和 斌，李祺越，洪 嶺，伍園園，滕曉明，唐傳玲

同濟(jì)大學(xué)附屬第一婦嬰保健院輔助生殖醫(yī)學(xué)科，上海 201204

卵泡是女性的基本生殖單位。在卵泡微環(huán)境中，顆粒細(xì)胞緊密包裹在卵母細(xì)胞外，為卵母細(xì)胞發(fā)育提供營養(yǎng)和促成熟因子，兩者的交互“對話”對卵母細(xì)胞的分化發(fā)育與成熟起著舉足輕重的作用[1]。顆粒細(xì)胞數(shù)量減少、功能受損、細(xì)胞間聯(lián)系中斷，可誘發(fā)卵母細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致卵巢功能下降[2]。體內(nèi)外各種刺激可誘發(fā)卵泡微環(huán)境產(chǎn)生活性氧簇物質(zhì)（reactive oxygen species，ROS）。正常情況下，顆粒細(xì)胞可通過自身的抗氧化系統(tǒng)保護(hù)卵母細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷[3]；然而，在體外受精治療過程中，顆粒細(xì)胞ROS 異常增加可引起氧化應(yīng)激損傷，進(jìn)一步影響卵子、胚胎質(zhì)量以及臨床妊娠結(jié)局[4-5]。因此，保護(hù)顆粒細(xì)胞免受氧化損傷對于維持和提高女性的生育能力具有重要意義。

沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silent information regulator 1，SIRT1）是脫乙酰酶Sirtuin 家族中研究最深入的一個成員。其通過對多種非組蛋白及組蛋白賴氨酸殘基進(jìn)行去乙?；揎梺碚{(diào)節(jié)基因表達(dá)，參與細(xì)胞衰老、糖脂代謝、氧化應(yīng)激、炎癥、細(xì)胞凋亡等生理活動[6]，也是細(xì)胞抵抗氧化應(yīng)激損傷的重要分子[7]。近年來，很多研究發(fā)現(xiàn)SIRT1在調(diào)節(jié)卵巢功能方面也發(fā)揮重要作用，可以促進(jìn)高脂飲食肥胖小鼠的卵泡存活[8-9]。此外，SIRT1 具有促進(jìn)人卵巢顆粒細(xì)胞的增殖以及維護(hù)顆粒細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的作用[10]，但目前有關(guān)SIRT1 在顆粒細(xì)胞氧化損傷中作用的研究并不多見。H2O2作為ROS 的主要成員，極易透過細(xì)胞膜，可用于模擬體內(nèi)的氧自由基損傷，而且性質(zhì)相對穩(wěn)定，易于獲得，已成為研究細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的常用工具。本研究用H2O2處理SVOG 細(xì)胞（非腫瘤源性的永生化人卵巢顆粒細(xì)胞系），建立人卵巢顆粒細(xì)胞體外氧化應(yīng)激模型，測定有關(guān)氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)，并分析銜接蛋白P66SHC（the 66 kDa Src homology 2 domain containing isoform）與B 淋巴細(xì)胞瘤-2因子（B-cell lymphoma-2，BCL-2）等氧化應(yīng)激有關(guān)分子的表達(dá)情況，探討SIRT1 在H2O2誘導(dǎo)的SVOG 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用及可能機(jī)制，以期為保護(hù)顆粒細(xì)胞免于氧化應(yīng)激損傷、維持卵泡正常發(fā)育提供新的對策。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器

胎牛血清購自以色列Biological Industries 公司，DMEM/F12 培養(yǎng)基購自美國Hyclone 公司，丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量檢測試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性檢測試劑盒、實(shí)時熒光定量PCR（qPCR）試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，CCK8 試劑盒購自蘇州新賽美生物科技有限公司，反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自日本TaKaRa 公司，辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗兔IgG 抗體、兔抗人SIRT1、P66SHC、BCL-2、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）多克隆抗體均購自美國ProteinTech 公司，4,6-二氨基-2-苯基吲哚（4，6-diamino-2-phenyl indole，DAPI） 購 自 美 國Sigma 公司，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法（ECL）試劑購自美國Millipore 公司，Opti-MEM 培養(yǎng)基購自美國Gibco 公司，轉(zhuǎn)染試劑盒Lipofectamine?3000 購自美國ThermoFisher 公司。ABI StepOne Q-PCR 儀器購自美國ThermoFisher 公司，BX51熒光顯微鏡和DP70 數(shù)字成像系統(tǒng)購自日本Olympus 公司，Spectramax M5 酶標(biāo)儀購自美國Molecular Devices 公司。SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-SIRT1 委托江蘇知萌生物醫(yī)藥科技有限公司構(gòu)建，所有引物均由上海生工生物有限公司合成。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) SVOG 細(xì)胞購自上海澤葉生物科技有限公司，使用含有10%血清的DMEM/F12 培養(yǎng)基，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本研究所有實(shí)驗(yàn)經(jīng)同濟(jì)大學(xué)附屬第一婦嬰保健院倫理委員會批準(zhǔn)。SOVG 細(xì)胞根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要被分為空白對照組（對照組）、H2O2處理組（H2O2組）、SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（SIRT1 組）和SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后H2O2處理組（SIRT1+H2O2組）。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒 將SVOG 細(xì)胞按5×105/mL 接種到6 孔板中，待細(xì)胞生長融合至約80%時換液行SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。一個無菌EP 管中加入3.75 μL Lipofectamine?3000 試劑，用125 μL Opti-MEM 培養(yǎng)基稀釋，并充分混勻；在另一個無菌EP 管中將1.5 μg質(zhì)粒稀釋于125 μL Opti-MEM 培養(yǎng)基，然后添加P3000TM試劑5 μL，充分混勻。將上述2 個EP 管中液體按1:1 比例混勻，室溫孵育10 min 后，加至6 孔板中，250 μL/孔，放置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h 后，qPCR 和Western blotting 檢測SIRT1 過表達(dá)情況。

1.2.3 細(xì)胞氧化應(yīng)激模型 參照文獻(xiàn)[11-12]采用H2O2建立細(xì)胞氧化損傷模型，使用不同濃度H2O2（0、100、250、500、1 000 μmol/L） 處 理SVOG 細(xì) 胞， 分 別 于4、8、12、24 h 后，通過細(xì)胞核形態(tài)，細(xì)胞活力等數(shù)據(jù)，選取細(xì)胞核形態(tài)和活力具有顯著性變化，且細(xì)胞存活率處于50%～70%的最低濃度和合適時間作為后續(xù)誘導(dǎo)氧化損傷模型的條件。

1.2.4 CCK8 法檢測細(xì)胞活力 為了觀察H2O2處理對人卵巢顆粒細(xì)胞活力的影響，使用CCK8 試劑盒進(jìn)行細(xì)胞活力檢測。將SVOG 細(xì)胞按1×104/100 μL 接種到96 孔板中，待細(xì)胞融合至約80%后，加入含有不同濃度H2O2的培養(yǎng)基，分別于4、8、12、24 h 后，每孔加入CCK8 試劑10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)1 h，酶標(biāo)儀測定450 nm 處吸光度值[D（450 nm） ]， 計(jì) 算 細(xì) 胞 活 力=[D （450 nm）加藥-D （450 nm）空白]/ [D （450 nm）未加藥-D （450 nm）空白]×100%。

1.2.5 熒光顯微鏡觀察細(xì)胞核形態(tài) 將培養(yǎng)皿中的細(xì)胞，PBS 浸洗3 次，加入DAPI，室溫避光孵育5 min，PBS 洗滌后在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核形態(tài)。

1.2.6 氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測 MDA 和SOD 是反映氧化應(yīng)激狀態(tài)的常用指標(biāo)。MDA 是胞膜脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物，可間接反映細(xì)胞受自由基攻擊所受的損害，而SOD 是機(jī)體內(nèi)清除自由基的重要抗氧化酶。收集不同處理組細(xì)胞的裂解液，檢測MDA 含量和SOD 活性，實(shí)驗(yàn)均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.7 qPCR 檢測 收集細(xì)胞樣品，加入TRIzol 提取細(xì)胞RNA，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。以cDNA 為模板，按照qPCR 試劑盒說明書檢測SIRT1、P66SHC、BCL-2、β 肌動蛋白（β-actin）的mRNA 水平。每個樣本設(shè)置3 個復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。各待測基因引物序列見表1。

表1 qPCR 引物序列Tab 1 Primers used for qPCR

1.2.8 Western blotting 檢測蛋白水平 收集細(xì)胞裂解液，離心后吸取上清液，蛋白定量。配制10%分離膠及5%濃縮膠，蛋白上樣，70 V 電泳30 min，125 V 電泳70 min，300 mA 轉(zhuǎn)膜120 min。室溫下封閉2 h，分別加入兔抗人SIRT1、P66SHC、BCL-2、GAPDH 多克隆抗體（1:1 000稀釋），4 ℃搖床孵育過夜，充分洗滌后，加入HRP 標(biāo)記的羊抗兔IgG 抗體（1:5 000 稀釋）室溫孵育1 h，充分洗滌后，加入ECL 發(fā)光液，曝光，經(jīng)數(shù)碼凝膠圖像處理系統(tǒng)掃描圖像。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用GraphPad Prism 7.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)均以±s 表示，2 組間比較使用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析結(jié)合Tukey 檢驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 H2O2 處理誘導(dǎo)SVOG 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷

采用H2O2處理SVOG 細(xì)胞誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞體外氧化應(yīng)激損傷模型。CCK-8 細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖1A）顯示，隨著H2O2濃度及處理時間的增加，SVOG 細(xì)胞的活力逐漸下降。250 μmol/L H2O2處理12 h，SVOG 細(xì)胞的活力下降至對照組的60%左右，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.017）。熒光顯微鏡觀察結(jié)果（圖1B）顯示，250 μmol/L H2O2處理12 h，SVOG 細(xì)胞的細(xì)胞核明顯縮小，染色質(zhì)凝集呈顆粒團(tuán)塊狀分布，表明顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡；同時檢測氧化應(yīng)激相關(guān)分子，結(jié)果（圖1C、D）顯示，MDA 含量升高（P=0.001），SOD 活性下降（P=0.006），進(jìn)一步證實(shí)250 μmol/L H2O2處理SVOG 細(xì)胞12 h 可誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞體外氧化應(yīng)激損傷，因此選擇該H2O2濃度和處理時間用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 氧 化 應(yīng) 激 狀 態(tài) 下SVOG 細(xì) 胞SIRT1、P66SHC 與BCL-2 的表達(dá)水平

H2O2處 理SVOG 細(xì) 胞 后，qPCR 結(jié) 果（圖2A、B、C）顯示，SVOG 細(xì)胞經(jīng)H2O2處理后，SIRT1 及BCL-2 的mRNA 水平與對照組相比明顯下降，P66SHC 明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。Western blotting 結(jié)果（圖2D）進(jìn)一步證實(shí)H2O2處理后，SVOG 細(xì)胞SIRT1 表達(dá)下降，P66SHC 表達(dá)升高，BCL-2 表達(dá)下降。表明H2O2誘導(dǎo)的SVOG 細(xì)胞氧化損傷伴隨著SIRT1、BCL-2 的表達(dá)水平下降及P66SHC 的表達(dá)升高。

2.3 SVOG 細(xì)胞轉(zhuǎn)染SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒后P66SHC 及BCL-2 的表達(dá)

通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染48 h 后收集細(xì)胞進(jìn)行檢測。qPCR（圖3A、B、C）結(jié)果顯示，SIRT1組與對照組相比，SIRT1 及BCL-2 的mRNA 水平均升高（均P<0.05），而P66SHC 的mRNA 水平下降（P=0.000）；Western blotting 結(jié)果與qPCR 的結(jié)果一致（圖3D）。

2.4 SIRT1 過表達(dá)對H2O2 誘導(dǎo)的SVOG 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響

SVOG 細(xì)胞轉(zhuǎn)染SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒及H2O2處理后與H2O2組相比（圖4），細(xì)胞核形態(tài)正常，呈圓形或橢圓形，熒光分布均勻；MDA 含量下降（P=0.038），SOD 活性升高（P=0.021）。這些結(jié)果提示上調(diào)SIRT1 表達(dá)可減輕H2O2誘導(dǎo)的SVOG 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。

圖1 H2O2 處理誘導(dǎo)的人卵巢顆粒細(xì)胞SVOG 氧化應(yīng)激損傷Fig 1 H2O2-induced oxidative damage in human ovarian granulosa cells SVOG

圖3 SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后對人卵巢顆粒細(xì)胞SVOG 的P66SHC 與BCL-2 mRNA 和蛋白表達(dá)水平的影響Fig 3 Effects of SIRT1 overexpression plasmid transfection on mRNA and protein expression levels of P66SHC and BCL-2 in the human ovarian granulosa cells SVOG

圖4 SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后對H2O2 誘導(dǎo)人卵巢顆粒細(xì)胞SVOG 氧化應(yīng)激損傷的影響Fig 4 Effect of SIRT1 overexpression plasmid transfection on oxidative stress injury induced by H2O2 in human ovarian granulosa cells SVOG

2.5 過表達(dá)SIRT1 對氧化應(yīng)激狀態(tài)下SVOG 細(xì)胞P66SHC及BCL-2 表達(dá)的影響

SIRT1 過表達(dá)后，氧化應(yīng)激狀態(tài)下SVOG 細(xì)胞的P66SHC 及BCL-2 mRNA 和蛋白表達(dá)水平見圖5。qPCR結(jié)果顯示，SVOG 細(xì)胞轉(zhuǎn)染SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒及H2O2處理后與H2O2組比較，P66SHC 表達(dá)下降（P=0.002），BCL-2 表 達(dá) 升 高（P=0.013）。Western blotting 結(jié) 果與qPCR 的結(jié)果一致。這表明SIRT1 可能是通過調(diào)控P66SHC 及BCL-2 的表達(dá)參與H2O2誘導(dǎo)的SVOG 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。

圖5 SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后對氧化應(yīng)激狀態(tài)下人卵巢顆粒細(xì)胞SVOG 的P66SHC 與BCL-2 mRNA 和蛋白表達(dá)水平的影響Fig 5 Effects of SIRT1 overexpression plasmid transfection on mRNA and protein expression levels of P66SHC and BCL-2 in human ovarian granulosa cells SVOG under oxidative stress

3 討論

正常情況下，機(jī)體內(nèi)的氧化與抗氧化系統(tǒng)維持動態(tài)平衡。當(dāng)這種平衡狀態(tài)被有害刺激打破時，就會導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷，表現(xiàn)為多種疾病組織病理漸進(jìn)性損傷變化。在女性生殖系統(tǒng)中，氧化應(yīng)激可導(dǎo)致卵巢顆粒細(xì)胞功能異常甚至凋亡[13]，進(jìn)而導(dǎo)致卵巢功能受損，但其具體機(jī)制尚未闡明。本研究采用H2O2處理SVOG 細(xì)胞株，建立顆粒細(xì)胞體外氧化應(yīng)激損傷模型，探索緩解卵巢顆粒細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的分子靶點(diǎn)及其作用機(jī)制。

作為ROS 的主要成員，H2O2產(chǎn)生的羥自由基可引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，促進(jìn)ROS 產(chǎn)生，誘導(dǎo)細(xì)胞氧化損傷。我們的早期研究[12]在滋養(yǎng)細(xì)胞上也觀察到H2O2能夠誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞氧化損傷，促進(jìn)ROS 產(chǎn)生，破壞線粒體膜電位。因此，本研究也通過H2O2處理來誘導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞氧化損傷，建立氧化應(yīng)激模型。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，H2O2處理后SVOG 細(xì)胞活力下降，細(xì)胞核明顯縮小，染色質(zhì)凝集呈顆粒團(tuán)塊狀分布，表明顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡。氧化應(yīng)激可導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)抗氧化物質(zhì)和氧化物生成之間的不平衡狀態(tài)，過量ROS 能夠攻擊細(xì)胞生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并形成脂質(zhì)過氧化物。MDA 是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的重要產(chǎn)物，能引起蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的交聯(lián)，產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用。另一方面，ROS 消耗細(xì)胞內(nèi)的抗氧化物質(zhì)，引起細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶（如SOD）活性下降[14]。SVOG 細(xì)胞經(jīng)H2O2處理后，脂質(zhì)過氧化物MDA 水平顯著升高，而抗氧化酶SOD 水平明顯下降；說明H2O2處理能夠有效誘導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷。

SIRT1 可以通過對其底物分子的去乙?；饔?，參與多種細(xì)胞生理過程。大量研究表明，SIRT1 參與調(diào)控細(xì)胞的氧化應(yīng)激從而影響細(xì)胞的存活。Gay 等[15]報(bào)道在H2O2誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞氧化損傷模型中SIRT1 表達(dá)下降；Prola等[16]研究發(fā)現(xiàn)，抑制或降低SIRT1 活性會加重內(nèi)質(zhì)網(wǎng)誘導(dǎo)型心肌損傷，激活SIRT1 則會對心肌細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用。近年來的研究表明SIRT1 也參與調(diào)控卵巢功能。如在肥胖小鼠中，使用SIRT1 激動劑可以通過激活SIRT1 信號通路以及抑制哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號通路恢復(fù)卵巢功能，并且延長卵巢的壽命[9]。在多囊卵巢綜合征大鼠模型體內(nèi)，卵巢表達(dá)SIRT1 的水平顯著下降[8]。Lai 等[17]報(bào)道，患有多囊卵巢綜合征的不孕婦女顆粒細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平高于輸卵管因素導(dǎo)致的不孕婦女，可能進(jìn)一步影響卵子和胚胎質(zhì)量，從而影響體外受精胚胎移植的助孕結(jié)局。本研究在卵巢顆粒細(xì)胞體外氧化應(yīng)激損傷模型中也發(fā)現(xiàn)，250 μmol/L H2O2處理12 h 可誘發(fā)SVOG 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，同時SIRT1表達(dá)降低；而SVOG 細(xì)胞轉(zhuǎn)染SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒后再經(jīng)H2O2處理，細(xì)胞MDA 含量下降，SOD 活性上升，表明上調(diào)SIRT1 表達(dá)具有抗卵巢顆粒細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷作用。

銜接蛋白P66SHC 是調(diào)控氧化應(yīng)激和生命周期的關(guān)鍵因子，可以感知氧化應(yīng)激信號的刺激，從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)位至線粒體，氧化細(xì)胞色素C 產(chǎn)生大量ROS，造成細(xì)胞的氧化損傷[18]。研究[19]發(fā)現(xiàn)，小鼠P66shc 基因敲除后，機(jī)體對抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的DNA 損傷和細(xì)胞凋亡能力增強(qiáng)，壽命延長。SIRT1 是調(diào)控細(xì)胞氧化應(yīng)激的重要分子，可以通過直接或間接途徑調(diào)控P66SHC 表達(dá)。Wils 等[20]研究發(fā)現(xiàn)，在高糖誘導(dǎo)的心血管內(nèi)皮損傷過程中，SIRT1 和P53 均可通過影響P66SHC 的表達(dá)水平調(diào)控ROS 的產(chǎn)生；在組織和DNA 損傷時，SIRT1 可通過作用于P53，減少P53 依賴的細(xì)胞凋亡[21]；而P66SHC 作為P53 的下游信號分子參與氧化應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[22]。本研究發(fā)現(xiàn)H2O2誘導(dǎo)SVOG 細(xì)胞氧化損傷，伴隨著SIRT1 表達(dá)下降，P66SHC表達(dá)顯著升高。過表達(dá)SIRT1 基因則抑制P66SHC 基因表達(dá)，細(xì)胞氧化損傷減輕。這些結(jié)果提示SIRT1 可能通過抑制P66SHC 的表達(dá)從而緩解H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化 損傷。

氧化應(yīng)激狀態(tài)下，ROS 過量導(dǎo)致DNA 損傷，可激活P53 并快速轉(zhuǎn)移到線粒體，與線粒體膜上的BCL-2 家族成員相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡[23]。BCL-2 能夠阻止細(xì)胞色素c 從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)，從而抑制細(xì)胞凋亡，是參與調(diào)控線粒體凋亡途徑的凋亡抑制蛋白[24]。BCL-2 也可以通過減少氧自由基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化物的形成，發(fā)揮間接的抗氧化作用[25]。本研究顯示，在H2O2誘導(dǎo)的SVOG 細(xì)胞氧化損傷模型中，SIRT1 表達(dá)下降的同時，BCL-2 表達(dá)下降；SIRT1 過表達(dá)后再經(jīng)H2O2處理，BCL-2 表達(dá)上調(diào)。這些結(jié)果提示SIRT1 可能通過上調(diào)BCL-2 表達(dá)緩解H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷。

綜上所述，在H2O2誘導(dǎo)的人顆粒細(xì)胞SVOG 體外氧化應(yīng)激損傷模型中，調(diào)控細(xì)胞氧化應(yīng)激的SIRT1 表達(dá)降低；轉(zhuǎn)染過表達(dá)SIRT1 后，SVOG 細(xì)胞氧化損傷減輕，促過氧化損傷的P66SHC 表達(dá)下調(diào)，抗過氧化的BCL-2 表達(dá)上調(diào)。本研究發(fā)現(xiàn)了SIRT1 參與調(diào)控人卵巢顆粒細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的一種可能機(jī)制，進(jìn)一步的研究將有望為臨床上保護(hù)卵巢功能的治療提供新的靶點(diǎn)。

參·考·文·獻(xiàn)

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