周軍，鄧燕飛，許鄭超，李旭光，陸全平，周剛

（江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇 南京 210017）

中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）俗稱河蟹，自上世紀(jì)突破人工育苗后河蟹養(yǎng)殖快速發(fā)展，已發(fā)展成年產(chǎn)近800 000 t、產(chǎn)值550億元的水產(chǎn)支柱產(chǎn)業(yè)[1]。隨著河蟹養(yǎng)殖的發(fā)展，遼河水系、甌江水系的河蟹被引入河蟹主產(chǎn)區(qū)長江水系地區(qū)，加之人工繁育缺乏有效的育種措施，導(dǎo)致長江水系河蟹種質(zhì)混雜和退化嚴(yán)重[2，3]。盡管目前已育成并推廣應(yīng)用4個(gè)長江水系河蟹新品種“長江1號”、“長江2號”、“江海21號”、“諾亞1號”，并在生產(chǎn)中應(yīng)用推廣[4-5]，但新品種的數(shù)量和有限的推廣面積與河蟹養(yǎng)殖體量之間存在巨大的差距，為滿足河蟹產(chǎn)業(yè)可持續(xù)健康發(fā)展，有必要不斷挖掘長江水系河蟹優(yōu)異種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳育種應(yīng)用于生產(chǎn)。家系選育是一種有效的遺傳育種手段，成功應(yīng)用于中國對蝦、羅氏沼蝦等甲殼動(dòng)物新品種的選育[6-7]，目前長江水系、遼河水系河蟹已開展家系選育研究[8-15]，江蘇省淡水水產(chǎn)研究所自2008年成功突破長江水系大規(guī)格河蟹家系構(gòu)建以來不斷進(jìn)行技術(shù)創(chuàng)新，2017年選擇長江水系河蟹不同群體的大規(guī)格親蟹構(gòu)建ES-P2017家系，成功定向構(gòu)建全同胞家系96個(gè)，家系構(gòu)建成功率96.00%，最終獲得40個(gè)大眼幼體產(chǎn)量0.3 kg以上的家系，現(xiàn)總結(jié)如下以期為河蟹遺傳育種工作創(chuàng)建新的遺傳材料和積累材料。

1 材料與方法

1.1 親蟹的選擇

2017年11月，外部形態(tài)特征參照GB/T 19783—2005中華絨螯蟹，從“長江2號”核心群體、蘇南養(yǎng)殖群體、蘇北養(yǎng)殖群體、長江野生群體、洪澤湖野生群體中，選擇體質(zhì)健壯、無病無傷、性腺發(fā)育良好的大規(guī)格河蟹作為家系構(gòu)建的親蟹，每個(gè)群體選擇20組（雌雄比為1∶1），雌蟹平均規(guī)格在169.0～201.6 g之間，雄蟹平均規(guī)格在271.5～318.5 g之間（表1），物理標(biāo)記后送至射陽縣朱平水產(chǎn)苗種有限公司[13]。

表1不同群體親蟹規(guī)格情況

1.2 家系規(guī)?；瘶?gòu)建

親蟹入池前7 d，向交配池中注入0.5 m深、用80目篩絹過濾的鹽度為22左右的海水，用50 g/m3含有效氯30%左右的漂白粉進(jìn)行消毒。以直徑50 cm、高60 cm、上端敞口底端封閉的聚乙烯圓柱形網(wǎng)籠作為定向交配設(shè)施，網(wǎng)籠上端連接一個(gè)可松緊的網(wǎng)兜和直徑4 cm的PVC管以封閉網(wǎng)籠上端，以便于取放親蟹和投飼。根據(jù)配組計(jì)劃將親蟹按雌雄比 1∶1置于網(wǎng)籠中進(jìn)行配組，將100個(gè)網(wǎng)籠用鐵絲貫穿分兩組放入土池，進(jìn)行強(qiáng)化培育和交配，交配期間隨氣溫降低而逐漸加高水位。

1.3 抱卵蟹的越冬

2017年12月20日抽干池水，將抱卵雌蟹移出網(wǎng)籠留在交配池中越冬，未抱卵雌蟹和雄蟹取出，重新注入經(jīng)消毒鹽度為22左右的海水，根據(jù)氣溫變化逐漸加高水位并配備微孔增氧、水車式增氧機(jī)，越冬期間加強(qiáng)水質(zhì)、營養(yǎng)管理，確保抱卵蟹的越冬存活。

1.4 家系的定向繁育

采用56只室內(nèi)水泥池（4 m×4 m×1.5 m）作為定向育苗設(shè)施，池底架設(shè)氣頭確保育苗期間水體溶氧充足、均衡，“放幼”前1 d注入用80目篩絹過濾的鹽度為22左右的海水，水深0.5 m。2018年4月7日，選擇56只活力強(qiáng)、胚胎發(fā)育同步的抱卵蟹，按照1池1只抱卵蟹的原則進(jìn)行定向“放幼”，“放幼”結(jié)束后移出雌蟹。育苗期間全程投喂活輪蟲，每天根據(jù)吃食情況加減輪蟲投喂量，并控制好水質(zhì)和確保增氧。

1.5 家系的淡化和起捕

采用原池淡化技術(shù)，逐步降低育苗池水的鹽度，淡化期間投喂活輪蟲輔以淡水枝角類，淡化結(jié)束后采用燈光進(jìn)行起捕。

2 結(jié)果

2.1 家系規(guī)?；瘶?gòu)建

2017年12月20日，將抱卵雌蟹移出網(wǎng)籠原池越冬，經(jīng)統(tǒng)計(jì)共成功定向構(gòu)建全同胞家系96個(gè)，家系構(gòu)建成功率96%。

2.2 抱卵蟹的越冬

前后共選擇96只標(biāo)記、附肢齊全、活力強(qiáng)的抱卵蟹在原池越冬，至2018年4月7日共獲活力強(qiáng)的、胚胎發(fā)育良好的抱卵蟹75只，越冬成活率達(dá)78.13%，越冬成活率均在70%以上，其中蘇南養(yǎng)殖群體的越冬成活率最高達(dá)81.81%，不同群體親蟹越冬成活具體情況見表2。

表2不同群體親蟹越冬成活率比較

2.3 家系的定向繁育

截止5月20日共計(jì)收獲產(chǎn)量0.3 kg以上全同胞家系40個(gè)，總產(chǎn)量64.4 kg，平均產(chǎn)量為1.61 kg，其中產(chǎn)量1 kg以上家系29個(gè)，產(chǎn)量3 kg以上家系4個(gè)，單個(gè)家系大眼幼體平均產(chǎn)量再創(chuàng)新高，不同家系產(chǎn)量情況見圖1。

3 討論

3.1 家系的構(gòu)建

以往采用土池、封閉網(wǎng)箱作為家系規(guī)?；瘶?gòu)建的配對場所[8，13]，此次親蟹定向交配采用單個(gè)網(wǎng)籠作為家系規(guī)模化構(gòu)建交配場所，較以往小土坑和連體網(wǎng)箱作為交配場所具有以下優(yōu)勢，首先可隨時(shí)檢查親蟹攝食、配對和抱卵情況；其次歷年采用大規(guī)格親蟹繁育的實(shí)踐證明大規(guī)格親蟹配對難且配對時(shí)間長，用網(wǎng)籠做為交配場所其網(wǎng)眼大不會(huì)由于附著物而堵塞網(wǎng)眼阻隔籠內(nèi)外水交通，讓親蟹處在良好的水質(zhì)環(huán)境中。此外網(wǎng)籠上端架設(shè)的PVC管連接網(wǎng)籠，方便投飼和去除剩餌，可根據(jù)吃食情況靈活投飼防止殘餌敗壞水質(zhì)和確保親蟹營養(yǎng)充足。

3.2 家系的越冬

為確保抱卵蟹的越冬成活率，越冬期間根據(jù)每天的天氣情況采取不斷加深水位以防水溫劇烈變化；適時(shí)開啟微孔增氧或水車式增氧機(jī)，特別是大霧天全天候增氧確保池水溶氧充足；根據(jù)水質(zhì)情況適時(shí)換水和適量投餌，確保越冬期間池水水質(zhì)良好，親蟹營養(yǎng)均衡。越冬結(jié)果顯示在同池越冬的不同群體越冬成活率不同，其中以蘇南養(yǎng)殖群體群體越冬成活率最高達(dá)81.81%，蘇北養(yǎng)殖群體越冬成活率最低只72.22%，這可能與不同群體親蟹在選擇前的營養(yǎng)狀態(tài)存在差異有關(guān)[16]。

3.3 家系的定向繁育

3.3.1 水質(zhì)和投飼管理 歷年來我們采用土池中架設(shè)網(wǎng)箱、篩絹網(wǎng)將土池圍隔成一個(gè)個(gè)小池作為家系定向繁育設(shè)施[8，13]，育苗過程中網(wǎng)箱和篩絹網(wǎng)因附著物增多造成育苗水體交換能力差直至阻斷水體流通，此時(shí)需進(jìn)排水時(shí)則極為不便。在室外土池中小水體育苗水體小，隨著投餌量的不斷加大，糞便和殘餌影響水質(zhì)變壞，尤其是遇到風(fēng)雨天極易造成幼體大量死亡或緊貼網(wǎng)壁而逐漸死亡[8，13]。此次采用室內(nèi)水泥池育苗規(guī)避了風(fēng)雨對育苗的影響且進(jìn)排水便捷，室內(nèi)水源池培養(yǎng)“藻水”可不斷補(bǔ)充至育苗池，水質(zhì)相對便于管理。

結(jié)合歷年來家系育苗經(jīng)驗(yàn)采用“肥水放幼”，“放幼”前在各育苗池注入以海鏈藻為優(yōu)勢種的“藻水”。“放幼”結(jié)束后即開始投飼活輪蟲，用量瓶觀察吃食情況，以1～2 h基本吃盡為好，堅(jiān)持少量多次靈活掌握投餌量，防止投餌過多輪蟲與溞狀幼體競爭生態(tài)空間和影響水質(zhì)，水泥池因充氣無死角較土池更容易準(zhǔn)確觀察育苗池中輪蟲的剩余量相對易做到精準(zhǔn)投喂。

3.3.2 家系產(chǎn)量 因家系數(shù)量多捕撈時(shí)間長，故在56個(gè)水泥池中只起捕40個(gè)大眼幼體產(chǎn)量在0.3 kg以上的家系，產(chǎn)苗量1 kg以上家系29個(gè)，產(chǎn)苗量3 kg以上家系4個(gè)，產(chǎn)量較歷年都高，分析其原因一是水泥池水體相對網(wǎng)箱、土池育苗圍隔較大，幼體密度相對要稀，降低了幼體后期的相互殘殺，如2013年土池育苗圍隔就存在Z5變大眼幼體成活率明顯降低[13]；此外水泥池氣頭布置均勻溶氧充足，尤其是在大眼幼體階段使池水劇烈翻滾，有效降低了大眼幼體的互殘率；二是水泥池進(jìn)排水方便水質(zhì)相對要好控制；三是水泥池育苗采用原池淡化，有效降低了大眼幼體的病死率。不同家系間產(chǎn)量差異較大，產(chǎn)量最高的家系達(dá)3.25 kg，產(chǎn)量最低的家系亦有0.35 kg，前者是后者的近10倍，究其原因有以下幾個(gè)因素，一是各家系的“放幼”數(shù)量就存在差異，有的抱卵蟹產(chǎn)的很干凈，有的抱卵蟹產(chǎn)到中途已死亡，有的抱卵蟹“放幼”結(jié)束后腹肢上尚附著很多未出膜的死亡幼體；二是在育苗過程中有的家系因育苗過程中由于投餌量過多導(dǎo)致輪蟲濾食池中藻類水體變清又遭遇陰雨天，此時(shí)哪怕再加入水源池“藻水”亦難以使池水“變肥”，水質(zhì)變化致使幼體死亡；三是在育苗后期幼體越多的池因投餌量大糞便多水質(zhì)越穩(wěn)定，而一旦出現(xiàn)幼體死亡該池幼體開始不間斷死亡，幼體不斷減少難以控制投餌量致使水質(zhì)越來越差又導(dǎo)致幼體越來越少。四是由于“放幼”出膜時(shí)間不同步導(dǎo)致各家系幼體發(fā)育不同步，此次分兩批起捕導(dǎo)致部分出膜早的大眼幼體變幼蟹而無法起捕。

基于河蟹抱卵量大，積極開展河蟹家系選育是研究河蟹遺傳規(guī)律和選育品系快速提純的有效途徑，家系構(gòu)建繁育出苗則是這項(xiàng)工作的基礎(chǔ)，歷年來家系構(gòu)建實(shí)踐證明，隨著構(gòu)建技術(shù)的不斷改進(jìn)家系育苗量不斷提高完全可以滿足選育的要求，而不同家系間產(chǎn)量差異是育苗技術(shù)管理不到位還是遺傳因素造成的將在今后工作深入研究。