周秋蓮 張林 田前進(jìn) 申子昂 李新賢

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)系 廣東 廣州 510000 2.煙臺(tái)青旗農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司 山東 煙臺(tái) 264000）

草莓的離體快繁一般采用莖尖培養(yǎng)獲得脫毒幼芽，通過(guò)叢芽培養(yǎng)增殖，再將叢芽分出單芽進(jìn)行生根培養(yǎng)后練苗移栽[1-3]。有關(guān)草莓叢芽培養(yǎng)的研究表明，適當(dāng)?shù)募?xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的配比是提高培養(yǎng)效率的關(guān)鍵[4-6]，一般細(xì)胞分裂素用0.5mg/L 濃度的6-BA[3、7-10]，生長(zhǎng)素用濃度0～0.5mg/L 的NAA[3、7-8、11-13]。何歡樂(lè)等[3]認(rèn)為草莓“豐香”最優(yōu)的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L，潘超等[9]認(rèn)為“紅豐”品種的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.2～1.0mg/L，二者均不需要添加NAA。而翟婷婷等[14]認(rèn)為“紅顏”和“甜查理”增殖培養(yǎng)基最適宜的NAA 濃度分別為0.1mg/L 和0.5mg/L，李慧采用濃度為0.2mg/L 的NAA 獲得了較高的不定芽再生率。李曉亮的研究表明，高濃度的生長(zhǎng)素（NAA）會(huì)誘導(dǎo)叢芽產(chǎn)生愈傷組織，而愈傷組織的形成會(huì)影響草莓種苗的綜合素質(zhì)[13]。目前關(guān)于叢芽增殖培養(yǎng)基的報(bào)道多以一至兩個(gè)草莓品種作為供試材料，對(duì)于叢芽增殖培養(yǎng)中NAA 的效應(yīng)，尤其是NAA 濃度與草莓品種的互作還鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)選用草莓品種豐香、佐賀清香和盧比，研究NAA 濃度對(duì)不同草莓品種叢芽培養(yǎng)的影響，為建立高效的草莓離體繁殖體系提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

以豐香、佐賀清香和盧比三個(gè)草莓品種的脫毒試管苗為材料，取其中生長(zhǎng)健壯的單芽接種。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

基本培養(yǎng)基為MS 培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，瓊脂8.0g/L，6-BA 的濃度為0.5mg/L，不同處理的NAA 濃度分別為0（對(duì)照組）、0.05、0.10、0.15 和0.20mg/L，每個(gè)濃度處理接種芽30 個(gè)（6 瓶），設(shè)3 次重復(fù)。在25℃，光照/黑暗為12h/12h，光照強(qiáng)度1500lux 的條件下培養(yǎng)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

接種第30d，對(duì)每個(gè)外植體進(jìn)行調(diào)查，觀察長(zhǎng)度大于0.5cm幼芽數(shù)量，以及愈傷組織有無(wú)，若基部發(fā)生愈傷組織的則測(cè)量愈傷組織的直徑。按以下公式計(jì)算叢芽增殖系數(shù)：

增殖系數(shù)=培養(yǎng)30d 的幼芽總數(shù)/接種外植體總數(shù)

數(shù)據(jù)通過(guò)軟件SAS9.2 進(jìn)行方差分析、平均數(shù)的多重比較以及相關(guān)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 NAA 濃度對(duì)草莓品種叢芽增殖系數(shù)的影響

叢芽增殖系數(shù)的NAA 濃度和品種兩因素方差分析結(jié)果表明，草莓品種間、NAA 濃度間均存在極顯著（P＜0.01，下同）差異，草莓品種和NAA 濃度之間也存在極顯著的互作，以下就各個(gè)品種在不同NAA 濃度下的叢芽增殖系數(shù)分別進(jìn)行分析。

各個(gè)處理三個(gè)重復(fù)的叢芽增殖系數(shù)平均數(shù)列于表1。

豐香在叢芽增殖培養(yǎng)基中增殖系數(shù)隨NAA 濃度的增高而下降（表1）。NAA 濃度為0mg/L 增殖系數(shù)最大，為2.47；NAA 濃度為0.05mg/L 時(shí)，增殖系數(shù)為2.20，與0mg/L 處理無(wú)顯著性差異；NAA 濃度為0.1mg/L 時(shí)，增殖系數(shù)為1.72，下降幅度加大，與前兩個(gè)處理間存在顯著性差異；NAA 濃度增加到0.15mg/L 時(shí)，增殖系數(shù)為1.96，與0.1mg/L 處理無(wú)顯著性差異；NAA 濃度為0.2mg/L時(shí)，增殖系數(shù)最低，為1.48。

表1 不同NAA 濃度下的草莓品種叢芽增殖系數(shù)

盧比在不同濃度NAA 的處理中叢芽增殖系數(shù)表現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)。NAA 濃度為0.05mg/L 時(shí)，獲得最高增殖系數(shù)（2.98），與其它4 個(gè)處理間達(dá)到顯著性差異；NAA 濃度為0、0.1mg/L 和0.15mg/L 處理的增殖系數(shù)相近，僅相差約0.2；NAA 濃度為0.20mg/L 時(shí)，增殖系數(shù)低至2.07。

佐賀清香不同濃度NAA 的處理之間叢芽增殖系數(shù)都有顯著性差異，也表現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)。0mg/L 時(shí)增殖系數(shù)最低為2.28，0.05mg/L 處理增殖系數(shù) 略有增加，為2.74；NAA 濃 度0.10mg/L 時(shí)，增殖系數(shù)最高，為3.87；NAA 濃度為0.15mg/L 時(shí)，增殖系數(shù)下降了0.52，為3.36；NAA 濃度為0.2mg/L 時(shí)，增殖系數(shù)為2.73，是所有處理中最小的。

本研究結(jié)果表明，NAA 濃度對(duì)草莓離體繁殖的效率有顯著作用，存在兩種作用模式：一種是無(wú)添加NAA 的處理繁殖系數(shù)最高，NAA 濃度增高繁殖系數(shù)呈下降趨勢(shì)，如品種豐香；另一種是添加適當(dāng)?shù)腘AA 有利于芽增殖，超過(guò)一定限度時(shí)增殖系數(shù)下降，盧比和佐賀清香分別在NAA 濃度0.05 和0.1mg/L 處理呈現(xiàn)最高增殖系數(shù)。3 個(gè)品種的數(shù)據(jù)一致顯示，NAA 濃度太高對(duì)芽增殖不利，當(dāng)濃度達(dá)到0.2mg/L 時(shí)，繁殖系數(shù)均較低。

2.2 NAA 濃度對(duì)草莓叢芽繁殖外植體愈傷組織形成的影響

愈傷組織直徑的兩因素方差分析結(jié)果表明，草莓品種間、NAA 濃度間均存在極顯著（P＜0.01，下同）差異，說(shuō)明NAA 濃度和基因型對(duì)叢芽繁殖外植體愈傷組織的形成都有作用，草莓品種和NAA 濃度之間也存在極顯著的互作。

各個(gè)處理三個(gè)重復(fù)的愈傷組織直徑平均數(shù)列于表2。

表2 不同NAA 濃度下草莓品種叢芽培養(yǎng)外植體的愈傷組織直徑（cm）

表2 可見(jiàn)，3 個(gè)供試品種在不同濃度NAA 的叢芽增殖培養(yǎng)基中，愈傷組織直徑都有顯著差異，而且NAA 濃度愈高，愈傷組織的直徑愈大。各個(gè)品種不添加NAA 的處理皆未見(jiàn)愈傷組織，開(kāi)始形成愈傷組織的NAA 濃度不同，盧比和佐賀清香在0.1mg/L下觀察到愈傷組織形成，而豐香在0.15mg/L 開(kāi)始形成愈傷組織。在相同NAA 濃度下，不同品種的愈傷組織直徑也是不同的，愈傷組織直徑最大的是在較低NAA 濃度下就可見(jiàn)愈傷組織的佐賀清香品種。盧比在0.1mg/L 濃度下有少量愈傷組織，大于未形成愈傷組織的豐香；而在0.15mg/L 和0.2mg/L 濃度下豐香的愈傷組織直徑大于盧比。對(duì)愈傷組織直徑與芽繁殖系數(shù)進(jìn)行了相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)為0.2557，二者無(wú)顯著相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明在此實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)期間內(nèi)愈傷組織的形成并未對(duì)叢芽增殖造成大的影響。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，NAA 對(duì)草莓離體培養(yǎng)芽增殖的作用隨品種而不同。豐香繁殖系數(shù)隨NAA 濃度增高而降低，NAA 為0 時(shí)繁殖系數(shù)最高；盧比和佐賀清香則先增后降，分別在添加0.05mg/L 和0.1mg/LNAA 的培養(yǎng)基中得到最佳增殖系數(shù)。NAA 濃度達(dá)到0.2mg/L 時(shí)，3 個(gè)品種繁殖系數(shù)均顯著下降。

草莓是一種在組培快繁過(guò)程中極易發(fā)生變異的作物[15]，許多研究表明，在組織培養(yǎng)的愈傷組織階段易于產(chǎn)生遺傳性的變異。李曉亮等[13]認(rèn)為NAA 濃度的增加會(huì)轉(zhuǎn)變根的發(fā)生方式（根從愈傷組織發(fā)出），最終影響草莓種苗的綜合素質(zhì)[17]。因此，在芽增殖系數(shù)相同的情況下，以不形成或少形成愈傷組織的培養(yǎng)條件為好。本研究中雖然0.05mg/L 和0.1mg/LNAA 中盧比和佐賀清香得到了較高的芽增殖系數(shù)，但由于有不同程度的愈傷組織形成，發(fā)生變異的風(fēng)險(xiǎn)較大。而在6-BA 添加濃度為0.5mg/L、NAA 為0時(shí)，3 個(gè)品種均未產(chǎn)生愈傷組織。因此，可以初步認(rèn)為該激素配比是相對(duì)安全的。

有關(guān)草莓組培中激素和品種間的互作，袁惠燕在不同6-BA濃度的草莓莖尖培養(yǎng)中觀察到，供試草莓品種受激素條件的影響不同可分為兩種，穩(wěn)定型品種莖尖培養(yǎng)易得到良好效果，而敏感型品種只有選擇最適激素條件才能獲得滿意的培養(yǎng)效果[16]。本研究也觀察到了基因型與NAA 濃度的互作。因此，種苗離體快繁中有必要為不同品種配套合適的激素濃度。