張愛娟，馬新剛，梁 林，馮義志，潘金菊，齊曉雪，韓濟峰，左伯軍

(山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院 山東省化學(xué)農(nóng)藥重點實驗室，山東 濟南 250033)

氯吡嘧磺隆(Halosulfuron-methyl，圖1)化學(xué)名稱：3-(4，6-二甲氧基嘧啶-2-基)-1-(1-甲基-3-氯-4-甲氧基甲酰吡唑-5-基)磺酰脲，主要用于防除闊葉雜草和莎草科雜草的新型磺酰脲類除草劑。其作用機理為通過抑制植物的乙酰乳酸合成酶，阻止支鏈氨基酸等生物合成，最終破壞蛋白質(zhì)的合成，干擾DNA的合成及細胞的分裂和生長[1-2]。

目前，對氯吡嘧磺隆的殘留分析報道較少，李軍等[3]采用高效液相色譜建立了糧谷中四唑嘧磺隆、啶嘧磺隆和氯吡嘧磺隆殘留的檢測方法；鐘紅艦等[4]利用超高效液相色譜-質(zhì)譜法對氯吡嘧磺隆在玉米和土壤中的殘留分析方法進行了研究。楊志富等[5]應(yīng)用高效液相色譜法對氯吡嘧磺隆在甘蔗和土壤中的殘留規(guī)律進行了研究；但未見在水稻中殘留分析方法的研究。

本文采用高效液相色譜質(zhì)譜法，參考QuEChERS方法建立了氯吡嘧磺隆在水稻中殘留量分析方法，前處理方法簡便，定量快速、準確，重現(xiàn)性好，可為開展氯吡嘧磺隆在水稻上的風(fēng)險評估及其安全使用研究提供檢測依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(Agilent 1290Ⅱ-6460)；九陽料理機(JYL-C020E)；多管渦旋混合儀(MTV-100)；電子天平(JA21002)；臺式通風(fēng)離心機(Sorvall ST16)。

氯化鈉(分析純)；乙腈(色譜純；分析純)；甲酸(色譜純)；C18填料(為40～60μm)、N-丙基乙二胺吸附劑(PSA)和石墨化碳黑(GCB)；氯吡嘧磺隆標準品(純度為97.0%)。

標準溶液配制：準確稱取0.027 6g氯吡嘧磺隆標準品至25mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，配得質(zhì)量濃度1 071mg/L的標準儲備溶液，置于4℃冰箱中保存，使用時再用乙腈稀釋成氯吡嘧磺隆(100mg/L)的標準溶液。

1.2 糙米、稻殼和秸稈前處理方法 準確稱取用食品調(diào)理儀粉碎的樣品(糙米10.0g、稻殼和秸稈2.0g)于50mL具塞離心管中，加入10mL超純水和10mL乙腈，渦旋5min，加入4g氯化鈉，劇烈振蕩1min，4 000r/min離心5min。取1mL上層清液至裝有50mgC18填料的2mL離心管中，渦旋1min，上清液過0.22μm微孔濾膜，待測。

1.3 色譜條件 色譜柱：Eclipse PlusC18RRHD(50mm×2.1mm，1.8μm)，柱溫：室溫；流動相：0.1%甲酸水溶液+乙腈=30+70(v/v)，流速：0.4mL/min，毛細管電壓：4kV，干燥氣溫度：300℃，干燥氣流量：11L/min，霧化氣壓力：15psi，反應(yīng)氣：N2，采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測模式，在分析過程中，以保留時間和離子對(母離子和2個子離子)信息比較進行定性分析，以母離子和響應(yīng)最高的子離子進行定量分析(表1)。

表1 氯吡嘧磺隆質(zhì)譜條件

1.4 標準曲線制作 將氯吡嘧磺隆(100mg/L)的標準溶液，用乙腈稀釋配成2、0.5、0.1、0.05、0.01mg/L標準溶液，在1.3節(jié)色譜條件下進行測定。每個質(zhì)量濃度重復(fù)3次，以標準工作溶液的質(zhì)量濃度對應(yīng)各組分色譜峰面積作圖。

1.5 添加回收率測定 在空白糙米中按照0.01、0.05、0.5mg/kg，在空白稻殼和秸稈中按照0.05、0.5、5mg/kg添加氯吡嘧磺隆標準品每個濃度5次平行，測定回收率及相對標準偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 氯吡嘧磺隆儀器條件的確定 電噴霧電離(ESI)方式對5mg/L氯吡嘧磺隆標準溶液進行全掃描(m/z100～500)，在正離子采集模式下獲得其[M+1]峰(m/z434.8)，在負離子采集模式下獲得其[M-1]峰(m/z433.0)。正離子模式較負離子模式響應(yīng)高，選用434.8為母離子，試驗中對碰撞電壓等參數(shù)進行了詳細研究，發(fā)現(xiàn)30ev時m/z182.00響應(yīng)高，40ev時m/z139.0響應(yīng)高，確定定量離子對m/z434.8/182.0和定性離子對m/z434.8/139.0。

2.2 凈化劑的選擇 取0.1mg/L氯吡嘧磺隆標樣溶液1mL，置于裝有PSA、C18、GCB的2mL離心管中，渦旋1min。靜置后，取上清液過0.22μm有機濾膜，檢測。結(jié)果顯示，PSA和GCB均對氯吡嘧磺隆表現(xiàn)出明顯的吸附作用，而C18吸附不明顯。選用C18為凈化劑，回收率和相對標準偏差均能得到滿意的結(jié)果。該方法操作簡單、省時，適用于大批量水稻樣品的檢測。

2.3 基質(zhì)效應(yīng) LC-MS/MS分析時的基質(zhì)效應(yīng)是客觀存在的。本試驗采用溶劑標樣與基質(zhì)標樣的相對響應(yīng)值法判斷基質(zhì)效應(yīng)。通過優(yōu)化流動相的比例和流速發(fā)現(xiàn)當(dāng)流速為0.4mL/min，乙腈和0.1%的甲酸水溶液的比例為70和30的條件下，糙米、稻殼和秸稈無明顯基質(zhì)效應(yīng)，且該條件下有效成分與雜質(zhì)能得到很好的分離，峰型對稱，基線平穩(wěn)。

2.4 方法線性關(guān)系 在0.01～2mg/L范圍內(nèi)，氯吡嘧磺隆在乙腈溶液中定量離子峰面積與進樣質(zhì)量濃度間呈良好的線性關(guān)系，y=27 253x+423相關(guān)系數(shù)(r)為0.999 7。

2.5 氯吡嘧磺隆在水稻基質(zhì)中添加回收率和精密度 在空白糙米中按照0.01、0.05、0.5mg/kg，在空白稻殼和秸稈中按照0.05、0.5、5mg/kg添加氯吡嘧磺隆標準品，每個濃度5次平行，測定回收率及相對標準偏差。結(jié)果表明(表2)：在0.01～0.5mg/kg添加水平范圍內(nèi)，氯吡嘧磺隆在糙米中添加回收率為90%～102%，相對標準偏差為2%～4%。在0.05～5mg/kg添加水平范圍內(nèi)，氯吡嘧磺隆在稻殼中添加回收率為75%～87%，相對標準偏差為2%～5%，氯吡嘧磺隆在秸稈中添加回收率為79%～90%，相對標準偏差為1%～4%，符合農(nóng)藥殘留分析要求。目標峰無雜質(zhì)干擾，峰型好典型譜圖(圖2)。

表2 氯吡嘧磺隆在糙米、稻殼和秸稈中的添加回收率及相對標準偏差

3 結(jié)論

本研究參考QuEChERS前處理方法，建立了HPLC-MS/MS檢測糙米、稻殼和秸稈樣品中氯吡嘧磺隆殘留量的分析方法。該方法簡單快速、準確可靠，可滿足農(nóng)藥殘留分析要求，適用于大量樣品的檢測，也可為其他農(nóng)產(chǎn)品及食品中氯吡嘧磺隆的殘留檢測提供參考依據(jù)。