邢晟，梁翠榮，鞏麗萍，石峰，王祿山，吳秀蕓

(1.山東省食品藥品檢驗研究院，山東 濟南 250101；2.山東大學(xué)微生物技術(shù)國家重點實驗室<微生物技術(shù)研究院>，山東 青島 266237)

復(fù)方胃蛋白酶顆粒主要成分為胃蛋白酶、維生素B1和山楂，胃蛋白酶在胃酸參與下將蛋白質(zhì)分解成蛋白胨及少量多肽，維生素B1可提高食欲、增加食量，山楂能增加胃中酵素，促進胃腸分泌，提高蠕動，為胃蛋白酶提供酸性環(huán)境，有健胃消食之功效。復(fù)方胃蛋白酶顆粒主要用于消化不良、食欲缺乏等[1-5]。葡萄糖、蔗糖、麥芽糖等是人體必需的營養(yǎng)要素，同時也是復(fù)方胃蛋白酶顆粒中的主要輔料，目前尚無生化制劑中葡萄糖、蔗糖、麥芽糖等輔料含量的標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法，因此建立檢測生化制劑中糖含量的測定方法十分必要。

目前輔料多糖的檢驗方法主要參考《中國藥典》2015年版(四部)[6]中的相關(guān)規(guī)定。但這些輔料檢驗方法精確度有限，且可能受限于復(fù)方胃蛋白酶顆粒其他成分的干擾，因此僅做參考。根據(jù)文獻調(diào)研結(jié)果，建立用示差折光高效液相色譜法測定復(fù)方胃蛋白酶顆粒中葡萄糖含量的方法[7-8]。該方法快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可靠，可用于復(fù)方胃蛋白酶顆粒等制劑中糖含量的測定。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀；Mettler Toledo XSE205DU電子天平；蔗糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111507-201303，含量：99.8%)；葡萄糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110833-201205，含量：99.5%)；復(fù)方胃蛋白酶顆粒(來自7家生產(chǎn)企業(yè))156批次；水為純化水(Millipore Q-POD制備)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 液相色譜條件 色譜柱為Welch Xtimate Sugar-H(7.8 mm×300 mm，8 μm)；流動相為0.004 mol·L-1硫酸溶液；檢測器為示差折光檢測器；流速為0.5 mL·min-1；柱溫為25 ℃；進樣量為10 μL。

2.2 溶液的制備 精密稱取供試品約1 g，置于100 mL量瓶中，加流動相(0.004 mol·L-1硫酸溶液)溶解并稀釋至刻度，搖勻，取1 mL置1.5 mL離心管中，12 000 rpm離心10 min，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

分別精密稱取葡萄糖對照品1.015 g和蔗糖對照品1.002 g，分別置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液；分別精密稱取葡萄糖對照品1.012 g和蔗糖對照品1.011 g，分別置10 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備液。

2.3 專屬性試驗 按生產(chǎn)工藝及處方比例，按“2.2”項下的方法制備成不含蔗糖和葡萄糖的陰性對照溶液，照上述色譜條件進行檢測(見圖1)。如圖可見，除蔗糖對照品和葡萄糖對照品外未見其他雜質(zhì)的干擾峰，方法專屬性良好。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取葡萄糖和蔗糖對照品儲備液0.1、0.2、0.5、1.0、5.0 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度。精密量取上述對照品溶液以及對照品儲備液各10 μL注入液相色譜儀測定，以進樣量X(mg)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)，制得回歸方程：

Y=153 939X+78 623，r=0.999 8(葡萄糖)

Y=183 227X+19 588，r=0.999 9(蔗糖)

結(jié)果表明，葡萄糖進樣量在10.12～1 012.0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，蔗糖進樣量在10.11～1 011.0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 分別取對照品溶液10 μL連續(xù)進樣6次，測得葡萄糖峰面積的RSD為0.34%，蔗糖峰面積的RSD為1.06%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 分別取對照品溶液10 μL，置室溫下分別放置0、10、20、30、40 h后進樣，測得葡萄糖和蔗糖峰面積的RSD分別為0.75%和0.41%(n=4)。結(jié)果表明供試品溶液在40 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能夠滿足測定需要。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批號供試品6份，照“2.2”項下的方法制備成供試品溶液測定，計算蔗糖的含量(該批次產(chǎn)品處方不含葡萄糖)，其RSD為0.19%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取確定蔗糖含量的供試品約1 g(蔗糖含量為0.39 g·g-1)，共計9份，分別置100 mL量瓶中，其中3份加入蔗糖對照品貯備液3 mL(約相當(dāng)于供試品蔗糖含量的0.8倍)，3份加入蔗糖對照品貯備液3.8 mL(約相當(dāng)于供試品蔗糖含量的1.0倍)，3份加入蔗糖對照品貯備液4.6 mL(約相當(dāng)于供試品蔗糖含量的1.2倍)，照“2.2”項下的方法制備成供試品溶液，精密量取上述供試品溶液10 μL測定，結(jié)果蔗糖的平均回收率為98.73%，RSD為0.224%，表明回收率良好，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

2.9 復(fù)方胃蛋白酶顆粒葡萄糖及蔗糖含量測定 取收集到的156批復(fù)方胃蛋白酶顆粒樣品，照“2.2”項下的方法制備成供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)法計算葡萄糖以及蔗糖的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品葡萄糖及蔗糖含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 目的與意義 葡萄糖、蔗糖等在藥物制劑中廣泛應(yīng)用。但由于個體糖耐量存在差異，且進食過多糖對身體不利，因此有效控制藥物制劑中糖的含量十分重要。目前尚無可同時檢測復(fù)方胃蛋白酶顆粒中葡萄糖、蔗糖含量的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，用示差折光高效液相色譜法測定復(fù)方胃蛋白酶顆粒中葡萄糖、蔗糖的含量，簡單、準(zhǔn)確、可靠，可用于復(fù)方胃蛋白酶顆粒中葡萄糖與蔗糖的含量測定。

3.2 結(jié)果分析與建議 本次檢驗的7家生產(chǎn)企業(yè)均在產(chǎn)品說明書中明確標(biāo)注添加蔗糖，僅有D企業(yè)明確標(biāo)注添加葡萄糖。檢測結(jié)果顯示，7家生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品總含糖量均為90%左右，其中A企業(yè)產(chǎn)品49批，蔗糖含量為3.7 g/袋，葡萄糖含量為6.0 g/袋；B企業(yè)產(chǎn)品4批，蔗糖含量為8.7 g/袋，葡萄糖未檢出；C企業(yè)產(chǎn)品13批，蔗糖含量為9.0 g/袋，葡萄糖未檢出；D企業(yè)產(chǎn)品38批，蔗糖含量為5.0 g/袋，葡萄糖含量為4.0 g/袋；E企業(yè)產(chǎn)品16批，蔗糖含量為9.0 g/袋，葡萄糖未檢出；F企業(yè)產(chǎn)品13批，蔗糖含量為8.7 g/袋，葡萄糖未檢出；G企業(yè)產(chǎn)品23批，蔗糖含量為9.0 g/袋，葡萄糖未檢出。結(jié)果顯示，除D企業(yè)外，A企業(yè)也在產(chǎn)品中添加了葡萄糖，該企業(yè)認(rèn)為本次處方變更未影響產(chǎn)品藥品質(zhì)量，不需進行補充申請，存在一定的不合規(guī)性。

目前因缺少質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，企業(yè)在糖類輔料的投料上存在一定的不合規(guī)性，為規(guī)范復(fù)方胃蛋白酶顆粒中糖的含量，建議明確規(guī)定糖類輔料的添加量，并在相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中增設(shè)糖的含量測定項目，以利于更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。