韓旭東，張玉蒼 *，李瑞松，徐從英

（1.海南大學(xué) 熱帶島嶼資源先進(jìn)材料教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?570228；2.海南大學(xué) 化學(xué)工程與技術(shù)學(xué)院，海南 ?？?570228）

食品加工過程中，食源性病菌容易污染食品致使其成品存在食用風(fēng)險(xiǎn)[1]，尋找高效、低成本的抑制食源性病菌生長的方法對(duì)食品產(chǎn)業(yè)的發(fā)展與安全顯得尤為重要。生物抑菌法因操作簡單、抑制率高、安全性能好等優(yōu)勢(shì)而備受青睞[2-3]。以尼生素為代表的抑制物質(zhì)因具有良好的抑菌特性而備受食品加工廠關(guān)注，但其在酸性環(huán)境才能起到良好的抑菌作用[4]，因而發(fā)展其他細(xì)菌所產(chǎn)的抑菌物質(zhì)是十分有必要[5]。

目前，關(guān)于芽孢桿菌產(chǎn)抑菌物質(zhì)及其性能的研究較少，但其抑菌物質(zhì)在抑菌活性和pH抗性等方面卻能表現(xiàn)出多樣性[6-7]。部分芽孢桿菌屬在歷史上被長期應(yīng)用于食品和動(dòng)物飼料的添加劑，并且具有良好的安全性[8]。傳統(tǒng)的芽孢桿菌如枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌已經(jīng)獲得歐洲食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）的安全認(rèn)證以及美國食品和藥物管理局（food and drug administration，F(xiàn)DA）的安全認(rèn)證[9-10]。芽孢桿菌屬的抑菌物質(zhì)具有良好的穩(wěn)定性和廣泛的抑菌譜，因此開發(fā)新的芽孢桿菌抑菌物質(zhì)是有必要的[11-12]，同時(shí)在開發(fā)新的芽孢桿菌細(xì)菌素也需要對(duì)其安全性進(jìn)行嚴(yán)格的測評(píng)。

以芽孢桿菌ZYCHH-01為試驗(yàn)菌株，對(duì)其發(fā)酵過程的培養(yǎng)基pH值、接種量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間進(jìn)行探討，測定細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)抑菌圈，通過響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化，建立模型分析最佳發(fā)酵條件，并對(duì)芽孢桿菌ZYCHH-01產(chǎn)抑菌物質(zhì)的熱穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性、耐儲(chǔ)存性、酶的敏感性、有機(jī)溶劑和表面活性劑穩(wěn)定性以及對(duì)不同細(xì)菌活性進(jìn)行分析，為芽孢桿菌屬產(chǎn)抑菌物質(zhì)的大量制備提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌種

芽孢桿菌（Bacillus）ZYCHH-01、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）（ATCC 29523）、鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）（CMCC 20115）、單增李斯特菌（Listeria monocytogenes）（ATCC 19115），指示菌株大腸桿菌（Escherichia coli）（ATCC 25922）：保存于海南大學(xué)熱帶島嶼資源先進(jìn)材料教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2 試劑

氯化鈉、甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、異丙醇、Tween 20、Tween 80（均為分析純）：西隴化工股份有限公司；蛋白胨（生化試劑）：北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠；葡萄糖、乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）、尿素（urea）、十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）（均為分析純）：廣州化學(xué)試劑廠；乳酸鏈球菌素、木瓜蛋白酶、蛋白酶K（30 U/mg）、堿性蛋白酶（200 U/mg）、中性蛋白酶（50 U/mg）、胰蛋白酶（10 000 U/mg）、α-淀粉酶（50 U/mg）、纖維素酶（50 U/mg）（均為生化試劑）：上海麥克林生化科技有限公司。

1.1.3 培養(yǎng)基

種子培養(yǎng)基、指示菌活化培養(yǎng)基均為牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，調(diào)pH7.0～7.2。

發(fā)酵培養(yǎng)基：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，氯化鈉5 g，葡萄糖4 g，豆粕粉4 g，定容至1 000 mL。

固體培養(yǎng)基：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，氯化鈉5 g，技術(shù)瓊脂粉15 g，定容至1 000 mL，調(diào)pH7.0～7.2。

1.2 儀器與設(shè)備

DH8-D全溫振蕩器：蘇州培英實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；SPX-200-Ⅱ生化培養(yǎng)箱：上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司；H1850R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司；UV-3300PC型紫外可見分光光度計(jì)：上海美譜達(dá)儀器有限公司；seven compact pH計(jì)：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 指示菌液的制備

接種1環(huán)大腸桿菌至50 mL種子培養(yǎng)基中，于37 ℃、190 r/min條件下培養(yǎng)24 h。

1.3.2 無菌上清液的制備

接種1%芽孢桿菌ZYCHH-01至發(fā)酵培養(yǎng)基中，37 ℃、190 r/min培養(yǎng)24 h，4 ℃、12 000 r/min離心30 min，取上清液，用0.22 μm濾膜過濾菌體，4 ℃條件下保存。

1.3.3 抑菌物質(zhì)抑菌圈測定

取100 μL指示菌液涂布于固體培養(yǎng)基中，輕置內(nèi)徑為6 mm，外徑8 mm的牛津杯于固體培養(yǎng)基表面，并加入100 μL無菌上清液，4 ℃靜置4 h后，37 ℃靜置培養(yǎng)24 h，測量并記錄抑菌圈直徑的大小。

1.3.4 細(xì)菌濃度的測定

將發(fā)酵好的芽孢桿菌ZYCHH-01發(fā)酵液，用紫外可見分光光度計(jì)于波長600 nm處測量其吸光度值。

1.3.5 單因素試驗(yàn)

分別接種（1%、2%、3%、4%、5%）種齡24 h芽孢桿菌ZYCHH-01至（pH值分別為5、6、7、8、9）的發(fā)酵培養(yǎng)基中，分別在（28 ℃、31 ℃、34 ℃、37 ℃、40 ℃）條件下、190 r/min分別培養(yǎng)（6 h、9 h、12 h、15 h、18 h、21 h、24 h、27 h、30 h、33 h、36 h），測定發(fā)酵液細(xì)菌濃度，取無菌上清液，測定抑菌圈大小。

1.3.6 Box-Behnken試驗(yàn)響應(yīng)面優(yōu)化

根據(jù)單因素優(yōu)化結(jié)果，選取發(fā)酵溫度（A）、培養(yǎng)基pH值（B）、發(fā)酵時(shí)間（C）3個(gè)影響較大的因素為試驗(yàn)因素，以抑菌圈直徑（Y）為響應(yīng)值，采用Design-Expert 8.0.6設(shè)計(jì)3因素3水平Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)，試驗(yàn)因素及編碼水平見表1。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素與水平Table 1 Factors and levels of response surface experiments

1.3.7 最小抑菌濃度的測定

以無菌上清液為試驗(yàn)組，10 000 IU/mL的乳酸鏈球菌素為陽性對(duì)照組，采用二倍稀釋法將試驗(yàn)組和陽性對(duì)照組分別稀釋為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128，測定實(shí)驗(yàn)組和陽性對(duì)照組抑菌圈的大小。

1.3.8 抑菌物質(zhì)活性穩(wěn)定性測定

不同pH下的熱穩(wěn)定性：將不同pH的無菌上清液分別在20 ℃、40 ℃、60 ℃、80 ℃、100 ℃條件下處理30 min，待恢復(fù)至室溫，分別測定抑菌圈的大小。

酶對(duì)抑菌物質(zhì)穩(wěn)定性的影響：在無菌上清液和無菌生理鹽水中分別加入質(zhì)量濃度均為1.0 mg/mL的木瓜蛋白酶（pH7）、蛋白酶K（pH7）、堿性蛋白酶（pH9）、中性蛋白酶（pH7）、胰蛋白酶（pH8）、α-淀粉酶（pH7）、纖維素酶（pH6），37 ℃溫育3 h，以含有酶的生理鹽水為對(duì)照組，測定抑菌圈大小。

有機(jī)溶劑和表面活性劑對(duì)于抑菌物質(zhì)的影響：將體積分?jǐn)?shù)10%的甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、異丙醇以及0.1 g/L的Tween 20、Tween 80、EDTA、SDS、Urea分別加入無菌上清液中，室溫溫育5 h，以加入生理鹽水的上清液和無菌上清液為對(duì)照組，測定抑菌圈大小。

儲(chǔ)藏時(shí)間對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響：將無菌上清液分裝在12根離心管內(nèi)，4 ℃分別儲(chǔ)存0、2 d、4 d、6 d、8 d、10 d、12 d、14 d、16 d、18 d、20 d、22 d，測定抑菌圈的大小。

抑菌物質(zhì)對(duì)不同細(xì)菌的活性：分別接種大腸桿菌（ATCC 25922）、金黃色葡萄球菌（ATCC 29523）、鼠傷寒沙門氏菌（CMCC 20115）、單增李斯特菌（ATCC 19115）至種子培養(yǎng)基，37 ℃、190 r/min培養(yǎng)24 h作為指示菌，測定無菌上清液對(duì)指示菌的抑菌圈大小。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)條件優(yōu)化

2.1.1 培養(yǎng)基pH對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響

圖1 培養(yǎng)基pH值對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響Fig.1 Effect of medium pH on antibacterial substances activity

由圖1可知，當(dāng)培養(yǎng)基pH值為5時(shí)細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性較低，隨著pH值升高細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性提高顯著。pH值為8時(shí)，抑菌圈直徑最大，直徑為20.62 mm，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性達(dá)到峰值。pH值為9時(shí)，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性下降明顯?？赡苡捎谶^酸或者過堿環(huán)境都會(huì)影響細(xì)菌的增殖代謝，導(dǎo)致抑菌物質(zhì)活性較低，或因不同pH值條件下細(xì)菌對(duì)抑菌物質(zhì)的吸附不同，從而影響抑菌物質(zhì)的活性[13]。因此，培養(yǎng)基最佳發(fā)酵pH值為8。

2.1.2 接種量對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響

圖2 接種量對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響Fig.2 Effect of inoculum on antibacterial substances activity

由圖2可知，接種量為1%時(shí)，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性較高，隨著接種量的增加，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性升高，接種量為3%時(shí)，抑菌圈最大，直徑為20.67 mm，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性達(dá)到峰值。接種量過大時(shí)，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性略有下降，由于細(xì)菌生長到一定階段，培養(yǎng)基內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)消耗過快，使抑菌物質(zhì)的產(chǎn)生受菌體細(xì)胞群體感應(yīng)調(diào)節(jié)，導(dǎo)致抑菌物質(zhì)活性降低[14]。因此，最佳接種量為3%。

2.1.3 發(fā)酵溫度對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響

圖3 發(fā)酵溫度對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響Fig.3 Effect of fermentation temperature on antibacterial substances activity

由圖3可知，發(fā)酵溫度為28 ℃時(shí)，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性較小，隨著發(fā)酵溫度升高，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性增大；發(fā)酵溫度為37 ℃時(shí)，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性最高，抑菌圈最大，直徑為20.84 mm；發(fā)酵溫度為40 ℃時(shí)，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性明顯降低。因?yàn)榧?xì)菌在增殖和代謝時(shí)有多種酶參與，當(dāng)發(fā)酵溫度過高或過低時(shí)酶的活性降低，細(xì)菌增殖代謝速度減緩，使抑菌物質(zhì)合成受到抑制[15]。因此，最佳發(fā)酵溫度為37 ℃。

2.1.4 發(fā)酵時(shí)間對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響

圖4 發(fā)酵時(shí)間對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響Fig.4 Effect of fermentation time on antibacterial substances activity

由圖4可知，芽孢桿菌ZYCHH-01發(fā)酵6 h時(shí)，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性很低，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性隨著發(fā)酵時(shí)間延長增加顯著。發(fā)酵時(shí)間18～27 h時(shí)，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性緩慢提升。發(fā)酵時(shí)間為27 h時(shí)，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性最高；發(fā)酵時(shí)間27 h后，細(xì)菌濃度和抑菌物質(zhì)活性持續(xù)下降。由于菌株生長時(shí)會(huì)產(chǎn)生少量的抑菌物質(zhì)，隨著細(xì)菌進(jìn)入穩(wěn)定期，抑菌物質(zhì)活性明顯提升，細(xì)菌發(fā)酵時(shí)間過長，進(jìn)入衰亡期，部分菌體自溶釋放的蛋白酶降解部分抑菌物質(zhì)，或者發(fā)酵液中有害產(chǎn)物積累過多，導(dǎo)致細(xì)菌濃度降低，抑菌物質(zhì)活性降低，抑菌圈直徑下降[16]。因此，最佳發(fā)酵時(shí)間為27 h。

2.2 Box-Behnken響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

利用Design-Expert 8.0.6設(shè)計(jì)3因素3水平Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析見表3。以抑菌圈直徑（Y）為響應(yīng)值，以發(fā)酵溫度（A）、培養(yǎng)基pH值（B）、發(fā)酵時(shí)間（C）為因子，進(jìn)行擬合分析，得到回歸方程：Y=20.59-2.42A-0.63B+0.34C+0.19AB+0.017AC+0.04BC-2.96A2-1.56B2-0.75C2。

表2 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Design and results of center combination experiments

表3 回歸模型方差分析Table 3 Variance analysis of regression model

由表3可知，各因素影響順序?yàn)锳＞B＞C，即發(fā)酵溫度＞培養(yǎng)基pH＞發(fā)酵時(shí)間，回歸模型中A、A2、B2均為極顯著水平（P＜0.01），B、C、C2均為顯著水平（P＜0.05），交互項(xiàng)AB、BC、AC均不顯著，模型P值＜0.000 1，失擬項(xiàng)P值0.240 8＞0.05，失擬不顯著，說明回歸方程極顯著。其中決定系數(shù)R2=0.995 7、調(diào)整決定系數(shù)R2Adj=0.990 2，說明此回歸方程擬合度高，故此模型可用來對(duì)芽孢桿菌ZYCHH-01產(chǎn)抑菌物質(zhì)條件優(yōu)化分析。

圖5 發(fā)酵溫度、培養(yǎng)基pH值、發(fā)酵時(shí)間交互作用對(duì)抑菌圈直徑影響的響應(yīng)曲面與等高線Fig.5 Response surface plots and contour lines of effects of interaction between fermentation temperature,medium pH and fermentation time on inhibition zone diameter

由圖5可知，根據(jù)回歸方程所得到的響應(yīng)曲面，分別反映了發(fā)酵溫度，培養(yǎng)基pH，發(fā)酵時(shí)間三個(gè)因素之間的交互作用對(duì)抑菌圈直徑大小的影響。每組響應(yīng)曲面開口向下，表明在此曲面內(nèi)有最大點(diǎn)?；貧w方程的二次項(xiàng)系數(shù)均為負(fù)值，響應(yīng)值存在極大值。因此芽孢桿菌ZYCHH-01產(chǎn)抑菌物質(zhì)最優(yōu)條件：發(fā)酵溫度35.75 ℃，培養(yǎng)基pH值7.78，發(fā)酵時(shí)間27.65 h，此條件下抑菌圈直徑最大為21.20 mm。

為提高試驗(yàn)的方便性和可靠性，將最佳培養(yǎng)條件修正為發(fā)酵溫度36 ℃，培養(yǎng)基pH值7.8，發(fā)酵時(shí)間27.5 h。按照修正后條件進(jìn)行試驗(yàn)，抑菌圈直徑大小平均值為21.12 mm，與預(yù)測值21.20 mm相近。預(yù)測值和實(shí)際值的良好擬合，證明該模型真實(shí)有效。

2.2 最小抑菌濃度的測定

表4 不同上清液稀釋度的抑菌濃度Table 4 Inhibitory concentration of supernatant with different dilution

由表4可知，上清液和乳酸鏈球菌素抑菌圈大小隨著濃度的降低而減小，上清液稀釋1∶64時(shí)，抑菌圈直徑為6.02 mm，當(dāng)稀釋1∶128時(shí)，上清液無抑菌活性；此時(shí)，陽性對(duì)照組乳酸鏈球菌素濃度為78.13 IU/mL，仍有較好的抑菌活性。因此，最小抑菌濃度為上清液稀釋1∶64。

2.3 抑菌物質(zhì)的特性

2.3.1 不同pH條件下的熱穩(wěn)定性

圖6 不同pH值和發(fā)酵溫度對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響Fig.6 Effect of different pH and fermentation temperature on antibacterial substances activity

由圖6可知，芽孢桿菌ZYCHH-01所產(chǎn)的抑菌物質(zhì)活性隨著處理溫度的升高而降低，在20～60 ℃時(shí)，抑菌物質(zhì)均有活性，pH值為8時(shí)抑菌圈最大，抑菌活性最高。在80 ℃時(shí)，pH值為9的抑菌物質(zhì)完全失活，抑菌物質(zhì)在pH值為7抑菌圈最大活性最高，在100 ℃時(shí)，pH值為5和9的抑菌物質(zhì)完全失活，由于高溫使抑菌物質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變[17]，導(dǎo)致其完全失活，抑菌物質(zhì)在pH值為7抑菌圈最大活性最高。在pH值為6～8內(nèi)經(jīng)高溫處理后，抑菌物質(zhì)仍保有較好的活性，因此該抑菌物質(zhì)具有良好的熱穩(wěn)定性和較好的耐酸堿性。

2.3.2 酶對(duì)抑菌物質(zhì)穩(wěn)定性的影響

表5 酶對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響Table 5 Effect of enzyme on antibacterial substances activity

由表5可知，經(jīng)蛋白酶處理后的抑菌物質(zhì)活性明顯降低，與α-淀粉酶和纖維素酶處理后的試驗(yàn)組和對(duì)照組作對(duì)比，表明該抑菌物質(zhì)中含有蛋白質(zhì)或者肽，但仍有部分抗菌活性，可能存在多糖或者脂類等其他具有抗菌作用的代謝產(chǎn)物[18]，或因蛋白酶的濃度較低處理時(shí)間較短導(dǎo)致部分活性蛋白沒有失活[19]。

2.3.3 有機(jī)溶劑和表面活性劑對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響

表6 有機(jī)溶劑和表面活性劑對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響Table 6 Effect of organic solvents and surfactants on antibacterial substances activity

由表6可知，有機(jī)溶劑對(duì)抑菌物質(zhì)的活性影響不顯著，說明該抑菌物質(zhì)在有機(jī)溶劑中有良好的穩(wěn)定性。Tween 80、Tween 20對(duì)抑菌物質(zhì)的活性基本沒有影響，添加EDTA后，抑菌活性提升明顯，推測EDTA改變了細(xì)菌細(xì)胞膜的滲透性從而增加了對(duì)抑菌物質(zhì)的敏感性[20]，增強(qiáng)了抑菌活性，SDS、Urea破壞了抑菌物質(zhì)中蛋白的氫鍵和疏水鍵，從而破壞了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，使抑菌物質(zhì)失活或者活性降低[21]。

2.3.4 儲(chǔ)藏時(shí)間對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響

由圖7可知，將無菌上清液在4 ℃條件儲(chǔ)存，冷藏時(shí)間0～6 d，抑菌物質(zhì)活性較高，隨著時(shí)間延長，抑菌物質(zhì)活性呈先下降后趨于穩(wěn)定的趨勢(shì)，18 d后，抑菌物質(zhì)仍具有活性且趨于穩(wěn)定，可能是部分抑菌物質(zhì)在無菌上清液中發(fā)生了氧化，使抑菌活性降低。

圖7 儲(chǔ)藏時(shí)間對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響Fig.7 Effect of storage time on antibacterial substances activity

2.3.5 抑菌物質(zhì)對(duì)不同細(xì)菌的活性

表7 抑菌物質(zhì)對(duì)細(xì)菌抑菌活性Table 7 Antibacterial activity of antibacterial substances against bacteria

由表7可知，對(duì)大腸桿菌的活性顯著，同時(shí)對(duì)其他3種常見的食源性病菌均有較好的活性。表明此抑菌物質(zhì)對(duì)部分食源性病菌有良好的抑制作用。

3 結(jié)論

通過單因素試驗(yàn)，確定芽孢桿菌ZYCHH-01產(chǎn)抑菌物質(zhì)最佳單因素條件為培養(yǎng)基pH 8，接種量3%，發(fā)酵溫度37 ℃，發(fā)酵時(shí)間27 h。在單因素試驗(yàn)的結(jié)果上，利用響應(yīng)面法對(duì)其產(chǎn)抑菌物質(zhì)條件進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳發(fā)酵條件為培養(yǎng)基pH 7.8，接種量3%，發(fā)酵溫度36 ℃，發(fā)酵時(shí)間27.5 h。在此優(yōu)化條件下，抑菌圈直徑為21.12 mm。采用二倍稀釋法測定最小抑菌濃度為上清液稀釋1∶64。對(duì)菌株產(chǎn)的抑菌物質(zhì)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)抑菌物質(zhì)對(duì)蛋白酶敏感，對(duì)α-淀粉酶和纖維素酶不敏感，推測抑菌物質(zhì)中含有蛋白質(zhì)或肽。抑菌物質(zhì)活性pH范圍大且在pH6～8環(huán)境中具有良好的熱穩(wěn)定性，經(jīng)100 ℃處理后，仍有較好活性，較耐存儲(chǔ)，有機(jī)試劑和部分表面活性劑對(duì)其影響較小，SDS、Urea對(duì)其抑菌活性降低影響顯著，但與EDTA共同作用抑菌活性提升明顯，對(duì)食源性病菌有良好的抑菌活性。