(yǎng)乳酸菌）、藍(lán)色瓊脂培養(yǎng)基（Blue Light Broth Agar，BLB，培養(yǎng)大腸桿菌）、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（Potato Aextrose Agar，PDA，培養(yǎng)酵母菌和霉菌）、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（Nutrient Agar，NA，培養(yǎng)好氧菌和耐熱菌）、梭菌計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（Clos?tridial Count Agar，CCA，培養(yǎng)丁酸菌）培養(yǎng)基備用。配制好的培養(yǎng)基需要用滅菌鍋滅菌（121 ℃，20 min），每個(gè)培養(yǎng)皿倒入20 mL 左右。培養(yǎng)板凝固后放入37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，12 h 后查看是否有污染，若有污染棄用。

1.3 主要儀器

真空包裝機(jī)（AT-620），北京吉奧德包裝機(jī)械有限公司；壓力蒸汽滅菌鍋（GR85DF），廈門(mén)致微儀器有限公司；生物潔凈工作臺(tái)（BCN-1360B），北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；pH 值計(jì)（FE20-K），梅特勒托利多國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司；高速冷凍離心機(jī)（1-14K），上海珂淮儀器有限公司；高效氣象色譜儀（GC-2010），島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DGG-9070B），電熱恒溫水浴槽（DK-80），電熱恒溫培養(yǎng)箱（DRP-9082），均購(gòu)自上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；微型植物粉碎機(jī)（FZ-102），山西太原騰達(dá)科學(xué)器材有限公司；電子天平（JD100-3B），沈陽(yáng)龍騰電子有限公司；超純水機(jī)（XYE2-2--H）北京湘順源科技有限公司；厭氧培養(yǎng)箱（YQX-Ⅱ），上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；均質(zhì)器（BAGMIXER?400W），上海巴玖實(shí)業(yè)有限公司；空氣浴振蕩器（HZQ-C），哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（UV-6100A），上海元析儀器有限公司；茂福爐（SRJX-8-13A），廣州航信科學(xué)儀器有限公司；凱氏定氮儀（K9840），廣州市科迅實(shí)驗(yàn)器材有限公司；半自動(dòng)纖維儀（A200i），合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司。

2 方 法

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用兩因素的試驗(yàn)設(shè)計(jì)（添加2×溫度2），采用小規(guī)模青貯調(diào)制法，置于常溫（22±2 ℃）和低溫（4 ℃）下發(fā)酵35 d。試驗(yàn)分為2 個(gè)處理組（每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)），包括對(duì)照組（無(wú)添加）、糖蜜組（添加量4%，鮮物質(zhì)基礎(chǔ)）。稱取處理好的樣品200 g 裝入規(guī)格為16×25 cm 聚乙烯袋中，真空密封包裝后放置常溫和4 ℃冰箱中保存。

2.2 感官品質(zhì)評(píng)定

根據(jù)青貯質(zhì)量評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)的說(shuō)明[9]，油莎草青貯開(kāi)封后對(duì)其顏色、氣味、質(zhì)地以及有無(wú)霉變這四個(gè)方面進(jìn)行品質(zhì)評(píng)定。

2.3 一般化學(xué)成分分析

將開(kāi)封后的樣品放入電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，在65 ℃條件下烘至恒重，由此得出自由水含量。用微型植物粉碎機(jī)將樣品粉碎并過(guò)1 mm 篩后進(jìn)行一般化學(xué)成分分析，測(cè)定項(xiàng)目包括干物質(zhì)、有機(jī)物、粗脂肪、粗蛋白、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維含量。

有機(jī)物、粗蛋白、粗脂肪的測(cè)定分別用（AOAC）中的方法934.01、976.05、920.39 進(jìn)行[10]中性洗滌纖維與酸性洗滌纖維利用Van soest方法進(jìn)行測(cè)定[11]。

2.4 黃酮含量測(cè)定

根據(jù)楊文菊、敬思群、楊潔[12]方法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線建立和黃酮含量測(cè)定。

2.5 發(fā)酵品質(zhì)測(cè)定

稱取開(kāi)封后的原樣20 g 置于聚乙烯袋中，加入180 mL 滅菌蒸餾水，用均質(zhì)器拍打90 s，用快速定性濾紙過(guò)濾測(cè)定pH 值。一部分濾液經(jīng)12 000 r/min 離心5 min，并用0.22 μm 濾膜過(guò)濾后，采用氣相色譜儀進(jìn)行乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量分析。

色譜條件為：汽化室參數(shù)為載氣氮?dú)猓∟2），分流比40∶1，進(jìn)樣量0.4 μL，溫度220 ℃；色譜柱參數(shù)為HP-IN?NOWax毛細(xì)管色譜柱恒流模式，流量2.0 mL/min，平均線速度38 cm/s；柱溫箱參數(shù)為程序升溫120 ℃保持3 min，然后以10 ℃/min 上升至180 ℃保持1 min；檢測(cè)器參數(shù)為氫氣（H2）流量40 mL/min，空氣流量450 mL/min，柱流量+尾吹氣流量45 mL/min，火焰離子檢測(cè)器（FID）溫度250 ℃

根據(jù)馮宗慈、高民[13]的方法測(cè)定氨態(tài)氮。

2.6 微生物組成

將MRS、BLB、NA、PDA 培養(yǎng)基劃定1×10-1倍、1×10-3倍、1×10-5倍3個(gè)培養(yǎng)區(qū)域，其中CCA 和NA（耐熱）培養(yǎng)基劃定1×10-1倍和1×10-2倍2 個(gè)培養(yǎng)區(qū)域。用無(wú)菌水將聚乙烯袋內(nèi)剩余的菌液進(jìn)行梯度稀釋，連續(xù)稀釋為1×10-1、1×102、1×103、1×10-4及1×10-5倍液。用移液槍移取20 μL，按照培養(yǎng)基中預(yù)先劃分好的區(qū)域?qū)⑾♂屢阂韵雀弑逗蟮捅兜捻樞虻稳肱囵B(yǎng)基中，并用涂菌棒均勻涂開(kāi)。將101和102稀釋液水浴加熱（75 ℃，15 min），快速冷卻后涂CCA、NA（耐熱）培養(yǎng)基。其中MRS、CCA 置于厭氧培養(yǎng)箱（37 ℃）培養(yǎng)，其余置于恒溫培養(yǎng)箱（37 ℃）培養(yǎng)48 h 后取出進(jìn)行菌落數(shù)計(jì)數(shù)。

2.7 體外消化

使用兩頭安裝永久性瘤胃瘺管的雄性大尾寒羊，體重為37±5 kg（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室），在早晨飼喂后2 h 從瘤胃瘺管抽取瘤胃液（所使用的所有工具必須提前預(yù)熱至39 ℃），用紗布過(guò)濾，通入CO2保持厭氧環(huán)境，并以人工唾液：瘤胃夜為4∶1比例均勻混合。人工唾液按照Mc Dougll’s buffer 方法[14]（每1 000 mL 含有氯化鉀0.57 g、碳酸氫鈉9.80 g、氯化鈣0.04 g、十二水磷酸氫二鈉9.30 g、氯化鎂0.06 g、氯化鈉0.47 g、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.25 g、刃天青鈉鹽0.01 g 配制。用天平準(zhǔn)確稱取開(kāi)封后粉碎的青貯0.50 g（干物質(zhì)基礎(chǔ)）提前裝入容量為125 mL 的血清瓶，注入50 mL 混合培養(yǎng)液，迅速封好瓶口，置于39 ℃，100 r/min 的空氣浴振蕩器，培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束后將血清瓶放入冰水中停止發(fā)酵，這時(shí)開(kāi)始進(jìn)行pH 值、干物質(zhì)消失率、產(chǎn)氣量進(jìn)行測(cè)定。

經(jīng)快速定性濾紙過(guò)濾后的培養(yǎng)液10 mL 移到離心試管，經(jīng)高速冷凍離心機(jī)2 200 r/min 離心5 min，上清液移出備用。取出上清液1 mL，加等量的10%偏磷酸溶液（偏磷酸溶解于1 mol/L 硫酸溶液，10%w/v），充分混合（除蛋白）。再經(jīng)高速冷凍離心機(jī)6 000 r/min 離心30 min，得上清液。上清液取0.5 mL，加入標(biāo)準(zhǔn)品20 mmol/L 的丁烯酸0.5 mL 充分混合?；旌弦旱亩∠┧釢舛葹?0 mmol/L（與標(biāo)準(zhǔn)液濃度相同）。再將混合液中加入純磷酸0.01 mL 充分混合（調(diào)整為酸性），將混合后的溶液4 ℃放置一個(gè)晚上。放置后的液體，經(jīng)高速冷凍離心機(jī)6 000 r/min 離心30 min，取上清液，再用0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾后，用高效氣相色譜儀分析乙酸、丙酸、丁酸含量（色譜條件同上）。

2.8 統(tǒng)計(jì)分析

本實(shí)驗(yàn)使用SAS 9.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)差異顯著項(xiàng)目進(jìn)行多重比較，并采用Tukey 檢驗(yàn)用于比較平均數(shù)之間的差異顯著性（P＜0.05）。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 感官品質(zhì)

結(jié)果見(jiàn)表1。由表1 可知，在常溫條件下，青貯后的油莎草均為黃綠色，糖蜜組的酸香味濃于對(duì)照組，質(zhì)地柔軟且水分適宜，無(wú)霉變；在低溫條件下，糖蜜組比對(duì)照組黃，且酸香味濃于對(duì)照組，質(zhì)地柔軟且水分適宜，無(wú)霉變。

表1 不同溫度下添加糖蜜對(duì)油莎草青貯感官品質(zhì)的影響

表2 不同溫度下添加糖蜜對(duì)油莎草青貯一般化學(xué)成分的影響

3.2 化學(xué)成分分析

結(jié)果如表2 所示，在添加處理組中，干物質(zhì)、有機(jī)物和酸性洗滌纖維含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05），粗蛋白、粗脂肪和中性洗滌纖維含量與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）；在溫度處理組中，干物質(zhì)、粗脂肪、有機(jī)物和酸性洗滌纖維含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05），粗蛋白和中性洗滌纖維含量與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）；在添加和溫度處理交互作用下，干物質(zhì)、有機(jī)物和酸性洗滌纖維含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05），粗蛋白、粗脂肪和中性洗滌纖維含量與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）。

3.3 黃酮含量

結(jié)果如表3 所示，在添加處理組、溫度處理組、添加和溫度處理交互作用下黃酮含量與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）。

3.4 發(fā)酵品質(zhì)

結(jié)果如表4 所示，在添加處理組中，pH 值、乳酸和氨態(tài)氮/總氮與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05），乙酸、丙酸和丁酸含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）；在溫度處理組中，pH 值和氨態(tài)氮/總氮與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05），乳酸、乙酸、丙酸和丁酸含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）；在添加和溫度處理交互作用下，pH 值、乳酸和氨態(tài)氮/總氮與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05），乙酸、丙酸和丁酸含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

表3 不同溫度下添加糖蜜對(duì)油莎草青貯黃酮含量的影響

3.5 微生物組成

結(jié)果如表5 所示，在添加處理組中，乳酸菌、耐熱菌、一般細(xì)菌和酵母菌數(shù)量與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）；在溫度處理組中，乳酸菌、一般細(xì)菌和酵母菌數(shù)量與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05），耐熱菌數(shù)量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）；在添加和溫度處理交互作用下，乳酸菌、耐熱菌、一般細(xì)菌和酵母菌數(shù)量與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）；各處理組中均未檢出大腸桿菌、丁酸菌和霉菌。

3.6 干物質(zhì)消失率和揮發(fā)性脂肪酸

結(jié)果如表6 所示，在添加處理組中，干物質(zhì)消失率、pH 值、乙酸、丙酸和氨態(tài)氮含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05），產(chǎn)氣量和丁酸含量與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）；在溫度處理組中，干物質(zhì)消失率、pH 值、產(chǎn)氣量、乙酸、丙酸、和丁酸含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05），氨態(tài)氮含量與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）；在添加和溫度處理交互作用下，干物質(zhì)消失率、pH 值、乙酸、丙酸和氨態(tài)氮含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05），產(chǎn)氣量和丁酸含量與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）。

4 討 論

經(jīng)過(guò)發(fā)酵處理后的飼料質(zhì)地柔軟，水分適宜，并且有濃厚酸味[15]。經(jīng)過(guò)35 d 的青貯后，油莎草青貯均未發(fā)現(xiàn)霉變，主要呈現(xiàn)為黃綠色，質(zhì)地柔軟，不粘手，水分適宜，這與劉輝[16]等研究結(jié)果相同。在低溫條件下發(fā)酵的對(duì)照組還呈草綠色，具有草香味，說(shuō)明低溫對(duì)照組在發(fā)酵35 d 時(shí)還未進(jìn)入發(fā)酵穩(wěn)定期，在低溫條件下青貯發(fā)酵速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于常溫條件[17]。

表4 不同溫度下添加糖蜜對(duì)油莎草青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響

表5 不同溫度下添加糖蜜對(duì)油莎草青貯微生物的影響

表6 不同溫度下添加糖蜜對(duì)油莎草青貯干物質(zhì)消失率及揮發(fā)性脂肪酸的影響

青貯飼料中粗蛋白被降解成氨態(tài)氮，降低有機(jī)物含量，造成一些營(yíng)養(yǎng)損失[18]，這與本研究結(jié)果一致。青貯飼料中的氨態(tài)氮/總氮反應(yīng)了青貯過(guò)程中粗蛋白的分解程度，氨態(tài)氮/總氮愈大時(shí)，表明粗蛋白分解越多，青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)越低[18]。在本實(shí)驗(yàn)中，糖蜜組氨態(tài)氮/總氮顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），粗蛋白含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），說(shuō)明添加糖蜜降低蛋白質(zhì)水解程度。在青貯發(fā)酵的0～7 d 蛋白水解酶活性比較強(qiáng)，蛋白快速被水解，但在發(fā)酵后期蛋白水解酶活性逐漸下降蛋白分解緩慢[20]。研究表明，蛋白水解酶的最適pH 值為6.8～9.8[21]。而在整個(gè)青貯發(fā)酵過(guò)程中由于乳酸含量在發(fā)酵前期快速上升，導(dǎo)致pH 值快速下降，而在發(fā)酵后期乳酸含量和pH 值變化趨于緩和。在本實(shí)驗(yàn)中，糖蜜組的乳酸含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），pH 值顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。由此我們推測(cè)pH 值的下降抑制了蛋白水解酶活性，導(dǎo)致糖蜜組氨態(tài)氮/總氮顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），粗蛋白含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），說(shuō)明添加糖蜜降低蛋白質(zhì)水解程度。Alli 等人評(píng)價(jià)了添加糖蜜對(duì)全株銀合歡青貯的影響，糖蜜以2.25%和4.5%的鮮物基礎(chǔ)進(jìn)行添加，結(jié)果表明，添加組乳酸含量高于對(duì)照組，pH 值降低，減少干物質(zhì)損失，氨態(tài)氮/總氮也低于對(duì)照組，這與本研究的結(jié)果一致。中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維的含量降低。這與顧擁建等[22]的研究結(jié)果相同。在低溫的條件下，糖蜜組的粗蛋白、粗脂肪含量略高于對(duì)照組，有機(jī)物、酸性洗滌纖維和中性洗滌纖維略低于對(duì)照組，這與劉秦華等[23]研究相同。糖蜜組的營(yíng)養(yǎng)成分高于對(duì)照組，說(shuō)明在低溫條件下添加糖蜜對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分的保存有一定的作用。

黃酮類化合物與植物細(xì)胞壁中的木質(zhì)素結(jié)合在一起，青貯過(guò)程可以破壞植物細(xì)胞壁，使得更多的黃酮被釋放出來(lái)[24]。王洋[5]等在乳酸菌添加劑對(duì)苜蓿青貯黃酮含量影響的研究中發(fā)現(xiàn)，處理組黃酮含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。而發(fā)酵品質(zhì)優(yōu)良的青貯酸性洗滌纖維含量低于對(duì)照組，在本研究中，在常溫和低溫條件下糖蜜組黃酮提取量高于對(duì)照組。

乳酸含量高是發(fā)酵品質(zhì)良好的典型特征[25]，在青貯飼料發(fā)酵過(guò)程中，乳酸菌可以有效利用可溶性碳水化合物產(chǎn)生乳酸，以降低pH 值，抑制有害微生物的生長(zhǎng)繁殖，從而獲得品質(zhì)良好的青貯飼料[26]。而青貯中添加糖蜜會(huì)為乳酸的生成，提供更多的發(fā)酵底物[8]。在本試驗(yàn)中，在不同溫度條件下糖蜜組pH 值顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），常溫條件下糖蜜組乳酸含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），低溫條件下乳酸含量雖然與對(duì)照組差異不顯著，但高于對(duì)照組59.02%。

乳酸菌在青貯發(fā)酵中起重要作用，乳酸菌數(shù)量已成為預(yù)測(cè)青貯飼料發(fā)酵充分性的重要因素，通常，乳酸菌數(shù)量達(dá)到105（cfu/g FM）時(shí)，青貯飼料可以很好的保存[27]，在本實(shí)驗(yàn)中，各處理組的乳酸菌數(shù)量均高于105（cfu/g FM），說(shuō)明油莎草青貯發(fā)酵非常充分且保存完好。發(fā)酵是在厭氧環(huán)境下進(jìn)行，隨著發(fā)酵過(guò)程中乳酸菌數(shù)量增加，使得其乳酸含量增加，隨著pH 值的降低，抑制有害微生物的生長(zhǎng)和繁殖[28]。在本試驗(yàn)中，常溫條件下乳酸菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），耐熱菌、一般細(xì)菌和酵母菌顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），這與Cao 等[29]研究結(jié)果相同。低溫會(huì)抑制微生物的生長(zhǎng)，所以微生物數(shù)量都低于常溫，這與王鵬等[30]研究結(jié)果相同。在低溫條件下，糖蜜組的乳酸菌數(shù)量高于對(duì)照組12.85%，耐熱菌、一般細(xì)菌和酵母菌分別低于對(duì)照組8.38%、10.89%和12.89%。

瘤胃內(nèi)的pH 值是衡量瘤胃微生物生態(tài)系統(tǒng)平衡的重要指標(biāo)，也是建立平衡微生物種群的一個(gè)限制性因素[31]。瘤胃內(nèi)pH 值與發(fā)酵產(chǎn)生的氣體成反比[32]，瘤胃內(nèi)氨態(tài)氮是瘤胃微生物蛋白質(zhì)合成的重要氮源[33]，瘤胃微生物蛋白和揮發(fā)性脂肪酸為反芻動(dòng)物提供了大量的蛋白質(zhì)和能量，此外，飼料中的多糖是瘤胃微生物的重要能量和碳源[34]。Yahaya 等[35]研究表明，隨著飼料的青貯時(shí)間延長(zhǎng)纖維的消化率增加，提高青貯飼料的干物質(zhì)消失率。在本試驗(yàn)中，糖蜜組的干物質(zhì)消失率顯著提高（P＜0.05），產(chǎn)氣量、乙酸、丙酸和丁酸高于對(duì)照組，這與Cao 等[36]人的研究結(jié)果一致。在瘤胃中丙酸和甲烷的產(chǎn)生都需要?dú)錃?，因此，丙酸的形成可以被視為氫氣使用的?jìng)爭(zhēng)途徑[37]，當(dāng)乳酸利用細(xì)菌在瘤胃中二次發(fā)酵時(shí)，通常會(huì)產(chǎn)生丙酸鹽[38]，這可以減少甲烷的產(chǎn)生。本研究結(jié)果顯示糖蜜組的丙酸含量高于對(duì)照組，說(shuō)明添加糖蜜在一定程度上可以減少甲烷的產(chǎn)生。

5 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下添加糖蜜可以提高常溫和低溫條件下油莎草青貯的發(fā)酵品質(zhì)和黃酮含量。