車星星，許 晶，李素玲，劉 虹

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，山西 太原 030031）

黑木耳[Auricularia auricula(L.ex Hook.) Underw.]，別名木耳、細(xì)耳、云耳、黑葉、木蛾，隸屬于真菌界（Fungi） 真菌門（Eumycota） 異擔(dān)子菌綱（Heterobasidiomycetes） 木耳目（Auriculariales） 木耳科（Auriculariaceae） 木耳屬（Auricularia）[1-2]。質(zhì)地柔軟、味道鮮美，是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的食用菌，有著“素中之葷”及“菌中瑰寶”之美譽(yù)[3-4]；同時(shí)，黑木耳也是一種價(jià)值很高的藥用菌，《本草綱目》中記載木耳治痔、性平、味甘、補(bǔ)氣血、止血活血，有滋潤(rùn)、強(qiáng)壯、通便之功能[5]。近年來，隨著黑木耳產(chǎn)業(yè)設(shè)施化和集約化程度的提高，黑木耳栽培企業(yè)、合作社和菇農(nóng)對(duì)黑木耳液體菌種培養(yǎng)技術(shù)的要求越來越高。通過對(duì)黑木耳液體培養(yǎng)基配方進(jìn)行優(yōu)化，并在最佳培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上對(duì)培養(yǎng)基的pH、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行篩選，為進(jìn)一步探討黑木耳的深層發(fā)酵工藝提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

供試菌種為黑15，由山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所提供[6]。

1.2 培養(yǎng)基

1.2.1 母種培養(yǎng)基

PDA 培養(yǎng)基。

1.2.2 液體培養(yǎng)基配方

配方1：馬鈴薯200 g、麥麩30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀2.0 g、硫酸鎂1.0 g、維生素B 一片，水1 000 mL。

配方2：馬鈴薯200 g、木屑30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀2.0 g、硫酸鎂1.0 g、維生素B 一片，水1 000 mL。

配方3：馬鈴薯200 g、玉米粉30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀2.0 g、硫酸鎂1.0 g、維生素B 一片，水1 000 mL。

配方4：馬鈴薯200 g、棉籽殼30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀2.0 g、硫酸鎂1.0 g、維生素B 一片，水1 000 mL。

配方5（CK）：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀3.0 g、硫酸鎂1.5 g，水1 000 mL。

馬鈴薯、麥麩、玉米粉、木屑、棉籽殼需開水煮沸30 min 后，用紗布過濾，取其過濾液使用。

1.3 試驗(yàn)方法

取250 mL 三角瓶，分別盛裝各液體培養(yǎng)基100 mL，121℃高壓滅菌30 min，于冷卻室冷卻后，無菌條件下接入等量母種，靜置培養(yǎng)24 h 后置于23℃～30℃，搖床培養(yǎng)7 d。通過測(cè)定不同培養(yǎng)基配方、pH、培養(yǎng)溫度下黑木耳液體培養(yǎng)基菌絲生物量，確定最佳的液體培養(yǎng)基配方、pH、培養(yǎng)溫度。試驗(yàn)設(shè)3 次重復(fù)。

1.3.1 pH 的測(cè)定

三角瓶液體培養(yǎng)基滅菌后，將液體培養(yǎng)基的pH分別調(diào)至3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0，接種培養(yǎng)7 d 后測(cè)定菌絲體生物量。

1.3.2 培養(yǎng)溫度

液體培養(yǎng)基接種后分別置于21℃、23℃、25℃、27℃、29℃、31℃下?lián)u床培養(yǎng)7 d 后，測(cè)定菌絲體生物量。

1.3.3 菌絲體生物量測(cè)定方法

培養(yǎng)結(jié)束后，將每瓶發(fā)酵液用蒸餾水沖洗2 次，真空抽濾，收集菌絲體，在60℃下鼓風(fēng)干燥至恒重，用電子天平稱重。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析

相關(guān)數(shù)據(jù)采用Excel 2003、DPS 9.0、LSD 法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同液體培養(yǎng)基處理對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響

不同液體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生物量的影響見表1。

表1 不同液體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生物量的影響Tab.1 Effects of different liquid mediums on mycelial biomass of Auricularia auricula

由表1 可知，從培養(yǎng)液的顏色來看，配方1、配方2 和配方5 澄清，配方3 較差，而配方4 呈渾濁狀態(tài)；從菌絲球的顏色來看，配方1、配方2 和配方5 菌絲潔白，配方3 菌絲呈淺黃色，而配方4的菌絲呈污黃色；從菌絲球的均勻情況來看，配方1、配方2、配方3 和配方5 分布均勻，配方4 分布較均勻；從菌絲生物量來看，配方1 和配方2 的菌絲生物量差異不顯著，但與配方5（CK） 差異顯著，分別達(dá)1.63 g·100-1mL-1和1.59 g·100-1mL-1；配方4菌絲生物量最少，為1.14 g·100-1mL-1。

2.2 不同pH 液體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響

不同pH 的液體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響見表2。

表2 不同pH 液體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生物量的影響Tab.2 The effects of different pH on mycelial biomass of Auricularia auricula

從表2 可以看出，黑木耳液體菌種菌絲在pH 5.0～8.0 之間，均可以較好地生長(zhǎng)。pH 7.0 時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度最快，菌絲生物量最多，達(dá)1.60 g·100-1mL-1，培養(yǎng)液顏色澄清、菌絲球生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、大小均勻；pH 6.0 時(shí)菌絲生長(zhǎng)情況較好，與pH 7.0 時(shí)相比差異不顯著；當(dāng)pH＞7.0 時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度隨著pH 的升高而減慢，生長(zhǎng)勢(shì)逐漸減弱，生物量隨之降低，菌絲球也變得不再均勻；而當(dāng)pH＜6.0 時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度隨著pH 的降低而減慢，生長(zhǎng)勢(shì)逐漸減弱，生物量隨之降低，菌絲球也變得不再均勻。

2.3 不同培養(yǎng)溫度對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響

不同培養(yǎng)溫度對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響結(jié)果見表3。

表3 不同培養(yǎng)溫度對(duì)黑木耳菌絲生物量的影響Tab.3 The effects of different temperature on mycelial biomassof Auricularia auricular

不同培養(yǎng)溫度對(duì)黑木耳菌絲的生長(zhǎng)有很大的影響。從表3 可以看出，黑木耳菌絲生長(zhǎng)的適宜溫度在25℃～27℃之間，而以25℃為最適宜溫度。25℃下，菌絲生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、大小和分布均勻、菌絲生物量最高，達(dá)1.62 g·100-1mL-1，除與27℃相比差異不顯著外，與其他處理相比差異均達(dá)顯著水平。而當(dāng)培養(yǎng)溫度高于27℃時(shí)，菌絲生長(zhǎng)緩慢或不生長(zhǎng)，生長(zhǎng)勢(shì)也逐漸減弱，菌絲生物量隨之減少，溫度過高菌絲體活力下降，易感染雜菌。

3 結(jié)論與討論

在黑木耳液體培養(yǎng)過程中，不同的配方對(duì)黑木耳菌絲的生長(zhǎng)影響各不相同。試驗(yàn)結(jié)果表明，配方1 最適宜于黑木耳液體培養(yǎng)，菌絲生長(zhǎng)速度快，長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，菌絲生物量高，與其他配方相比差異達(dá)顯著水平；配方2 雖不及配方1，但綜合性狀表現(xiàn)良好，除了與配方1 相比菌絲生物量差異不顯著外，與其他配方的差異均達(dá)顯著水平，也是值得參考的黑木耳液體培養(yǎng)基的配方。

不同pH 對(duì)黑木耳菌絲的生長(zhǎng)的試驗(yàn)結(jié)果表明，黑木耳液體菌種最適宜的pH 為6.0～7.0，偏酸或偏堿均不適宜黑木耳菌絲的生長(zhǎng)。

黑木耳液體菌種的最適宜培養(yǎng)溫度為25℃～27℃，溫度過低或過高均可以使菌絲體活力下降，并容易感染雜菌。