鄭文玲　黃曉玲

[摘要]目的 研究異黏蛋白（MTDH）與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）在上皮性卵巢癌中的表達(dá)，及其與上皮性卵巢癌臨床病理特征間的聯(lián)系。方法 選取本院2017年2月～2019年1月接診的40例上皮性卵巢癌患者作為研究組、20例良性上皮性卵巢癌患者作為常規(guī)組，再選取20例健康者作為健康對(duì)比組。使用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及免疫組化SP法，分別檢驗(yàn)每組患者M(jìn)TDH、VEGF mRNA以及蛋白的表達(dá)。結(jié)果 不同國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期上皮性卵巢癌患者的MTDH mRNA、VEGF mRNA表達(dá)以及MTDH、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;不同淋巴結(jié)擴(kuò)散情況下上皮性卵巢癌患者的MTDH mRNA、VEGF mRNA表達(dá)以及MTDH、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），且在上皮性卵巢癌中MTDH和VEGF的表達(dá)成正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 VEGF及MTDH和上皮性卵巢癌的發(fā)生和惡化均有緊密關(guān)系。

[關(guān)鍵詞]異黏蛋白;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子;上皮性卵巢癌;臨床病理特征

[中圖分類號(hào)] R737.9 ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2020）3（b）-0073-04

Expression of metadherin and vascular endothelial growth factor in epithelial ovarian cancer and its relationship with clinical features of epithelial ovarian cancer

ZHENG Wen-ling? ?HUANG Xiao-ling

Department of Obstetrics and Gynecology， People′s Hospital of Luohu District， Guangdong Province， Shenzhen? ?518000， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of metadherin （MTDH） and vascular endothelial growth factor （VEGF） in epithelial ovarian cancer and its association with the clinicopathological features of epithelial ovarian cancer. Methods Forty patients with epithelial ovarian cancer who were admitted to our hospital from February 2017 to January 2019 were enrolled as study group， 20 patients with benign epithelial ovarian cancer were enrolled in the routine group， and 20 healthy people were selected as healthy comparison group. The expressions of MTDH， VEGF mRNA and protein in ovarian epithelial tissues of each group were examined by reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） and immunohistochemical SP method. Results The expressions of MTDH mRNA， VEGF mRNA and the positive expression rates of MTDH and VEGF in patients with different International Federation of Gynecology and Obstetrics （FIGO） stage epithelial ovarian cancer were significantly different （P<0.05）. MTDH mRNA and VEGF mRNA in patients with epithelial ovarian cancer with different lymph node spread， there were no significant differences in mRNA expression and positive expression rates of MTDH and VEGF （P>0.05）， and there was a positive correlation between the expression of MTDH and VEGF in epithelial ovarian cancer（P<0.05）. Conclusion There is a close relationship between VEGF and MTDH and the occurrence and deterioration of epithelial ovarian cancer.

[Key words] Metadherin; Vascular endothelial growth factor; Epithelial ovarian cancer; Clinicopathological features

目前，臨床中發(fā)病率較高的女性生殖器惡性腫瘤為卵巢癌，該疾病主要發(fā)生在卵巢表皮的上皮組織中，具有極高的死亡率[1]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）會(huì)使腫瘤血管的通透性增強(qiáng)，提高惡性腫瘤的浸潤(rùn)作用，同時(shí)增加內(nèi)皮細(xì)胞的繁殖，促進(jìn)產(chǎn)生腫瘤新生血管，繼而加速惡性腫瘤的擴(kuò)散和惡化[2]。異黏蛋白（metadherin，MTDH）基因也叫星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因1（AEG-1）。相關(guān)資料[3]表明，MTDH不僅能夠誘發(fā)癌癥，也是產(chǎn)生血管的主要物質(zhì)。本研究重點(diǎn)探討VEGF與MTDH在上皮性卵巢癌中的表達(dá)，以及其和上皮性卵巢癌臨床病理特征之間的聯(lián)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2017年2月～2019年1月我院接診的40例上皮性卵巢癌患者作為研究組，選取20例良性上皮性卵巢癌患者作為常規(guī)組，與20例健康人進(jìn)行比較。所有研究對(duì)象的年齡均在24～60歲，平均（33.5±6.2）歲。所有患者術(shù)前均沒(méi)有接受放療和化療。參考國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）（2000年）分期標(biāo)準(zhǔn)發(fā)現(xiàn)，在研究組患者中，10例患者處于Ⅰ、Ⅱ期，30例處于Ⅲ、Ⅳ期。手術(shù)期間取其部分卵巢組織，放入液氮中冷藏，用于RT-PCR檢測(cè)。部分組織使用福爾馬林處理，行石蠟包埋切片，用于免疫組化檢測(cè)。三組的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，且所有研究對(duì)象均詳細(xì)了解研究，簽訂知情同意書(shū)。

1.2方法

1.2.1 RT-PCR半定量檢驗(yàn)? 收集樣品的總RNA，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒，合成cDNA第1鏈。取2 μl的cDNA產(chǎn)物置入0.5 μl TransTaq DNApolymerase、5 μl的BufferⅡ、4 μl目的片段長(zhǎng)度，2.5 mmol/LdNTPs相應(yīng)的上、下游引物各1 μl在50 μl反應(yīng)體系內(nèi)實(shí)施PCR擴(kuò)增，并將GAPDH作為內(nèi)參照物[4]。

1.2.2免疫組化染色? 將樣品切片展開(kāi)微波修復(fù)處理，將免疫組化染化參考SP試劑盒的要求進(jìn)行，再實(shí)施DAB染色[5]。判斷結(jié)果：MTDH表達(dá)主要在細(xì)胞膜后者胞質(zhì)，而VEGF表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞質(zhì)或胞膜呈現(xiàn)棕黃色代表陽(yáng)性。參考癌細(xì)胞的染色程度以及細(xì)胞陽(yáng)性百分比展開(kāi)計(jì)分[6]。染色輕度：無(wú)色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。取每張切片中的5個(gè)視野，計(jì)算細(xì)胞的陽(yáng)性百分率。若陽(yáng)性細(xì)胞≤5%判斷為0分，6%～25%之間為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分?？偡帧?分為陰性（-），2分為弱陽(yáng)性（+），3～4分為陽(yáng)性（++），超過(guò)5分表現(xiàn)為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）[7]。

1.3觀察指標(biāo)

本研究的觀察指標(biāo)為：①不同卵巢上皮組織中MTDH與VEGF mRNA的表達(dá)。②對(duì)比研究組卵巢癌樣品中MTDH、VEGF以及蛋白表達(dá)和臨床病例特點(diǎn)間的聯(lián)系。③三組樣品中MTDH和VEGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Spearman分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組卵巢上皮組織中MTDH與VEGF mRNA表達(dá)的比較

研究組MTDH mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于其他兩組（P<0.05）。且研究組VEGF mRNA的表達(dá)量均高于其他兩組（P<0.05）。但常規(guī)組與健康對(duì)比組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（圖1～2）。

2.2三組卵巢上皮組織中MTDH與VEGF蛋白表達(dá)的比較

研究組MTDH與VEGF蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率高于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。但常規(guī)組與健康對(duì)比組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.3研究組MTDH、VEGF以及蛋白表達(dá)和臨床病理特點(diǎn)間的關(guān)系

不同F(xiàn)IGO分期上皮性卵巢癌患者的MTDH mRNA、VEGF mRNA表達(dá)以及MTDH、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;不同淋巴結(jié)擴(kuò)散情況下上皮性卵巢癌患者的MTDH mRNA、VEGF mRNA表達(dá)以及MTDH、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2～3）。

2.4 MTDH與VEGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性

所有研究對(duì)象中MTDH和VEGF蛋白均表現(xiàn)為陽(yáng)性的患者數(shù)量共有26例，而表現(xiàn)為陰性共有5例，MTDH陽(yáng)性蛋白的表達(dá)與VEGF蛋白的表達(dá)成正相關(guān)（r=0.44，P<0.05）。

3討論

相關(guān)實(shí)驗(yàn)[8]表明，MTDH和乳腺癌、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、腎細(xì)胞癌等眾多癌癥均有緊密聯(lián)系。VEGF屬于促血管生成因子中特異性較高的類型，主要以影響腫瘤生成的方式參與實(shí)體腫瘤的病情發(fā)展過(guò)程中[9]。MTDH基因能夠刺激數(shù)條信號(hào)通路，來(lái)更改相關(guān)基因的表達(dá)，如：c-Myc、Ha-ras等具有的致癌效果[10]。本研究結(jié)果顯示，不同F(xiàn)IGO分期上皮性卵巢癌患者的MTDH mRNA、VEGF mRNA表達(dá)以及MTDH、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;不同淋巴結(jié)擴(kuò)散情況下上皮性卵巢癌患者的MTDH mRNA、VEGF mRNA表達(dá)以及MTDH、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）?，F(xiàn)階段國(guó)內(nèi)外和上皮性卵巢癌組織中MTDH和VEGF表達(dá)相關(guān)的資料相對(duì)較少，本研究相關(guān)性因素分析結(jié)果顯示，MTDH與VEGF蛋白表達(dá)成正相關(guān)（r=0.44，P<0.05）。提示MTDH和VEGF蛋白表達(dá)或許具有協(xié)同作用，其共同介導(dǎo)了卵巢癌的發(fā)病及惡化，上述兩種物質(zhì)共同介入了卵巢癌的發(fā)病及惡化的整體過(guò)程，對(duì)于臨床診斷具有重要意義[11-13]。

綜上所述，MTDH與上皮性卵巢癌的臨床病理特點(diǎn)具有緊密聯(lián)系，且與VEGF的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)[14-15]。MTDH是產(chǎn)生血管的重要物質(zhì)，能夠和VEGF共同調(diào)節(jié)上皮性卵巢癌的發(fā)生、惡化以及擴(kuò)散，同時(shí)檢測(cè)以上兩種指標(biāo)能夠作為上皮性卵巢癌預(yù)后效果的黃金指標(biāo)[16]。

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（收稿日期：2019-07-09? 本文編輯：陳文文）