張敬峰 董永毅 盧鳳英 吳坤 孫華偉 張小飛

摘要：2019年7月至2020年6月，從江蘇不同地區(qū)38個規(guī)模水禽（鴨、鵝）養(yǎng)殖場采集各類樣品共1 671份，分別進行了鴨疫里氏桿菌、巴氏桿菌、大腸桿菌等當(dāng)前危害水禽生產(chǎn)的主要細(xì)菌性疾病病原的監(jiān)測。結(jié)果表明，鴨疫里氏桿菌陽性率為36.01%，巴氏桿菌陽性率為24.43%，大腸桿菌陽性率為31.17%，沙門氏菌陽性率為12.82%，葡萄球菌陽性率為19.05%。根據(jù)監(jiān)測結(jié)果結(jié)合江蘇省內(nèi)水禽養(yǎng)殖現(xiàn)狀進行分析，為水禽細(xì)菌性疾病防控技術(shù)推廣實施提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：江蘇省;水禽;細(xì)菌性疾病;監(jiān)測;鴨疫里氏桿菌;巴氏桿菌;大腸桿菌

中圖分類號：S852.61 ??文獻標(biāo)志碼： A ?文章編號：1002-1302（2020）23-0172-03

當(dāng)前，家禽細(xì)菌性疾病日趨復(fù)雜，嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，給養(yǎng)殖戶帶來了巨大的經(jīng)濟損失。由于近年來抗生素的濫用、不恰當(dāng)?shù)挠盟幏桨讣凹?xì)菌間耐藥基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)等因素，導(dǎo)致抗生素在臨床使用效果越來越差，通過藥物殘留等方式威脅人類健康，影響公共衛(wèi)生安全[1]。江蘇省是水禽養(yǎng)殖大省，其中鴨、鵝的生產(chǎn)具有區(qū)域性養(yǎng)殖量大、飼養(yǎng)集中等特點，但也存在養(yǎng)殖環(huán)境條件差、管理落后、生物安全不到位等諸多因素，從而導(dǎo)致細(xì)菌性疾病感染相對普遍。鴨疫里氏桿菌、巴氏桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌等病原是當(dāng)前危害水禽生產(chǎn)的主要細(xì)菌性疾病，幾種病原既可單一發(fā)病，又常混合感染，特別是與病毒性疾病混合感染后會給水禽生產(chǎn)造成極大的損失[2]。鑒于上述情況，本研究結(jié)合江蘇各地水禽養(yǎng)殖的現(xiàn)狀，對徐州、淮安、揚州、泰州、鎮(zhèn)江、無錫等地的部分規(guī)模鴨、鵝養(yǎng)殖場開展細(xì)菌性疾病的監(jiān)測與分析，為開展水禽細(xì)菌性疾病綜合防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料樣品 2019年7月至 2020年6月，從江蘇不同地區(qū)38個規(guī)模水禽養(yǎng)殖場采集各類發(fā)病及表面健康鴨群、鵝群樣品共1 671份。

1.1.2 試劑 普通營養(yǎng)瓊脂平板、巧克力營養(yǎng)瓊脂平板由本實驗室自制;麥康凱培養(yǎng)基、DHL培養(yǎng)基等均購自杭州微生物試劑有限公司;PCR試劑盒、常用工具酶以及凝膠回收試劑盒等均購自 TaKaRa公司;各類檢測用引物為筆者所在實驗室自行設(shè)計， 均由南京金斯瑞生物科技公司合成。

1.2 方法

1.2.1 樣品的采集收集 針對江蘇省規(guī)模水禽養(yǎng)殖場的分布特點，按蘇南（鎮(zhèn)江、無錫）、蘇中（揚州、泰州）、蘇北（徐州、淮安）不同區(qū)域進行采樣，著重開展鴨傳染性漿膜炎、巴氏桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌等病原的流行病學(xué)監(jiān)測及細(xì)菌分離鑒定。采取集中采樣（4—6月份和10—12月份各1次）和隨機采樣以及各地養(yǎng)殖場送檢樣品相結(jié)合，在此基礎(chǔ)上制定了詳細(xì)、科學(xué)的樣品采集方案，包括采樣信息登記表，詳細(xì)的記錄采集樣品家禽日齡、免疫程序、發(fā)病情況、藥物防控等詳細(xì)信息，準(zhǔn)確了解所采集樣品的背景資料。

1.2.2 樣品檢測 在38個不同規(guī)模的養(yǎng)殖場進行了相關(guān)樣品的采集，樣品采集后嚴(yán)格按照冷鏈運輸?shù)牟僮饕蠹皶r將樣品送至實驗室，采用常規(guī)方法進行PCR檢測以及細(xì)菌分離[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1 各類細(xì)菌檢測結(jié)果

2019年7月至2020年6月共采集、檢測各類樣品1 671份，分別采用PCR方法檢測鴨疫里氏桿菌樣品1 097份、巴氏桿菌樣品262份、大腸桿菌樣品231份、沙門氏菌樣品39份、葡萄球菌樣品42份。結(jié)果檢出鴨疫里氏桿菌陽性樣品395份，陽性率為36.01%;巴氏桿菌陽性樣品64份，陽性率為24.43%;大腸桿菌陽性樣品72份，陽性率為31.17%;沙門氏菌陽性樣品5份，陽性率為12.82%;葡萄球菌陽性樣品8份，陽性率為19.05%。即鴨疫里氏桿菌的陽性率最高，其次是大腸桿菌（圖1）。

2.2 不同季節(jié)細(xì)菌檢測情況

不同細(xì)菌在各季度的陽性檢出率有著不同的變化趨勢（圖2） ，其中鴨疫里氏桿菌2019年7—9月與10—12月的陽性率之間差異顯著（57.14%，22.09%），提示鴨傳染性漿膜炎臨床感染率在夏秋季節(jié)較高，冬季感染率相對下降。

2.3 不同地區(qū)鴨疫里氏桿菌檢測結(jié)果

蘇北地區(qū)（徐州市、淮安市）鴨疫里氏桿菌檢測陽性率（38.64%）均高于蘇南（鎮(zhèn)江市、無錫市）地區(qū)（35.91%）、蘇中（揚州市、泰州市）地區(qū)（30.49%），蘇中地區(qū)檢測陽性率相對低于蘇北、蘇南地區(qū)（圖3）。

2.4 不同日齡水禽鴨疫里氏桿菌檢測結(jié)果

鴨疫里氏桿菌在20～30日齡鴨群中陽性檢出率高達44.5%，在20～30日齡鵝群中陽性檢出率也可達25.3%，該結(jié)果與在流行病學(xué)調(diào)查中多個水禽養(yǎng)殖場的鴨傳染性漿膜炎臨床發(fā)病時間等情況基本一致，提示養(yǎng)殖場在鴨、鵝20日齡前做好藥物防控以及疫苗免疫的重要性;不同日齡鴨、鵝的鴨疫里氏桿菌檢測陽性率存在一定差異。其中，鴨場20～30日齡間陽性率最高，1～10日齡間陽性率最低;鵝場50日齡以上陽性率最低，20～30日齡與>30～50日齡間陽性率無明顯差異（圖4）。

2.5 細(xì)菌的分離鑒定

對檢測陽性病原樣品經(jīng)篩選后共分離到相關(guān)菌株90株，其中鴨疫里氏桿菌36株、巴氏桿菌26珠、大腸桿菌22株、沙門氏菌6株。分別將上述菌株進行了進一步鑒定和保藏，為后續(xù)相關(guān)研究提供資源保障。

3 討論與結(jié)論

鴨傳染性漿膜炎的病原為鴨疫里氏桿菌，在幾種水禽細(xì)菌性病原中，鴨疫里氏桿菌的陽性檢出率最高，說明該病的流行發(fā)生較為普遍。同時，在多個表面健康的鴨、鵝體內(nèi)以及水體環(huán)境中檢測出鴨疫里氏桿菌陽性，說明該病原可能是水禽養(yǎng)殖環(huán)境中的一種常在菌，與大腸桿菌等細(xì)菌一樣是條件性致病菌。在送檢的多個臨床表現(xiàn)為產(chǎn)蛋下降的蛋（種）鴨病料中分離檢測出鴨疫里氏桿菌，說明該細(xì)菌可能是引起產(chǎn)蛋下降的原因之一或作為協(xié)同感染病原，提示成年產(chǎn)蛋鴨也應(yīng)及時做好鴨傳染性漿膜炎防控工作。大腸桿菌、鴨疫里氏桿菌、巴氏桿菌感染水禽的臨床表現(xiàn)和病理解剖方面較為相似，均可產(chǎn)生纖維素性心包炎、肝周炎或氣囊炎等病變，肉眼不易區(qū)分，確診應(yīng)通過細(xì)菌培養(yǎng)以及PCR檢測等手段[4]。

江蘇省地處長江中下游，省內(nèi)水資源豐富，給水禽養(yǎng)殖提供了較好的自然環(huán)境。但由于近年來環(huán)保要求的不斷提高，水禽養(yǎng)殖的空間受到不斷壓縮，傳統(tǒng)的分散飼養(yǎng)方式也逐步向集約化飼養(yǎng)方式轉(zhuǎn)變，養(yǎng)殖場的布局密度、飼養(yǎng)密度都大幅度增加，不利于水禽疫病的整體防控。加之養(yǎng)殖設(shè)施落后，環(huán)境差、飼養(yǎng)方式落后的現(xiàn)象多有存在，各類細(xì)菌性、病毒性疾病時有發(fā)生、流行，亟待健全的疫病防控體系推動水禽健康養(yǎng)殖的發(fā)展。

雖然水禽細(xì)菌性疾病的病原種類較多，但整體防控思路基本相同。養(yǎng)殖場首先要做好生物安全防控，包括環(huán)境消毒與控制、科學(xué)生產(chǎn)管理等[5]。在藥物防控方面不僅要考慮各類藥物的作用機制及抑菌方式，合理搭配，以減少副作用和耐藥性，還需考慮到藥物在家禽機體內(nèi)的代謝周期，避免藥物殘留，保障食品安全。 鴨傳染性漿膜炎、大腸桿菌病等疾病的疫苗免疫應(yīng)考慮地區(qū)流行菌種的血清型、免疫時機、綜合免疫程序等方面因素[6]。

通過對江蘇省內(nèi)主要水禽生產(chǎn)區(qū)的細(xì)菌性病原監(jiān)測，摸清了當(dāng)前規(guī)模鴨、鵝養(yǎng)殖場以鴨傳染漿膜炎病原為主的水禽多發(fā)細(xì)菌性疾病的感染及帶菌情況。本研究下一步將從主要細(xì)菌病原的血清型鑒定、耐藥性分析、細(xì)菌的遺傳變異分析、臨床防控實施等方面開展工作，為制定合理的綜合防控措施并在省內(nèi)開展水禽細(xì)菌性疾病防控技術(shù)推廣實施提供依據(jù)。

參考文獻：

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