馬媛　仝景晨　王媛媛

【摘要】目的：研究皮膚洗劑中常用的黃柏、苦參、黃連、黃芩等兩種配伍對(duì)臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和不耐藥的金黃色葡萄球菌的體外抑菌作用。方法：微量二倍稀釋法測(cè)最小抑菌濃度（MIC），用平板涂布法測(cè)最小殺菌濃度（MBC）。結(jié)果：皮膚抗感染1號(hào)方劑飲片合煎劑及其顆粒劑對(duì)不耐藥的金黃色葡萄球菌和臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌均有抑制作用;皮膚抗感染2號(hào)方劑水煎劑對(duì)不耐藥的金黃色葡萄球菌和臨床耐甲氧西林葡萄球菌均有抑制作用，對(duì)不耐藥的金黃色葡萄球菌效果更為顯著。結(jié)論：中藥不同配伍對(duì)不耐藥的金黃色葡萄球菌和臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌均存在體外抑菌作用，但對(duì)耐藥性細(xì)菌和不耐性細(xì)菌影響是不一樣的。

【關(guān)鍵詞】金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC29213）;臨床耐甲氧西林葡萄球菌;中藥配伍;抑菌

金黃色葡萄球菌是常見(jiàn)的革蘭氏陽(yáng)性致病菌，它經(jīng)常引起臨床上的化膿性感染，也是引起醫(yī)源性感染的常見(jiàn)病原體菌。隨社會(huì)發(fā)展和人類疾病譜的改變，由創(chuàng)傷引起的皮膚感染和潰瘍當(dāng)中的一些細(xì)菌對(duì)阿莫西林的耐藥率高達(dá)100%，耐藥率從高到低依次為青霉素.鏈霉素等抗生素。檢測(cè)新生兒皮膚上的金黃色葡萄球菌發(fā)現(xiàn)其對(duì)頭孢唑林、阿莫西林等具有較好的抗菌性。然而，在我國(guó)源遠(yuǎn)流長(zhǎng)的中藥史中，發(fā)現(xiàn)中草藥對(duì)臨床上的一些細(xì)菌性疾病有比較好的治療作用，同時(shí)中藥配方也可減慢細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生，這對(duì)治療細(xì)菌性疾病有重要的意義。經(jīng)查閱文獻(xiàn)并訪問(wèn)臨床大夫發(fā)現(xiàn)黃柏、苦參、公英、地丁、野菊花配伍在臨床外用治療臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的引起的皮膚感染效果較強(qiáng)，黃連、黃芩、苦參、板藍(lán)根配伍不耐藥的金黃色葡萄球菌和效果不一樣。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1菌株：普通不帶耐藥性的金黃色葡萄球菌菌株ATCC 29213（簡(jiǎn)稱金葡），臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（簡(jiǎn)稱金臨），陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，通過(guò)分離培養(yǎng)按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第四版進(jìn)行，選用法國(guó)梅里埃公司VITEK～2 Compact全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行菌種鑒定。

1.2皮膚抗感染1號(hào)方劑：黃柏，苦參，公英，地丁，野菊花。

皮膚抗感染2號(hào)方劑：黃連，黃芩，苦參，板藍(lán)根。

1.3培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，MH培養(yǎng)基。

1.4器材：生物安全柜：BBS-SDC型，濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司、搖床：TS-100C型，上海天呈實(shí)驗(yàn)儀器制造有限公司、酶標(biāo)儀：RT～2100C型，深圳市電子有限公司、分光光度計(jì)：723型，上海光譜儀器有限公司、恒溫培養(yǎng)箱：LRH-250A，廣東省醫(yī)療器械廠、超凈工作臺(tái)、無(wú)菌96孔聚乙烯U形微量板、KDC-40低速離心機(jī)，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司、手提式壓力蒸汽滅菌器：YX～型，江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司、移液槍及槍頭、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、酒精燈、電藥鍋、量筒、燒杯、玻璃棒、錐形瓶、試管等。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1中藥制備 ①制備皮膚抗感染1號(hào)方劑飲片：水煎后濃縮至藥液濃度為1.85g/ml。②制備皮膚抗感染2號(hào)方劑：水煎后濃縮至藥液濃度為0.83g/ml。③分別制備皮膚抗感染1號(hào)方劑和皮膚抗感染2號(hào)方劑的顆粒劑：將顆粒劑與水混勻，得皮膚抗感染2號(hào)方劑顆粒劑的濃度為0.33g/ml，皮膚抗感染2號(hào)方劑顆粒劑的濃度為0.59g/ml。將皮膚抗感染1號(hào)方劑飲片記為飲1號(hào)，顆粒劑記為顆粒1號(hào);將皮膚抗感染2號(hào)方劑飲片標(biāo)記為飲2號(hào)，顆粒劑記為顆粒2號(hào)。

2.2培養(yǎng)基的制備 按說(shuō)明配制營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基和固體瓊脂培養(yǎng)基并滅菌備用

2.3接種并培養(yǎng)細(xì)菌 用接種環(huán)在超凈工作臺(tái)上挑取單個(gè)菌株，將其移入相應(yīng)錐形瓶的培養(yǎng)液中，置于搖床上運(yùn)行2h，使溶液變渾濁，吸取部分溶液放入分光光度計(jì)測(cè)量，測(cè)量結(jié)果將控制在OD值為0.100±0.005范圍內(nèi)。

2.4采用二倍稀釋法制作96孔板，并進(jìn)行分組（1）純藥對(duì)照組;（2）純菌對(duì)照組;（3）純培養(yǎng)基對(duì)照組;（4）實(shí)驗(yàn)組：①飲1號(hào)+金臨;②飲1號(hào)+金葡;③飲2號(hào)+金臨;④飲2號(hào)+金葡;⑤顆粒1號(hào)+金臨;⑥顆粒1號(hào)+金葡;⑦顆粒2號(hào)+金臨;⑧顆粒2號(hào)+金葡。（ 每種方劑對(duì)應(yīng)的細(xì)菌做三次平行實(shí)驗(yàn)）

2.5 MBC的測(cè)定分別選取，1/2，1/4，1/8孔內(nèi)的相應(yīng)菌液，吸取50μl滴入MH培養(yǎng)基內(nèi)，并用玻璃刮鏟涂布均勻，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，觀察菌株生長(zhǎng)情況。（ 每種方劑對(duì)應(yīng)的細(xì)菌做三次平行實(shí)驗(yàn)）

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由圖可得：

①顆粒1號(hào)和顆粒2號(hào)分別作用于金臨時(shí)，顆粒1號(hào)較顆粒2號(hào)抑制效果更加;飲1號(hào)和飲2號(hào)分別作用于金臨時(shí)，飲1號(hào)的作用效果更顯著。

②顆粒1號(hào)和顆粒2號(hào)分別作用于金葡時(shí)，顆粒1號(hào)效果更好;飲1號(hào)和飲2號(hào)分別作用于金葡時(shí)，飲1號(hào)的效果較飲2號(hào)明顯。

③顆粒1號(hào)分別對(duì)金臨和金葡作用時(shí)，顆粒1號(hào)對(duì)金葡的抑制效果強(qiáng)于金臨;飲1號(hào)分別作用于金臨和金葡時(shí)，飲1號(hào)對(duì)金葡的效果更好。

④顆粒2號(hào)分別對(duì)金臨和金葡作用，發(fā)現(xiàn)對(duì)金葡抑制效果更好;飲2號(hào)對(duì)金臨和金葡的作用時(shí)，飲2號(hào)對(duì)金葡的抑制效果強(qiáng)于金臨。在以上的對(duì)比中，顆粒1號(hào)和飲1號(hào)均對(duì)金臨有抑制作用，也對(duì)金葡有抑制作用，但對(duì)金葡的效果較佳。顆粒2號(hào)僅對(duì)金葡有較好的抑制作用，但在較高濃度下才對(duì)金臨表現(xiàn)為抑制作用。綜上，中藥對(duì)耐藥性金黃色葡萄球菌和標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌均存在抑制作用。

4討論

黃柏具有廣譜抗菌作用，發(fā)現(xiàn)黃柏對(duì)化膿性球菌具有明顯的抗菌作用，尤其對(duì)金黃色葡萄球菌抑制效果較強(qiáng)。紫花地丁的提取物具有抗菌、抗炎等作用}。黃芩的提取物黃芩素能抑制金黃色葡萄球菌生物被膜的形成。黃連有廣譜的抗菌、抗病毒作用，對(duì)金葡、霍亂弧菌、乙型鏈球菌作用較強(qiáng)。然而，近年的研究表明，隨著抗生素應(yīng)用，細(xì)菌的耐藥性逐漸增強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)研究不同濃度和不同種類的藥物對(duì)不同菌種的作用，通過(guò)觀察所測(cè)細(xì)菌前后OD值的變化，從而得出結(jié)論，為臨床診治提供理論依據(jù)和參考。

黃連、黃芩、苦參、板藍(lán)根采取“群藥共煎”的方法發(fā)現(xiàn)其產(chǎn)生沉淀，而有研究證明沉淀主要是由黃連和黃芩產(chǎn)生的，有學(xué)者提出黃連和黃芩共煎時(shí)小檗堿和黃芩苷的含量增加，由此猜測(cè)是由于在水煎時(shí)通過(guò)某種作用使其理化性質(zhì)發(fā)生了變化，因此提高藥性。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，苦參外用能有效的抑制金葡菌以及耐藥菌生物被膜的形成，從而達(dá)到良好的抗菌效果，且經(jīng)過(guò)配伍后的苦參抗菌效果會(huì)更好。中藥里面含有的化學(xué)物質(zhì)很可能通過(guò)破壞細(xì)菌細(xì)胞膜或蛋白質(zhì)的合成來(lái)抑制或殺死細(xì)菌。如：醛類物質(zhì)、酸性物質(zhì)或堿性物質(zhì)可以通過(guò)使蛋白質(zhì)烷基化、變性或破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制甚至死亡。

中藥可能在改善菌群關(guān)系中也扮演了重要的角色，分別用中藥作用于金葡和金臨，發(fā)現(xiàn)中藥濃度較大時(shí)，細(xì)菌基本不生長(zhǎng)，而濃度小的時(shí)候細(xì)菌生長(zhǎng)較快，則推測(cè)中藥濃度在較高稀釋倍數(shù)的條件下呈中性，導(dǎo)致金葡菌快速增長(zhǎng)。

金葡菌是自然界中一種常見(jiàn)的病原菌，常感染免疫力低下的人群，且易產(chǎn)生耐藥性，在臨床上不易有效去除，在人體皮膚表面以及呼吸道各個(gè)地方容易造成感染，對(duì)醫(yī)院環(huán)境造成污染。本實(shí)驗(yàn)主要研究中藥的抑菌作用，為臨床上對(duì)癥下藥提供理論依據(jù)。中藥學(xué)是我國(guó)的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)，同樣也是我們的傳統(tǒng)文化，因此，傳統(tǒng)中藥應(yīng)結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，更好的開(kāi)拓中藥的發(fā)展。