鄒華偉 王玉強(qiáng)

乳腺癌是發(fā)生于乳腺腺上皮組織的1種惡性腫瘤。隨著我國(guó)的不斷發(fā)展，其發(fā)病率也逐漸增加，嚴(yán)重影響到人民的生活質(zhì)量與家庭經(jīng)濟(jì)[1-2]。IRS-1、IRS-2均屬于胰島素受體底物家族中的一員，是胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中的關(guān)鍵中介分子，并參與多種激素、細(xì)胞因子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，能夠維持細(xì)胞的基本功能，對(duì)于引起腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有重要關(guān)系[3-4]。因此，本研究通過檢測(cè)IRS-1、IRS-2蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)，分析其表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取本院2010年9月至2013年9月收治的70例乳腺癌患者作為研究對(duì)象，根據(jù)資料結(jié)果可分為觀察組(70份癌組織標(biāo)本)及對(duì)照組(70份癌旁組織標(biāo)本，距腫瘤邊緣4 cm處)，所有研究對(duì)象均為女性，其中觀察組年齡25～76歲，平均年齡(45.36±5.24)歲；對(duì)照組年齡28～79歲，平均年齡(46.28±6.31)歲。其臨床TNM分期按照美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)制定的乳腺癌分期標(biāo)準(zhǔn)[5]。納入標(biāo)準(zhǔn)：①已確診為浸潤(rùn)性乳腺癌；②獲得患者及家屬的知情同意，并簽署知情同意書；③所有患者均均行根治性手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②嚴(yán)重肝腎功能不全者；③術(shù)后行放化療者；④臨床資料不完整。兩組一般資料比較無明顯差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 免疫組化SP試劑盒、DAB顯色試劑、EDTA抗原修復(fù)液、PBS粉劑均來自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，濃縮兔抗人IRS-1單克隆抗體來自于武漢博士德公司，兔抗人IRS-2來自美國(guó)Abcam公司。

1.2.2 免疫組織的化學(xué)染色 采用SP法對(duì)石蠟片進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，主要是將手術(shù)切片標(biāo)本經(jīng)過中性甲醛固定后，進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋后切片，厚度為4 μm，再經(jīng)二甲苯脫蠟及梯度酒精至水，使用EDTA緩沖液進(jìn)行修復(fù)，在室溫下加入3%過氧化氫孵育10 min，并使用10%的山羊血清封閉。分別加入相應(yīng)的IRS-1抗體、IRS-2抗體。并以PBS代替一抗作為對(duì)照組，4 ℃過夜，經(jīng)過復(fù)溫后加入二抗，37 ℃溫箱孵育20 min，再加入三抗，37 ℃溫箱孵育20 min，最后進(jìn)行DAB 顯色試劑盒顯色，蘇木精復(fù)染，1%酒精鹽酸分化，自來水返藍(lán)，蒸餾水洗滌，脫水、透明封片，用 PBS 代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判定 IRS-1、IRS-2陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色或棕褐色。根據(jù)標(biāo)本染色的強(qiáng)度以及范圍進(jìn)行判定：①根據(jù)細(xì)胞染色范圍：棕黃色染色范圍0～25%為1分、26%～50%為2分、51%～75%為3分、>75%為4分。②根據(jù)染色強(qiáng)度：無著色為0分，即陰性；淺黃色為1分，即弱陽(yáng)性；棕黃色為2分，即陽(yáng)性；棕褐色為3分，即強(qiáng)陽(yáng)性。顯色強(qiáng)度×陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為染色的綜合計(jì)分，≤1分為陰性(低表達(dá))，陽(yáng)性為>2分(高表達(dá))，其中5～8分為中度陽(yáng)性，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性。兩組免疫結(jié)果由兩位高年資的病理醫(yī)師共同完成。

1.3 觀察指標(biāo)

根據(jù)其資料及檢測(cè)結(jié)果記錄所有患者其性別、年齡及腫瘤分化程度等一般臨床資料和腫瘤情況；IRS-1、IRS-2蛋白的表達(dá)水平及預(yù)后情況；不同臨床特征患者IRS-1、IRS-2蛋白表達(dá)水平等相關(guān)資料差異性比較；分析IRS-1、IRS-2蛋白的表達(dá)水平與乳腺癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1.4 隨訪

采用電話或者上門進(jìn)行隨訪，隨訪截止時(shí)間為2018年9月30日，隨訪時(shí)間為1～60個(gè)月，并在隨訪期間，有15例出現(xiàn)死亡，22例出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以(±s)表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)，采用Kaplan-Meier法估計(jì)不同臨床特征乳腺癌患者的生存情況，通過非條件單因素和多因素Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析影響乳腺癌患者預(yù)后的相關(guān)因素，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組IRS-1、IRS-2蛋白表達(dá)水平比較

乳腺癌組織中IRS-1、IRS-2蛋白的高表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組組織標(biāo)本中IRS-1、IRS-2蛋白表達(dá)水平比較(例，%)

2.2 乳腺癌患者IRS-1、IRS-2蛋白表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系

IRS-1、IRS-2蛋白表達(dá)與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)以及雌激素受體狀況無明顯相關(guān)性(P>0.05)，但I(xiàn)RS-1、IRS-2蛋白表達(dá)與乳腺癌患者的TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性(P<0.05)，見表2。

表2 乳腺癌患者的IRS-1、IRS-2蛋白表達(dá)情況與臨床病理特征的關(guān)系/例

2.3 乳腺癌患者預(yù)后的生存情況

本研究70例乳腺癌患者中，自出院后至隨訪結(jié)束存活1～60個(gè)月。乳腺癌患者中位無進(jìn)展時(shí)間45.5個(gè)月，其中IRS-1高表達(dá)和低表達(dá)患者其中位無進(jìn)展時(shí)間分別為32個(gè)月、50個(gè)月，而IRS-2蛋白高表達(dá)和低表達(dá)患者其中位無進(jìn)展時(shí)間分別為28個(gè)月、52個(gè)月，中位無進(jìn)展時(shí)間比較，P<0.05。

2.4 影響乳腺癌患者預(yù)后的單因素分析

經(jīng)單因素分析得出：TNMⅢ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及IRS-1、IRS-2高表達(dá)患者生存時(shí)間均顯著縮短(P<0.05)，見表3。

2.5 影響乳腺癌患者預(yù)后多因素Cox分析

經(jīng)多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析得出：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、IRS-1高表達(dá)、IRS-2高表達(dá)以及TNMⅢ～Ⅳ期均為影響乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表4。

3 討論

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率可占其他惡性腫瘤的7%～10%，多發(fā)生在40～60歲之間的女性中[6]，早期癥狀不明顯，常出現(xiàn)乳房腫塊、胸痛、水腫、乳頭內(nèi)陷以及腋窩淋巴結(jié)腫等癥狀，其癌細(xì)胞并容易隨著血液以及淋巴液散播至全身，形成轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重的威脅到患者的心身健康，并已成為目前社會(huì)上的重大公共衛(wèi)生問題[7-8]。因此，為了能夠降低去發(fā)病率，提高治療效果，有相關(guān)學(xué)者提出IRS-1、IRS-2蛋白與乳腺癌的臨床癥狀以及預(yù)后狀況有著重要的關(guān)系。IRS是指能夠被激活的胰島素受體絡(luò)氨酸激酶作用的底物，具有較多的絡(luò)氨酸殘基，可被磷酸化，而磷酸化的IRS卻能夠結(jié)合并激活下游效應(yīng)物，也是作為胰島素信號(hào)因子轉(zhuǎn)導(dǎo)中的關(guān)鍵調(diào)控[9-10]，并有相關(guān)研究表明，胰島素生長(zhǎng)因子的信號(hào)系統(tǒng)失調(diào)在癌癥中較為常見[11]，因此，IRS在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中有起著著重要作用。

表3 影響乳腺患者預(yù)后的單因素分析

表4 影響乳腺癌患者預(yù)后多因素Cox分析

本次研究結(jié)果可知，乳腺癌組織中IRS-1、IRS-2蛋白的高表達(dá)率明顯均高于對(duì)照組(65.71%vs32.86%，70.00%vs35.71%，P<0.05)，表示IRS-1、IRS-2蛋白在乳腺癌患者中水平表達(dá)升高，能夠反應(yīng)乳腺癌的嚴(yán)重程度；IRS-1、IRS-2蛋白表達(dá)與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)以及雌激素受體狀況無明顯差異(P>0.05)，但I(xiàn)RS-1、IRS-2蛋白表達(dá)與乳腺癌患者的TNM分期以及淋巴轉(zhuǎn)移比較有明顯差異(P<0.05)；并經(jīng)過患者出院后的隨訪可知，TNMⅢ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及IRS-1、IRS-2高表達(dá)患者生存時(shí)間均顯著縮短；為進(jìn)一步了解患者的預(yù)后狀況，經(jīng)多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析得出：淋巴轉(zhuǎn)移、IRS-1高表達(dá)、IRS-2高表達(dá)以及TNMⅢ～Ⅳ期均為影響乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。由此可知IRS-1、IRS-2蛋白的表達(dá)能夠反應(yīng)乳腺癌的嚴(yán)重程度，并對(duì)于該疾病的預(yù)后提供了重要線索。

信號(hào)通路指當(dāng)細(xì)胞里發(fā)生反應(yīng)時(shí)，信號(hào)從細(xì)胞外傳到細(xì)胞內(nèi)，而細(xì)胞并根據(jù)這種信息來做出反應(yīng)的現(xiàn)象，并參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及免疫調(diào)節(jié)等作用，主要是由蛋白激酶與磷酸酶構(gòu)成的，能夠抑制或激活下游蛋白的活性，并當(dāng)信號(hào)通道發(fā)生異常時(shí)可導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生癌變[12-14]。IRS是參與了細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的磷酸化蛋白，能夠控制下游信號(hào)的傳導(dǎo)，當(dāng)其異常時(shí)可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[15]。IRS-1與IRS-2是IRS家族中的一員，其中IRS-1是1種蛋白質(zhì)，有多個(gè)可被受體激酶磷酸化的位點(diǎn)，當(dāng)磷酸化后可同多種效應(yīng)物結(jié)合。IRS-2的酪氨酸被磷酸化后能夠同PI3K結(jié)合，將該酶激活，并影響磷脂的代謝，而IRS蛋白的幾種亞型已證實(shí)在腫瘤中的表達(dá)有改變，因此，IRS-1與IRS-2對(duì)于乳腺癌發(fā)生發(fā)展有重要關(guān)系[16-17]。

綜上所述，IRS-1、IRS-2在乳腺癌癌變組織中呈高表達(dá)，隨著患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNMⅢ～Ⅳ期時(shí)以及IRS-1、IRS-2蛋白高表達(dá)率均上升。因此，乳腺癌組織中IRS-1、IRS-2蛋白的表達(dá)水平對(duì)判斷乳腺癌的惡性程度及患者預(yù)后提供了一定的的參考價(jià)值。但本組研究選取樣本量較少和研究時(shí)間過短，更多研究結(jié)果，需進(jìn)一步深入研究。