謝玉珍，彭敏玉，盧善明

(梅州市人民醫(yī)院，廣東 梅州 514031)

宮頸癌是女性常見的一種惡性腫瘤，其中宮頸鱗癌占比最高，近年來，隨著篩查普及及水平的提高，宮頸鱗癌的發(fā)病率確逐年下降，但呈現(xiàn)年輕化。瘤芽(tumor budding)是指腫瘤浸潤前沿分散簇瘤細(xì)胞，瘤芽的形成反應(yīng)了癌細(xì)胞的細(xì)胞間黏附能力喪失以及遷移能力增強(qiáng)[1]。瘤芽是癌癥的一種重要生物學(xué)特征，近年來瘤芽成為了學(xué)者們的研究熱點(diǎn)，研究認(rèn)為，瘤芽是結(jié)腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]。此外，瘤芽還可以作為直腸黏膜下癌以及惡性息肉的危險(xiǎn)分層指標(biāo)，可以知道是否可以行內(nèi)鏡下切除腫瘤[3]。然而，關(guān)于瘤芽在宮頸鱗癌中的研究較少，關(guān)于瘤芽的評估方法、高瘤芽閾值的制定等尚未研究清楚。因此，本研究將探討免疫組化CK染色后瘤芽計(jì)數(shù)和HE染色切片瘤芽計(jì)數(shù)兩種方法的一致性，有無必要行免疫組化CK染色來進(jìn)行瘤芽判讀。報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取在梅州市人民醫(yī)院2018年1月～2019年1月期間宮頸鱗癌根治性切除術(shù)患者30例，獲取宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織學(xué)標(biāo)本。平均年齡(50.46±5.16)歲；腫瘤平均直徑(2.66±0.23)cm；臨床分期:Ⅰ期14例，Ⅱ期16例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3例。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：均在本院行根治性手術(shù)，手術(shù)標(biāo)本保存完好，F(xiàn)IGO 臨床分期為 IA1-IIA2 期，術(shù)后經(jīng)病理檢查診斷為宮頸鱗癌；未合并其他部位惡性腫瘤。

1.2 免疫組化CK染色方法

常規(guī)石蠟切片，使用EDTA緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)20 min，隨后置于3%過氧化氫中滅活內(nèi)源性過氧化物酶，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5 min，滴加兔抗人多克隆CK抗體，抗體濃度為1∶100，隨后放置于37℃濕盒中室溫孵育2 h，用PBS緩沖液沖洗3次，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的Envision二抗，繼續(xù)放置于濕盒中孵育30 min，用PBS緩沖液沖洗3次，滴加DAB進(jìn)行顯色，顯微鏡下觀察顯色效果，蘇木精復(fù)染和封片。CK陽性標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞漿呈棕褐色。

1.3 瘤芽計(jì)數(shù)方法

在200倍鏡視野下，觀察有無瘤芽(腫瘤侵襲前沿單個(gè)或<5個(gè)瘤細(xì)胞簇)，每次選取5個(gè)200倍鏡視野，計(jì)算最大值為瘤芽數(shù)目，若宮頸癌瘤芽>4個(gè)/20HPF則定義為高瘤芽組，≤4個(gè)/20HPF則定義為低瘤芽組，由兩名以上病理科醫(yī)師采用盲法進(jìn)行評判。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件，對兩種瘤芽計(jì)數(shù)方法的一致性比較采用四格表卡方檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

免疫組化CK染色和HE染色計(jì)數(shù)瘤芽一致性比較瘤芽定義為腫瘤細(xì)胞侵襲前緣的單個(gè)癌細(xì)胞或小于5個(gè)的癌細(xì)胞簇，如圖1所示，HE染色下，箭頭所指，可見瘤芽的癌細(xì)胞具有明顯的去分化狀態(tài)，在30例宮頸鱗癌中，瘤芽計(jì)算最小為0，最大為13，平均為4.8個(gè)，HE染色切片瘤芽計(jì)數(shù)方法13例為高瘤芽，高瘤芽率為43.3%，但免疫組化CK染色后瘤芽計(jì)數(shù)方法15例為高瘤芽，高瘤芽率為50%，見圖2；兩種方法判讀一致的有26例，一致率為86.67%。Kappa值為0.833。P值為0.000，見表1。

圖1 HE染色下瘤芽的形態(tài)(A：100倍高瘤芽區(qū)，B：200倍高瘤芽區(qū)，C：200倍低瘤芽區(qū))

圖2 免疫組化CK染色下瘤芽的形態(tài)(A：100倍高瘤芽區(qū)，B：200倍高瘤芽區(qū)，C：200倍低瘤芽區(qū))

表1 免疫組化CK染色后瘤芽計(jì)數(shù)和HE染色切片瘤芽計(jì)數(shù)兩種方法的一致性 例

3 討論

宮頸鱗癌是發(fā)生于宮頸表面鱗狀上皮的一種腫瘤，發(fā)生率較高，但預(yù)后較宮頸腺癌好。癌細(xì)胞具有典型的“侵襲-轉(zhuǎn)移級聯(lián)反應(yīng)”，即癌細(xì)胞脫離原來位置侵襲周圍組織的過程，癌細(xì)胞的侵襲通常以群體方式進(jìn)術(shù)，但不同癌細(xì)胞的侵襲能力不一，因此在病理學(xué)上也表現(xiàn)出不同的形態(tài)學(xué)特征。有病理學(xué)專家指出，可以通過觀察癌細(xì)胞的病理學(xué)行為初步判斷癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力。然而，癌細(xì)胞具有較大的異質(zhì)性，因此有學(xué)者提出了腫瘤侵襲前沿的概念，認(rèn)為癌細(xì)胞與其周圍間質(zhì)作用的最前沿部位將可代表癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力[4]?；诖?，學(xué)者們又提出了一種評價(jià)腫瘤侵襲和遷移能力的評估系統(tǒng)，可根據(jù)腫瘤侵襲前沿組織的病理學(xué)特征進(jìn)行評分，如可根據(jù)腫瘤的侵襲模式、淋巴細(xì)胞浸潤和細(xì)胞核多形性等。然而，有學(xué)者在腫瘤侵襲前沿的研究發(fā)現(xiàn)，在此處還存在一些散在分布的單個(gè)或少量島狀分布的癌細(xì)胞簇，并將此特征性結(jié)構(gòu)稱之為瘤芽。近年來研究顯示，瘤芽與腫瘤的惡性生物行為和患者預(yù)后均有密切關(guān)系[5]。研究認(rèn)為，具有瘤芽的食管癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)增加2.5倍[6]。在結(jié)腸癌和口腔鱗癌中，瘤芽已被作為一個(gè)重要的病理學(xué)特征，是患者預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)，可直接判斷腫瘤的惡性程度[7]。但在宮頸鱗癌中，瘤芽的臨床價(jià)值如何，以及如何準(zhǔn)確有效的評估瘤芽，目前研究仍較少。

瘤芽的評估方法簡單，采用常規(guī)的HE染色即可評估，且重復(fù)性好，容易在臨床上推廣，在本研究中，采用HE染色評估30例宮頸鱗癌中的瘤芽情況，結(jié)果顯示，瘤芽計(jì)算最小為0，最大為13，平均為4.8個(gè)，HE染色切片瘤芽計(jì)數(shù)方法13例為高瘤芽，高瘤芽率為43.3%。但有學(xué)者指出，HE下判斷瘤芽的方法具有較強(qiáng)的主觀性，在一定程度上影響可重復(fù)性，因此，本研究進(jìn)一步采用免疫組化的方法進(jìn)行輔助判斷，通過免疫組化CK染色后進(jìn)行瘤芽計(jì)數(shù)，先在低倍鏡視野下選取瘤芽出現(xiàn)最多的區(qū)域，隨后調(diào)至200倍視野計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示，共15例被診斷為高瘤芽，高瘤芽率為50%，兩種方法判讀一致的有26例，一致率為86.67%。研究結(jié)果表明，HE染色下即可準(zhǔn)確判斷瘤芽數(shù)目，具有較佳的重復(fù)性。