劉惠芬 王安皆 劉文光 張鳳林 周麗霞 華麗峰 唐文倩 李云芝

摘要：甲磺酸培氟沙星是喹諾酮類的第3代抗菌藥物，對蘇云金芽孢桿菌和黑胸敗血芽孢稈菌感染引起的家蠶細菌性敗血病，接菌后添食24 h有效防治質(zhì)量濃度最低為5.0 mg/L;先用蘇云金芽孢桿菌對5齡起蠶進行皮下穿刺接菌，8 h內(nèi)添食藥物對細菌病有較好的防治效果;采用蘇云金芽孢桿菌對5齡起蠶進行皮下穿刺，接菌后添食2、4、8、12 h的藥葉，最低防治質(zhì)量濃度分別為20.0、10.0、10.0、5.0 mg/L;5齡起蠶添食2、4 h的藥葉后接菌，有效防治質(zhì)量濃度為20.0 mg/L，8 h后喂食試驗濃度內(nèi)藥物防治效果已不佳。采用質(zhì)量濃度為200.0、100.0 mg/L的甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星溶液蘸桑葉飼蠶，其全繭量及繭層率與對照組比較未見顯著差異。

關(guān)鍵詞：抗菌藥物;甲磺酸培氟沙星;家蠶;細菌性敗血病;防治效果

中圖分類號：S884.4 ??文獻標志碼： A ?文章編號：1002-1302（2020）23-0175-03

培氟沙星（Pefloxacin）由法國Rogeo Bollon公司開發(fā)[1]，在臨床上主要采用甲磺酸鹽即甲磺酸培氟沙星，是喹諾酮類的第3代新型抗菌藥物，對革蘭氏陽性及陰性菌包括金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及對青霉素、頭孢菌素、氨基糖苷類耐藥菌株均有效，對復(fù)制期及靜止期菌株也有效[2]，培氟沙星具有專一性，作用于DNA促旋酶的A亞基，從而抑制DNA促旋酶的功能，使DNA復(fù)制受阻，影響DNA解鏈、切割和重新封閉等過程，導(dǎo)致DNA降解及細菌死亡[3]，是一種廣譜、高效、低毒的藥物，以吸收快、生物利用度好、組織藥物濃度高、體內(nèi)分布廣、維持時間長且無耐藥性為特征[4]。培氟沙星對家蠶常見細菌病的防治效果未見報道，本研究以蠶業(yè)生產(chǎn)上常用的細菌病防治藥物鹽酸環(huán)丙沙星作為對照，通過生物試驗研究其對家蠶細菌性敗血病的防治效果。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑及家蠶和病原菌

1.1.1 藥劑 甲磺酸培氟沙星及鹽酸環(huán)丙沙星均為市售產(chǎn)品，由山東省蠶業(yè)研究所統(tǒng)一采購。

1.1.2 家蠶品種 供試家蠶品種為菁松×皓月，由山東廣通蠶種集團有限公司提供。蠶卵正常環(huán)境下催青孵化，幼蟲在24～28 ℃、相對濕度約70%環(huán)境下桑葉飼育。

1.1.3 病原菌及其菌懸液 蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis）、黑胸敗血芽孢桿菌（Bacillus bombysepticus），均由筆者所在研究室保存。將以上2種病原菌的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物1支，用2 mL滅菌水洗下菌懸液備用。

1.1.4 試驗時間與地點 試驗于2019年春季在山東省蠶業(yè)研究所家蠶病理實驗室進行。

1.2 甲磺酸培氟沙星對家蠶細菌性敗血病的防治效果試驗

1.2.1 添食不同質(zhì)量濃度藥葉對細菌性敗血病的防治效果試驗 取蘇云金芽孢桿菌、黑胸敗血芽孢桿菌，分別對5齡起蠶進行皮下穿刺接菌，然后飼喂噴灑不同藥物及不同質(zhì)量濃度的桑葉，24 h調(diào)查。每區(qū)10頭家蠶，每個處理重復(fù)2區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。

1.2.2 接種病原菌后不同時間添食藥葉對細菌性敗血病的防治效果試驗 取蘇云金芽孢桿菌對5齡起蠶進行皮下穿刺接菌后，飼喂正常桑葉至6、8、12 h，再飼喂噴灑不同質(zhì)量濃度（320.0、160.0、80.0、40.0、20.0、10.0、5.0 mg/L）藥物的藥葉24 h調(diào)查。每區(qū)10頭家蠶，每個處理重復(fù)2區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。

1.2.3 接種病原菌后飼喂不同時間、不同質(zhì)量濃度藥葉對細菌性敗血病的防治效果試驗 取蘇云金芽孢桿菌對5齡起蠶進行皮下穿刺接菌后，飼喂不同質(zhì)量濃度（20.0、10.0、5.0、2.5 mg/L）藥葉2、4、8、12 h，再飼喂正常桑葉，24 h調(diào)查。每區(qū)10頭家蠶，每個處理重復(fù)2區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。

1.2.4 幼蟲飼喂不同時間、不同質(zhì)量濃度藥葉后接種病原菌的發(fā)病情況 5齡起蠶飼喂不同時間（2、4、8、12 h）、不同質(zhì)量濃度（20.0、10.0、5.0和 2.5 mg/L）藥葉后穿刺接菌蘇云金芽孢桿菌病原菌，然后飼喂正常桑葉，24 h調(diào)查。每區(qū)10頭家蠶，每個處理重復(fù)2區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。

1.3 配制藥液的保存期試驗

取蘇云金芽孢桿菌對5齡起蠶進行皮下穿刺接菌，然后飼喂噴灑配制不同時間（0、48 h）藥液的桑葉，24 h調(diào)查。每區(qū)10頭家蠶，每個處理重復(fù)2區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。

1.4 對繭質(zhì)影響試驗

自4齡起蠶，采用質(zhì)量濃度為200.0、100.0 mg/L 甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星溶液蘸桑葉飼蠶，4齡起每天飼喂藥葉8 h，其余時間飼喂普通桑葉至上蔟，空白對照組飼喂普通桑葉至上蔟，上蔟9 d采繭。每區(qū)60頭家蠶，每個處理重復(fù)3區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。調(diào)查各區(qū)全繭量、繭層量及繭層率等。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0進行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 甲磺酸培氟沙星對家蠶細菌性敗血病的防治效果

2.1.1 添食不同濃度藥葉的防治效果 取蘇云金芽孢桿菌、黑胸敗血菌，分別對5齡起蠶進行皮下穿刺接菌，然后飼喂噴灑不同質(zhì)量濃度甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星藥液的桑葉，24 h調(diào)查，由表1可知，添食噴灑甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星藥液質(zhì)量濃度為5.0 mg/L桑葉，接種病原菌的家蠶發(fā)病率均為0，說明上述2種藥物對蘇云金芽孢桿菌、黑胸敗血菌引起的家蠶敗血病均有很好的防治效果。

2.1.2 接種病原菌后不同時間添食藥葉對細菌性敗血病的防治效果 取蘇云金芽孢桿菌對5齡起蠶進行皮下穿刺接菌，先飼喂正常桑葉，經(jīng)不同時間后再飼喂噴灑不同質(zhì)量濃度藥物的桑葉，至24 h調(diào)查，由表2可知，接種6、8 h后開始添食質(zhì)量濃度>20.0 mg/L（320.0～20.0 mg/L）甲磺酸培氟沙星藥液的桑葉對家蠶細菌性敗血病有較好的防治效果，接種后 12 h 開始添食藥葉，防治效果較差。

2.1.3 接種病原菌后飼喂不同時間、不同質(zhì)量濃度藥葉對細菌性敗血病的防治效果 取蘇云金芽孢桿菌對5齡起蠶進行皮下穿刺接菌，飼喂不同時間、不同質(zhì)量濃度的藥葉后再飼喂正常桑葉至24 h調(diào)查，表3結(jié)果顯示，接菌后添食2、4、8、12 h的藥葉，最低防治質(zhì)量濃度分別為20.0、10.0、10.0、5.0 mg/L。

2.1.4 添食不同時間、不同質(zhì)量濃度藥葉后接種病原菌的發(fā)病試驗 5齡起蠶添食不同時間、不同質(zhì)量濃度藥葉后穿刺接種蘇云金芽孢桿菌病原菌，然后飼喂正常桑葉24 h調(diào)查，由表4可知，添食 20.0 mg/L 藥葉2 h和4 h區(qū)防治效果較好，添食 2 h 和4 h區(qū)效果優(yōu)于添食8 h和12 h區(qū)。

2.2 配制藥液的保存期試驗

取蘇云金芽孢桿菌對5齡起蠶進行皮下穿刺接菌，然后飼喂配制0 h和48 h的甲磺酸培氟沙星蘸藥桑葉，24 h調(diào)查，由表5可知，配制48 h 20.0、10.0 mg/L藥葉防病效果與配制后即刻使用的藥液相同，5.0、2.5 mg/L的防治效果略差。

2.3 對繭質(zhì)的影響

按照“1.4”節(jié)方法處理家蠶，4齡起每天飼喂藥葉 8 h，其余時間飼喂普通桑葉至上蔟，調(diào)查各區(qū)全繭量、繭層率等。由圖1、圖2結(jié)果可知，4～5齡飼喂200.0、100.0 mg/L的甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星對家蠶全繭量和繭層率無顯著影響。

3 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，對5齡起蠶進行皮下穿刺接種蘇云金芽孢桿菌和黑胸敗血菌，然后飼喂24 h噴灑不同質(zhì)量濃度甲磺酸培氟沙星的藥葉，對2種病菌引起的家蠶細菌性敗血病有效防治最低質(zhì)量濃度為5.0 mg/L;先用蘇云金芽孢桿菌對5齡起蠶進行皮下穿刺接菌，飼喂正常桑葉不同時間后，再飼喂噴灑不同質(zhì)量濃度藥物的桑葉至24 h調(diào)查，結(jié)果為接菌8 h內(nèi)添食甲磺酸培氟沙星，對細菌病有較好的防治效果;采用蘇云金芽孢桿菌對5齡起蠶進行皮下穿刺，接菌后添食2、4、8、12 h藥葉，再飼喂正常桑葉至24 h調(diào)查，最低防治質(zhì)量濃度分別為20.0、10.0、10.0 、5.0 mg/L;5齡起蠶添食2、4 h藥葉再接菌，有效防治質(zhì)量濃度為20 mg/L，8 h后喂食試驗質(zhì)量濃度內(nèi)藥物防治效果已不佳，這可能與家蠶生長或代謝速度加快導(dǎo)致體內(nèi)藥物質(zhì)量濃度降低有關(guān)。

4～5齡家蠶，采用質(zhì)量濃度為200.0、100.0 mg/L甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星溶液蘸桑葉飼喂，其全繭量及繭層率與對照組未見顯著差異。本研究初步證實，甲磺酸培氟沙星可以用于家蠶常見細菌病的防治。

參考文獻：

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