劉文博，封全靈

（鄭州大學第三附屬醫(yī)院(河南省婦幼保健院)婦產科，河南 鄭州 450052）

宮頸癌是臨床較為常見的婦科腫瘤疾病[1]，隨著女性兩癌篩查項目的不斷推廣,宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)和早期診斷能力顯著提升,其發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)明顯下降趨勢[2,3]。目前，臨床上多采用新輔助化療(Neoadjuvant chemotherapy，NAC)手段進行治療，由于患者的個體差異性,每位患者對化療的治療反應不盡相同，所以，早期對患者進行的療效進行評估，及時調整化療方案，對于患者的預后具有積極的意義[4]。上皮性鈣粘附蛋白(E-cadhexin)是上皮細胞向具有活性的間質細胞的重要標志蛋白[5]。叉頭框蛋白 (Forkhead box protein M1，F(xiàn)OXM1)的異常表達與患者的有絲分裂錘體缺陷、有絲分裂延遲以及異常具有相關性。內源性非編碼小分子RNA320屬于腫瘤移植性miRNA,通過對患者的腫瘤血管形成的抑制作用,進而抑制患者的腫瘤的發(fā)生發(fā)展[6]。本研究將通過分析聯(lián)合檢測E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320表達水平在評估宮頸癌患者預后中的價值，為臨床治療和診斷提供科學依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以鄭州大學三附院2015年1月至2018年1月收治的200例宮頸癌患者為研究對象,另選同期于我院門診或病房行陰道鏡及組織活檢后病理結果陰性者200例為對照組研究對象。根據(jù)患者的宮頸癌淋巴轉移情況、腫瘤浸潤情況、以及脈管受損情況，將患者分為高、中、低風險3組，其中，高風險組患者是指患者有淋巴結轉移、宮旁浸潤，中風險組患者表現(xiàn)為間質浸潤深度在10mm以上，同時累及脈管；低風險組患者表現(xiàn)為均無淋巴結轉移、宮旁浸潤、間質浸潤深度在10mm以內。本研究中，低風險組患者59例，中風險組患者78例，高風險組患者63例。宮頸癌組患者和健康組的年齡、體重指數(shù)之間的差異不存在統(tǒng)計學意義。本研究獲得我院倫理委員會批準，所有研究對象已簽署知情同意書。

納入標準：⑴宮頸癌組患者均經過病理診斷，符合宮頸癌及癌前病變規(guī)范化診療指南(試行)[7]中關于宮頸癌的診斷標準;⑵宮頸癌組患者均為首次確診為宮頸癌；⑶對照組研究對象的血細胞計數(shù)、肝腎功能、血脂等均正常。排除標準：⑴合并妊娠者;⑵入院前3個月內進行過免疫抑制相關治療者；⑶合并其它部位惡性腫瘤或代謝性疾?。ㄈ缣悄虿〉龋虎热朐呵斑M行過放療或化療者等。

1.2 研究方法

1.2.1 miR-320表達水平檢測 應用宮頸采樣器于研究對象宮頸口順時針旋轉3～5圈后,立即置入含有保護劑的試管,操作中避免血液及其他宮頸分泌物污染，4℃下保存，14d內進行檢測。采用第二代雜交捕獲技術（HC2）檢測研究對象的miR-320表達水平。

1.2.2 E-cadherin、FoxM1蛋白水平檢測 采集患者的宮頸組織進行石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，采用免疫組化法對以上樣本進行E-cadherin、FoxM1蛋白水平檢測。

1.3 觀察指標

1.3.1 疾病組與健康組患者E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平對比 分別對疾病組和健康組患者以及不同風險疾病組患者的E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平對比。

1.3.2 疾病組患者的預后與E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平的相關性分析 使用spearman分析法,對疾病組患者的預后與E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平的相關性分析。

1.3.3 疾病組患者的多因素分析 使用logistic回歸分析,對不同預后組患者的疾病組患者的預后與E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平進行多因素分析。

1.3.4 單獨檢測和聯(lián)合檢測的診斷效能對比觀察分別對E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平的單獨檢測和聯(lián)合檢測的診斷效能對比觀察。

1.4 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)分析采用SPSS20.0進行，計數(shù)資料以[n（%）]表示，使用卡方檢驗比較，等級資料使用秩和檢驗，計量資料以(x±s)表示，兩個組間的均數(shù)比較采用獨立樣本的t檢驗,多組比較使用方差分析,聯(lián)合檢測和單獨檢測效能對比使用ROC曲線分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 疾病組與健康組患者 E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平對比 疾病組患者的E-cadherin、miR-320水平顯著低于健康組，F(xiàn)oxM1蛋白水平顯著高于健康組，通過兩兩比較，隨著患者的預后不良風險的升高,患者的E-cadherin、miR-320水平呈下降趨勢，F(xiàn)oxM1蛋白水平呈上升趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 疾病組與健康組患者E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平對比

2.2 疾病組患者的預后與E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平的相關性分析 通過對疾病組患者的預后與E-cadherin、miR-320水平的相關性分析,疾病組患者的不良預后與E-cadherin、miR-320水平呈負相關，F(xiàn)oxM1水平與患者的不良預后呈現(xiàn)正相關,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 患者的預后與E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平的相關性分析

2.3 疾病組患者的多因素分析 E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平與病情嚴重程度進行多條件多因素Logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平均為宮頸癌不良預后的獨立危險因素，見表3。

表3 疾病組患者的多因素分析

2.4 單獨檢測和聯(lián)合檢測的診斷效能對比觀察經ROC曲線下分析,聯(lián)合檢測患者的診斷效能高于單獨檢測，其靈敏度高于單獨檢測。低風險組患者的E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平臨界值分別為1.77,1.32,1.08；中風險組患者的E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平臨界值分別為1.53,1.36,0.55；高風險組患者的E-cadherin、FoxM1蛋白、miR-320水平臨界值為1.45,1.41,0.31，差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 見表 4。

表4 聯(lián)合檢測與單獨檢測對各組患者的檢測效能對比

3 討論

宮頸癌是臨床婦科的一種常見腫瘤,發(fā)生于女性生殖系統(tǒng)，其發(fā)病率與病死率均較高，據(jù)有關統(tǒng)計[8]，在發(fā)展中國家宮頸癌在女性惡性腫瘤的發(fā)病率中僅次于乳腺癌，死亡率僅次于乳腺癌與肺癌，我國每年新發(fā)病例約有10萬，占世界新發(fā)病例的1/5[9]。宮頸癌早期篩查可早期發(fā)現(xiàn)病例，積極治療，對于提高宮頸癌患者的生活質量及生存時間均具有重要意義。

本研究中,疾病組患者的E-cadherin、miR-320水平顯著下降，F(xiàn)oxM1蛋白顯著升高。分析認為，E-cadherin是由于公認的腫瘤細胞浸潤抑制編碼基因CDH1[10]，而E-cadherin主要可通過對胞內區(qū)與連環(huán)素β-catenin形成復合體，在患者的肌動蛋白細胞骨架中進行表達[11]，對于為此上皮細胞的穩(wěn)定性和粘附作用具有積極的意義。而隨著患者的E-cadherin表達水平降低,患者的復合體解散，隨著E-cadherin水平降低,患者的腫瘤細胞侵襲遷移作用隨之升高，有研究報道顯示[12]，E-cadherin水平的降低與宮頸癌患者的淋巴結轉移具有積極的意義，所以，隨著患者的E-cadherin水平降低，患者的不良風險水平隨之升高。FoxM1可直接作用于患者的細胞周期靶點,在細胞周期的G2/M期，F(xiàn)o xM1可通過對患者的細胞周期進行調控,促使環(huán)氧化酶升高,從而促進患者腫瘤的發(fā)生。同時，F(xiàn)oxM1可以促使患者的血管內皮生長因子水平升高，促進患者的胃癌發(fā)生基因的表達。有研究報道顯示[13]，E7癌蛋白可能是宮頸癌形成的重要原因之一，F(xiàn)oxM1可通過對患者的C-MYC基因的激活，增加患者的細胞對生長因子的敏感性，促進患者的腫瘤發(fā)生。miR-320是一種非特異性促腫瘤細胞生長因子基因,具有促進血管生成、增加細胞的侵襲性、促進腫瘤細胞的增殖分化等作用,且還通過JAK/STAT、HIF、TGF-β等通路參與腫瘤的侵襲、轉移等。亦可通過活化G蛋白偶聯(lián)受體Che mR23，趨化不成熟的樹突細胞、巨噬細胞到達腫瘤部位，參與腫瘤細胞的免疫過程；與內皮細胞膜上的CMKL R1受體集合,起到誘導內皮細胞增殖和促進新生血管叢形成的作用,促進腫瘤細胞的增值生長。所以隨著患者的預后不良風險的升高，患者的E-cadherin、miR-320水平呈下降趨勢，F(xiàn)oxM1蛋白水平呈上升趨勢。楊建敏等[14]通過對患者的FoxM1蛋白水平與宮頸癌分期的相關性研究中指出，隨著患者的病情嚴重程度升高,患者的FoxM1蛋白水平隨之升高。鄧秀文等[15]通過對E-cadherin與患者的預后的研究中得到,隨著患者的E-cadherin表達水平下降，患者的病理程度隨之上升。宋成等[16]通過miR-320水平在宮頸癌患者的研究中指出,宮頸癌患者的miR-320水平與患者的病理狀態(tài)呈現(xiàn)負相關，與本研究相互印證。

另外,本研究以預后風險作為金標準,對E-cadherin、miR-320、FoxM1檢測用于宮頸癌不良風險進行分析發(fā)現(xiàn)，三者的靈敏度、特異度及準確度均不高,尚不足以作為單獨檢測診斷宮頸癌的依據(jù)。通過分析聯(lián)合檢測的診斷效能發(fā)現(xiàn)，敏感度與準確度均高于三者平行聯(lián)合檢測,特異度則相差無幾,同時系列聯(lián)合檢測的ROC曲線下面積高于平行聯(lián)合檢測,因此三者系列聯(lián)合檢測診斷效能較高,具有較高的診斷價值，三者系列聯(lián)合檢測更加適用于宮頸癌的早期診斷。

綜上所述，E-cadherin、miR-320、FoxM1 與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關,三者系列聯(lián)合檢測均可提高預后預測效能，對于宮頸癌預后的早期診斷、及早干預具有積極意義。