何興恒 譚剛

摘要：2017年6—10月，對(duì)大渡河重口裂腹魚(yú)的胚胎發(fā)育過(guò)程進(jìn)行了初步研究，結(jié)果表明，成熟魚(yú)卵呈卵圓形，受精卵吸水膨脹后，平均卵徑約3.5 mm，淡黃色或橘黃色，弱黏性的沉性卵。其胚胎發(fā)育過(guò)程經(jīng)歷胚盤(pán)、卵裂、囊胚、原腸胚、神經(jīng)胚、器官形成和出膜7個(gè)階段。在水溫16～18 ℃的情況下，受精卵經(jīng)歷134 h左右孵出仔魚(yú)，出膜仔魚(yú)平均全長(zhǎng)9.8 mm。

關(guān)鍵詞：大渡河;重口裂腹魚(yú);胚胎發(fā)育

中圖分類號(hào)：S961.2?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2020）04-0164-04

收稿日期：2018-12-16

作者簡(jiǎn)介：何興恒（1985—），男，四川南充人，水產(chǎn)工程師，主要從事水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)研究。E-mail：416186795@qq.com。

通信作者：譚?剛，碩士研究生，水產(chǎn)工程師助理，主要從事魚(yú)類分類、魚(yú)類生態(tài)和水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)研究。E-mail：164683932@qq.com。

重口裂腹魚(yú)（Schizothorax davidi Sauvage）屬于鯉形目、鯉科、裂腹魚(yú)亞科、裂腹魚(yú)屬，分布于大渡河中、下游及支流，岷江及支流，沱江、涪江、嘉陵江和渠江上游及任河[1-2]，是長(zhǎng)江上游重要的冷水經(jīng)濟(jì)魚(yú)類之一。近十幾年來(lái)，由于人為的過(guò)度捕撈和各級(jí)水電站的建設(shè)等原因，對(duì)重口裂腹魚(yú)生態(tài)環(huán)境造成了很大的影響，導(dǎo)致其野生資源量急劇下降。大渡河黑馬魚(yú)類增殖站近幾年對(duì)大渡河的重口裂腹魚(yú)等珍稀瀕危魚(yú)類進(jìn)行了人工馴化、繁育，以期為大渡河流域?qū)嵤┢涮赜薪?jīng)濟(jì)魚(yú)類的人工增殖放流提供技術(shù)和苗種保障。

目前對(duì)重口裂腹魚(yú)的人工繁殖[2-4]、形態(tài)發(fā)育[5-7]等方面已有了少數(shù)研究，但關(guān)于其人工催產(chǎn)和胚胎發(fā)育還未見(jiàn)報(bào)道，因此，筆者于2017年6—10月，對(duì)重口裂腹魚(yú)的胚胎發(fā)育過(guò)程進(jìn)行了初步研究，以期為重口裂腹魚(yú)的人工繁育和增殖放流提供基礎(chǔ)資料。

1?材料與方法

本試驗(yàn)所用重口裂腹魚(yú)野生親魚(yú)是在大渡河中、下游水域捕獲，于大渡河黑馬魚(yú)類增殖放流站進(jìn)行馴化和人工繁殖。本研究所用親魚(yú)雌、雄比例為3 ∶1。2017年5月開(kāi)始對(duì)其進(jìn)行沖水強(qiáng)化培育，9月開(kāi)始進(jìn)行人工催產(chǎn)。雌魚(yú)采用2次體腔注射的方法，第1次注射為1/3劑量，第2次注射剩余劑量。雄魚(yú)采用一次性體腔注射的方法，注射劑量為雌魚(yú)總劑量的1/2。

本研究采用干法受精，獲得的魚(yú)卵加入精液后用少量清水激活，靜置20 s左右，用清水漂洗3～4次，將血塊和多余的精液去除。將受精卵放入準(zhǔn)備好的孵化篩中進(jìn)行微流水孵化，水溫控制在16～18 ℃。每隔一定時(shí)間段，取同一批次的受精卵10枚置于顯微鏡下進(jìn)行觀察、記錄。相機(jī)記錄時(shí)間以同批受精卵一半以上出現(xiàn)相同發(fā)育時(shí)期為準(zhǔn)。

2?結(jié)果與分析

2.1?受精卵

重口裂腹魚(yú)裂腹魚(yú)卵為沉性卵，呈現(xiàn)多種顏色如淡黃色或橘黃色或淡灰色等，不同個(gè)體的卵顏色不一定相同，這可能是因?yàn)閭€(gè)體差異、食物和環(huán)境等因素導(dǎo)致。受精卵具有弱黏性，隨著時(shí)間黏性逐漸消失，卵膜吸水膨脹至最大，卵徑約為3.5 mm（圖1-2）。

2.2?胚盤(pán)形成階段

受精后1 h 5 min，可見(jiàn)原生質(zhì)呈絲狀向動(dòng)物極集中，并逐漸隆起形成胚盤(pán)，呈直立狀（圖1-3、表1）。受精后1 h 52 min，動(dòng)物極出現(xiàn)明顯的胚盤(pán)，隆起高度約占卵黃的1/3，此時(shí)胚體呈側(cè)臥狀，此階段為胚盤(pán)期（圖1-4）。

2.3?卵裂階段

重口裂腹魚(yú)的卵裂發(fā)生于胚盤(pán)，為盤(pán)狀卵裂。受精后2 h 30 min，胚盤(pán)隆起中部逐漸下陷形成分裂溝，將胚盤(pán)分裂為2個(gè)大小相似的分裂球，為2細(xì)胞期（圖1-5）。受精后3 h 42 min，再次分裂，并與第一次分裂面相垂直，形成4個(gè)大小相似的細(xì)胞，進(jìn)入4細(xì)胞期（圖1-6），由于重心降低，胚盤(pán)再次轉(zhuǎn)為直立。受精后4 h 56 min，出現(xiàn)第3次分裂，2條分裂溝與第1次分裂溝平行，與第2次分裂溝垂直，形成2排4列8個(gè)大小相似的分裂球，此為8細(xì)胞期（圖1-7）。受精后6 h 25 min，進(jìn)行第4次分裂，與第2次分裂溝平行，形成16個(gè)細(xì)胞。均勻排列為4排，每排4個(gè)，大小相似，但單個(gè)細(xì)胞已明顯變小，此為16細(xì)胞期（圖1-8）。受精后7 h 30 min，出現(xiàn)第5次分裂，單個(gè)細(xì)胞進(jìn)一步顯小，細(xì)胞分裂進(jìn)入32細(xì)胞期（圖1-9）。受精后8 h 35 min，開(kāi)始出現(xiàn)第6次分裂，分裂溝出現(xiàn)的同步性較差，并且開(kāi)始緯向分裂，細(xì)胞團(tuán)有向上隆起的趨勢(shì)，其外緣細(xì)胞排列由方形過(guò)渡為圓形，由于重心變化，胚胎開(kāi)始逐漸側(cè)臥，進(jìn)入64細(xì)胞期（圖1-10）。受精后11 h7 min，隨著分裂球細(xì)胞不斷增多，細(xì)胞進(jìn)一步變小，向上堆積隆起，但細(xì)胞界限明顯，形似桑葚，稱為桑葚期，即多細(xì)胞期（圖1-11）。胚胎逐漸由直立轉(zhuǎn)為明顯側(cè)臥狀。

2.4?囊胚階段

受精后12 h 4 min，動(dòng)物極細(xì)胞繼續(xù)分裂。分裂球數(shù)急劇增多，使胚體呈側(cè)臥狀。隨之囊胚腔的出現(xiàn)，胚胎發(fā)育進(jìn)入囊胚初期（圖1-12）。受精后14 h 30 min，隨著分裂球細(xì)胞分裂的次數(shù)遞增，細(xì)胞越來(lái)越小，再也看不出細(xì)胞界限，在動(dòng)物極分裂球細(xì)胞隆起達(dá)到最高，約占卵球高度的1/4，此為囊胚中期，又稱高囊胚期（圖1-13）。受精后16 h41 min，囊胚細(xì)胞向邊緣擴(kuò)展，胚盤(pán)逐漸降低，呈小帽狀覆蓋在卵黃體上，胚體逐漸轉(zhuǎn)為半直立狀態(tài)，胚胎發(fā)育進(jìn)入囊胚晚期，又稱低囊胚期（圖1-14）。

2.5?原腸胚階段

受精后26 h 5 min，分裂球細(xì)胞由動(dòng)物極向植物極移動(dòng)下包，至卵黃高度的1/3，標(biāo)志著原腸作用開(kāi)始，邊緣細(xì)胞較大且排列平坦，胚胎由側(cè)臥逐漸轉(zhuǎn)為直立，此為原腸早期（圖1-15）。受精后34 h 49 min，胚層下包至卵黃囊的1/2時(shí)，在動(dòng)物極和植物極之間出現(xiàn)胚環(huán)。在胚環(huán)上，胚層細(xì)胞移動(dòng)集中增厚，形成胚盾。此時(shí)胚胎由直立又逐漸轉(zhuǎn)為側(cè)臥狀態(tài)，為原腸中期（圖1-16）。

受精后38 h 36 min，胚層繼續(xù)下包至卵黃囊的2/3處，此時(shí)，胚層包圍了大部分卵黃。隨之胚盾伸長(zhǎng)，前端略顯膨大，胚胎發(fā)育進(jìn)入原腸晚期（圖1-17）。受精后41 h 26 min。下包至3/4，進(jìn)入大卵黃栓期（圖1-18）。受精后42 h 57 min，胚層繼續(xù)下包至卵黃的5/6處，僅露出極少卵黃，進(jìn)入小卵黃栓期（圖1-19）。受精后45 h 57 min，胚層完全包裹住卵黃，胚孔封閉，稱為胚孔封閉期（圖1-20）。

2.6?神經(jīng)胚階段

受精后48 h 34 min，在胚體的中軸線上出現(xiàn)神經(jīng)索，胚體前端逐漸膨大形成腦泡。整個(gè)胚體緊貼于卵黃囊上，胚胎發(fā)育進(jìn)入神經(jīng)胚期（圖1-21）。

2.7?器官形成階段

受精后51 h 44 min，在胚體前端形成眼泡，呈橢圓形結(jié)構(gòu)（圖1-22），幾乎同時(shí)，胚體中部出現(xiàn)2～5對(duì)肌節(jié)。受精后55 h 40 min，胚體眼泡內(nèi)出現(xiàn)凹陷，肌節(jié)為5～7對(duì)，即眼囊出現(xiàn)期（圖1-23）。

受精后60 h，胚體肌節(jié)數(shù)增多，肌節(jié)增加為25對(duì)左右時(shí)，背部肌節(jié)開(kāi)始出現(xiàn)緩慢微弱的運(yùn)動(dòng)，是為肌肉效應(yīng)期。受精后64 h 48 min耳囊原基出現(xiàn)（圖1-24），受精后71 h 37 min，胚體尾部開(kāi)始與卵黃囊分離，尾芽伸長(zhǎng)（圖1-25）。此時(shí)肌節(jié)為25對(duì)左右。受精后74 h 18 min，胚體頭部腹面與卵黃囊前端間出現(xiàn)1個(gè)小的空隙，即為圍心腔，其內(nèi)形成一斜長(zhǎng)的較透明細(xì)胞團(tuán)，是為心臟原基期。隨著尾芽的伸長(zhǎng)，卵黃囊被分為球狀囊和一小部分被牽拉向后延伸成棒狀（圖1-26～29）。

受精后77 h 7 min，胚體扭動(dòng)頻率增加為18次/min，主要以胚體中部第3～7對(duì)肌節(jié)產(chǎn)生收縮效應(yīng)帶動(dòng)胚體尾部一起形成扭動(dòng)。受精后80 h 37 min，眼晶體出現(xiàn)（圖1-27）。同時(shí)，胚體扭動(dòng)次數(shù)增至25次/min左右，以胚體尾部左右擺動(dòng)為主，如此反復(fù)。由于此時(shí)尾部伸長(zhǎng)較快，可帶動(dòng)整個(gè)胚體及卵黃囊在膜內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)。隨后，心臟形成，為較透明管狀，并開(kāi)始搏動(dòng)。搏動(dòng)次數(shù)35～50次/min。受精后85 h 58 min，兩側(cè)耳囊內(nèi)各出現(xiàn)1對(duì)耳石（圖1-28）。此時(shí)胚體尾部無(wú)規(guī)律的左右擺動(dòng)，并帶動(dòng)整個(gè)胚體及卵黃囊在卵膜內(nèi)大幅度轉(zhuǎn)動(dòng)。在耳囊后下方，形成月牙狀的胸鰭原基。受精后90 h 8 min，胚體吻端形成1對(duì)嗅囊（圖1-29）。

2.8?出膜階段

受精后131 h 52 min，部分仔魚(yú)開(kāi)始出膜。134 h 后，逾半數(shù)仔魚(yú)孵化出膜。139 h 45 min出膜完成，整個(gè)出膜歷時(shí)7 h 53 min。出膜前，卵膜在孵化酶的作用下逐漸變軟變薄[6]，胚體在膜內(nèi)運(yùn)動(dòng)加劇，時(shí)而旋轉(zhuǎn)，時(shí)而翻滾，最終以尾部或頭部首先破膜。

初孵仔魚(yú)通體透明，體色素尚未形成。全長(zhǎng)9.8～10.2 mm。卵黃囊前端球狀，后端呈棒狀，緊貼仔魚(yú)腹部（圖1-30）。多數(shù)時(shí)間側(cè)臥于容器底部，間歇性作塵焰式向上運(yùn)動(dòng)。

3?討論

3.1?重口裂腹魚(yú)胚胎發(fā)育與其他裂腹魚(yú)比較

重口裂腹魚(yú)的胚胎發(fā)育過(guò)程同其他裂腹魚(yú)屬魚(yú)類較為一致，但也有不同之處（表2）。主要表現(xiàn)：（1）吸水膨脹后的卵徑差異，重口裂腹魚(yú)卵徑為3.5 mm，小于四川裂腹魚(yú)（S.kozlovi）（3.7 mm）[8-9]、松潘裸鯉（Gymnocypris potanini）（4.0 mm）[10]、細(xì)鱗裂腹魚(yú)（S.chongi）（3.8 mm）[11]、齊口裂腹魚(yú)（S.prenanti）（4.2 mm）[12]、短須裂腹魚(yú)（S.wangchiachii）（3.9～4.1 mm）[13-14]和長(zhǎng)絲裂腹魚(yú)（S.dolichonema）（4.2 mm）[15]的卵徑;大于小裂腹魚(yú)（S.parvus）（3.0 mm）[16]、伊犁裂腹魚(yú)（S.pseudaksaiensis）（2.9～3.1 mm）[17]、塔里木裂腹魚(yú)（S.biddulphi）（2.9 mm）[18]和光唇裂腹魚(yú)（S.lissolabiatus）（3.2 mm）[19];（2）耳囊期出現(xiàn)時(shí)期不同，重口裂腹魚(yú)的耳囊期出現(xiàn)在尾牙期之前，與短須裂腹魚(yú)、齊口裂腹魚(yú)和塔里木裂腹魚(yú)相同，而四川裂腹魚(yú)、細(xì)鱗裂腹魚(yú)、伊犁裂腹魚(yú)、長(zhǎng)絲裂腹魚(yú)和小裂腹魚(yú)的耳囊期出現(xiàn)在尾牙期之后;（3）肌肉效應(yīng)期出現(xiàn)時(shí)期不同，重口裂腹魚(yú)的肌肉效應(yīng)期出現(xiàn)在晶體期之前，與短須裂腹魚(yú)、齊口裂腹魚(yú)、松潘裸鯉、小裂腹魚(yú)和塔里木裂腹魚(yú)相同，而與光唇裂腹魚(yú)、細(xì)鱗裂腹魚(yú)和長(zhǎng)絲裂腹魚(yú)不同;（4）初孵仔魚(yú)長(zhǎng)度不同，重口裂腹魚(yú)的初孵仔魚(yú)長(zhǎng)度（9.8 mm），小于齊口裂腹魚(yú)（11.0 mm）和短須裂腹魚(yú)（10.9 mm），大于四川裂腹魚(yú)（7.8～8.5 mm）、小裂腹魚(yú)（7.5 mm）、伊犁裂腹魚(yú)（7.9 mm）、塔里木裂腹魚(yú)（7.3 mm）和光唇裂腹魚(yú)（8.5 mm）。

3.2?水溫對(duì)重口裂腹魚(yú)胚胎發(fā)育的影響

水溫是影響魚(yú)類胚胎發(fā)育和仔魚(yú)胚后發(fā)育的重要因素之一。水溫過(guò)高會(huì)縮短整個(gè)發(fā)育過(guò)程，并且引起畸形苗出現(xiàn)概率增大;水溫過(guò)低會(huì)延長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程，并引起胚胎發(fā)育過(guò)程死亡率增加，還會(huì)使仔魚(yú)生長(zhǎng)緩慢等情況。本研究用山泉水對(duì)重口裂腹魚(yú)受精卵進(jìn)行孵化，水溫在16～18 ℃，這與其在自然條件下繁殖水溫度14～19 ℃較為接近。在水溫16～18 ℃時(shí)，采用微流水的環(huán)境，受精卵出膜率能夠達(dá)到85%以上，并且畸形苗出現(xiàn)率最低。重口裂腹魚(yú)的胚胎發(fā)育溫度與齊口裂腹魚(yú)（16.8 ℃）、細(xì)鱗裂腹魚(yú)（17 ℃）、塔里木裂腹魚(yú)（16～19 ℃）、光唇裂腹魚(yú)（15～17 ℃）相接近，但發(fā)育經(jīng)歷時(shí)間要小于光唇裂腹魚(yú)（174.3 h），高于塔里木裂腹魚(yú)（93 h）和細(xì)鱗裂腹魚(yú)（124 h），與齊口裂腹魚(yú)（134 h）相近，這可能由生存環(huán)境、分布區(qū)域和物種差異等原因引起。

3.3?重口裂腹魚(yú)胚胎發(fā)育過(guò)程的注意事項(xiàng)

重口裂腹魚(yú)屬于冷水性魚(yú)類，胚胎發(fā)育過(guò)程中，需要及時(shí)地清除孵化篩中的死卵和漂浮在卵周圍的飛蛾等生物，防止霉變，此外還要保持孵化水流速度、水溫、pH值等。當(dāng)發(fā)育到出膜期的時(shí)候，需要將孵化篩轉(zhuǎn)移到小型孵化盆中，并減少進(jìn)水量。

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