林賢山，陳澤明，王 寧，鄒小興，鄭智位*

(1.福建省德化葛坑國(guó)有林場(chǎng)，福建 德化362509；2. 福建農(nóng)林大學(xué) 林學(xué)院，福建 福州 350002；3. 自然生物資源保育利用福建省高校工程研究中心，福建 福州 350002)

圓齒野鴉椿(EuscaphiskonishiiHayata.)為省沽油科野鴉椿屬植物，主要分布于福建、江西、浙江等省區(qū)[1]。其樹(shù)形婆娑優(yōu)美、果皮內(nèi)外顏色鮮紅亮麗，且掛果時(shí)間長(zhǎng)，是一種很好的園林綠化及冬季觀果樹(shù)種[2，3]。圓齒野鴉椿的果實(shí)俗稱雞眼睛，在福建、貴州等民間用來(lái)治療頭痛、眩暈、感冒、蕁麻疹、漆過(guò)敏、疝氣等疾病[4-6]。畬族醫(yī)藥中記載其具有抗炎鎮(zhèn)痛、清熱解毒、消腫散結(jié)等功效[7]。目前，已從圓齒野鴉椿果皮、種子、枝和葉等部位分離得到三萜類、酚酸類、黃酮類、倍半萜類及其他類化合物[3,8-12]。但有關(guān)圓齒野鴉椿根部化學(xué)成分的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，參照?qǐng)A齒野鴉椿果皮等化學(xué)成分，對(duì)其根化學(xué)成分進(jìn)行初步研究，明確其中可能的化學(xué)成分，為今后全株的研究和開(kāi)發(fā)利用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

材料：圓齒野鴉椿根于2017年12月采挖自福建省德化葛坑國(guó)有林場(chǎng)坑口工區(qū)苗圃，東經(jīng)118°11′01″，北緯25°50′23″，海拔高度475 m，生長(zhǎng)年限為5年。為不影響植株正常生長(zhǎng)，只采挖部分側(cè)根，陰干，粉碎成粗粉樣品，備用。

試劑：95%乙醇、三氯甲烷、冰乙酸、次硝酸鉍、碘化鉀、甲醇、三氯化銻、碘、碘化鉀、醋酸鉛、香草醛、氫氧化鉀、鎂粉、乙醚、生理鹽水、濃氨水、濃硫酸、鹽酸等試劑均為分析純。

1.2 儀器

儀器：UV-5100B紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司)，F(xiàn)A2004N電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國(guó)華電器有限公司)，SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，101-1AB電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司)，WP-UP-111-20超純水機(jī)(四川沃特爾科技發(fā)展有限公司)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 水供試液制備

稱取圓齒野鴉椿根粗粉5 g置于試管中，加入50 mL 超純水，放入數(shù)控恒溫水浴鍋(調(diào)到60℃左右)中，水浴鍋中的水面應(yīng)高于試管中的溶液面，浸泡1 h 后，趁熱過(guò)濾，得水提液，將其存入另一個(gè)試管中，標(biāo)注備用。

1.3.2 乙醇供試液、酸水供試液制備

稱取圓齒野鴉椿根粗粉20 g于磨口燒瓶中，加入70%乙醇200 mL，于80℃ 的數(shù)顯恒溫水浴鍋內(nèi)，加熱回流萃取2 h，冷卻，過(guò)濾，將抽濾瓶中的液體緩緩倒入量筒中并平均分成2份，一份作為乙醇供試液，另一份置于蒸發(fā)皿中濃縮成膏狀(無(wú)乙醇味)，加入1%鹽酸溶解，過(guò)濾，得濾液即為酸水供試液。

2 結(jié)果與分析

參考圓齒野鴉椿枝、葉所含化學(xué)成分[10]，對(duì)根部可能含有的化學(xué)成分類型，至少采用2種方法進(jìn)行鑒定及確認(rèn)[13-14]。

2.1 化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)

水提液作多糖、皂苷、鞣質(zhì)等成分測(cè)定。結(jié)果如表1。

乙醇提取液作強(qiáng)心苷、醌類、香豆素、黃酮、甾體、萜類、酚類等檢查，酸水供試液作生物堿檢查。結(jié)果如表2。

2.1.1 多糖方法學(xué)檢測(cè)

檢測(cè)一(α-萘酚試劑法)：在1 mL樣品水提液中滴加5% α-萘酚乙醇溶液，充分震蕩搖勻，再緩緩加入0.5 mL濃硫酸，若兩液面交界處出現(xiàn)紫紅色環(huán)，則證明有多糖類物質(zhì)。

檢測(cè)二：在5 mL 樣品水提液中滴加碘試劑3滴，會(huì)呈現(xiàn)酒紅色，則證明有多糖存在。

2.1.2 皂苷類方法學(xué)檢測(cè)

檢測(cè)一：取樣品粉末1 g，置于50 mL量筒中，0.9%NaCl溶液加入15 mL，水浴沸2 min，趁熱過(guò)濾，再取濾液2 mL到試管，加塞強(qiáng)烈震蕩片刻，觀察是否產(chǎn)生泡沫，記錄泡沫高度，靜置10 min后再次觀察。

檢測(cè)二：取材料乙醇提取液5 mL，靜置到室溫加丙酮，則發(fā)現(xiàn)有沉淀析出，小號(hào)濾紙過(guò)濾，取沉淀4-6 mg到試管，加Ac 1 mL溶解，緩慢加1 mL濃硫酸，液面交界處紅色或者紅紫色環(huán)。

2.1.3 鞣質(zhì)方法學(xué)檢測(cè)

檢測(cè)一：將樣品的水提物5 mL，加0.5%明膠10%氯化鈉溶液(臨用新配)，會(huì)立刻出現(xiàn)白色絮狀沉淀，實(shí)驗(yàn)中加少量HCl會(huì)更明顯。

檢測(cè)二：取樣品粉末2 g，加入分析純甲醇15 mL，熱逆流提取30 min，再取2 mL濾液，加入10%FeCl3液3滴，立刻會(huì)呈現(xiàn)深綠色，最后加入氨水試劑2滴與水5 mL震蕩搖勻，溶液呈現(xiàn)出深綠色。

2.1.4 強(qiáng)心苷方法學(xué)檢測(cè)

檢測(cè)一(Kedde法)：取0.2 g樣品粉末到50 mL燒杯中，加入10 mL 70%乙醇，再加入2 mL 10%的醋酸鉛試液，熱水中沸浴5 min，趁熱過(guò)濾，加新配的3，5-二硝基苯甲酸乙醇試劑和1 mol/L KOH各1 mL，立刻產(chǎn)生大量沉淀并顯紫紅色。

檢測(cè)二(Keller-Kiliani法)：將2 mL樣品的乙醇提取液于試管中，放置水浴上使其慢慢揮發(fā)干，殘?jiān)尤? mL FeCl3-冰醋酸試劑溶解，震蕩搖勻，再緩緩加入1 mL濃H2SO4，觀察兩液面層的顏色變化，界面由紅棕色逐漸變?yōu)槟G色、藍(lán)色，最后冰醋酸層變?yōu)樗{(lán)色或藍(lán)綠色。

2.1.5 醌類方法學(xué)檢測(cè)

檢測(cè)一：將樣品粉末2 g置于小濾紙片上，滴加5% NaOH幾滴，觀察濾紙，發(fā)現(xiàn)被染成紅色。

檢測(cè)二(Borntrager)：取樣品乙醇提取液1 mL滴在小紙片上，噴灑10%KOH水溶液，如果有羥基蒽醌類物質(zhì)就會(huì)呈現(xiàn)黃、橙、紅色熒光。

2.1.6 香豆素方法學(xué)檢測(cè)

檢測(cè)一：將樣品乙醇提取液1 mL，置于試管中，加入2 mL 3%NaOH溶液在沸浴中加熱5 min，液體逐漸澄清，加入2% HCl后，溶液又變?yōu)闇啙帷?/p>

檢測(cè)二：取樣品乙醇提取液5 mL，放于254 nm紫外燈下觀察，顯紫紅色熒光。

2.1.7 黃酮類方法學(xué)檢測(cè)

檢測(cè)一：將1%的三氯化鋁乙醇溶液噴灑到少量樣品乙醇提取液中，干燥后出現(xiàn)黃色斑點(diǎn)，紫外254 nm熒光燈下觀察有明顯熒光反應(yīng)。

檢測(cè)二：將適量鎂粉加入到2 mL樣品乙醇提取液中，充分震蕩搖勻，再滴加5滴濃鹽酸，2 min會(huì)呈現(xiàn)棕紅色。

2.1.8 甾體和萜類方法學(xué)檢測(cè)

檢測(cè)一：將三氯化銻的氯仿飽和溶液(臨用時(shí)加氯化亞砜1/5的量)噴灑到樣品的石油醚物上，若有顯色，則證明提取物中有甾體。

檢測(cè)二：將樣品提取殘?jiān)糠钟? mL氯仿溶解，滴加濃硫酸1 mL，若氯仿層有紅色反應(yīng)，硫酸層有綠色熒光，則證明樣品中含有甾體或三萜類物質(zhì)。

2.1.9 酚類方法學(xué)檢測(cè)

檢測(cè)一：將三氯化鐵-鐵氰化鉀溶液(臨用時(shí)將兩溶劑等體積混合)噴灑到少量樣品乙醇提取液中，揮發(fā)至干，會(huì)立刻出現(xiàn)藍(lán)色斑點(diǎn)。

檢測(cè)二：先將樣品乙醇提取液少許滴加到小濾片上，稍等其揮發(fā)干燥，并噴灑香草醛-鹽酸試劑，濾紙會(huì)出現(xiàn)紅色。

表1 圓齒野鴉椿根水提取液化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

表2 圓齒野鴉椿根乙醇提取液化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

植物次生代謝是闡明中藥藥效的重要環(huán)節(jié)[15]，從野鴉椿屬植物中已分離化合物84種[12]，而圓齒野鴉椿根部位化學(xué)成分研究較少。本次研究中發(fā)現(xiàn)，圓齒野鴉椿根中可能含有多糖、皂苷、鞣質(zhì)、醌類、香豆素、黃酮類、甾體、萜類等化學(xué)成分，說(shuō)明傳統(tǒng)藥學(xué)上將圓野鴉椿根作為主要藥用部位是有科學(xué)依據(jù)的[10]。而未檢測(cè)到酚類、生物堿，說(shuō)明圓齒野鴉椿根部位可能不含酚類及生物堿等化學(xué)成分。

相關(guān)報(bào)道顯示，前人研究多針對(duì)野鴉椿的化學(xué)研究，如董玫等[16]從野鴉椿枝葉的甲醇提取物中分離出6種具有抗增殖性炎癥活性的化合物，且通過(guò)了波譜分析鑒定；田珂等[17]首次對(duì)野鴉椿根進(jìn)行抑制肝脂堆積活性部位篩選和化學(xué)成分分離，而對(duì)圓齒野鴉椿的研究較少。而圓齒野鴉椿的化學(xué)研究也多集中在果實(shí)、枝和葉的成分研究方面，而少見(jiàn)根部化學(xué)成分的報(bào)道。福建省不少地區(qū)有較長(zhǎng)的野鴉椿屬植物應(yīng)用歷史，如畬族常用其果實(shí)或葉片煲湯，治療各型肝病[7]?！陡＝ㄋ幬镏尽穂4]上記載野鴉椿屬植物不同藥用部位在性味和功效上有明顯差異，如根微苦、平，可治風(fēng)濕、腰痛、胃痛、產(chǎn)后風(fēng)等癥。果辛溫，可治頭痛、眩暈、感冒、蕁麻疹、漆過(guò)敏、疝氣等癥。今后應(yīng)加強(qiáng)圓齒野鴉椿化學(xué)成分方面的研究，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)圓齒野鴉椿的藥用資源以及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供理論依據(jù)。