張雷，王歡歡，葛瑩，章學(xué)東

(杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 杭州 310024)

微生態(tài)制劑作為抗生素替代品，已被廣泛應(yīng)用于家禽生產(chǎn)[1]。微生態(tài)制劑能有效補(bǔ)充家禽腸道內(nèi)有益微生物，改善腸道菌群平衡，提高動(dòng)物機(jī)體抗病能力、代謝能力及飼料吸收利用能力，從而達(dá)到防治腸道疾病和促進(jìn)生長的雙重作用[2-4]。在日常應(yīng)用中，微生態(tài)制劑常作為添加劑加入飼料中，由于難于混勻使得使用效果不佳。同時(shí)，低聚糖的吸濕性和粘性會(huì)導(dǎo)致飼料結(jié)塊從而影響均勻度和飼喂效果。本試驗(yàn)通過飲水飼喂不同組合的微生態(tài)制劑，研究其對雛雞生產(chǎn)性能、免疫器官指數(shù)和腸道益生菌群的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

低聚果糖(FOS)購自量子高科(中國)生物股份有限公司，果糖含量≥95%，粉末狀固體，飼料級(jí)?？莶菅挎邨U菌、地衣芽孢桿菌和丁酸梭菌水溶性制劑采購自浙江惠嘉生物科技股份有限公司。雛雞全價(jià)配合飼料采購自上海超越飼料有限公司，原料組成中不含微生態(tài)制劑。

1.2 方法

選擇1日齡白羽烏骨雛雞140羽，隨機(jī)分為四組，每組35羽，每只雞為1個(gè)重復(fù)。通過飲水飼喂不同組合的微生態(tài)制劑：對照組，不添加微生態(tài)制劑；試驗(yàn)Ⅰ組，添加0.25% FOS；試驗(yàn)Ⅱ組，添加0.125% FOS+0.01%復(fù)合益生菌制劑；試驗(yàn)Ⅲ組，添加0.02%復(fù)合益生菌制劑。復(fù)合益生菌制劑中，丁酸梭菌≥1.0×109L-1，枯草芽孢桿菌≥1.0×1012L-1，地衣芽孢桿菌≥1.0×1012L-1。采用地面平養(yǎng)方式，自由采食和飲水，試驗(yàn)期42 d。各組的疫苗免疫和飼養(yǎng)管理?xiàng)l件保持一致。

1.3 指標(biāo)測定

1.3.1 體重

試驗(yàn)第1、42天，以個(gè)體為單位空腹稱重，并記錄。

1.3.2 免疫器官

試驗(yàn)第42天，各處理隨機(jī)選取6只，放血處死，摘取脾臟、兩側(cè)胸腺、法氏囊，吸干血液并去除結(jié)締組織后稱重并計(jì)算免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)=免疫器官重量(g)/活體重(kg)。

1.3.3 腸道菌群檢測

試驗(yàn)第42天，各處理隨機(jī)選取6只，放血處死，無菌操作下分離十二指腸和盲腸，從各部位取出一定量腸道內(nèi)容物并裝入無菌試管中，-20 ℃下保存，用于細(xì)菌DNA的提取。應(yīng)用DNA提取試劑盒提取基因組DNA，使用NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)測定DNA濃度，并通過1%瓊脂凝膠電泳確認(rèn)其完整性和大小，儲(chǔ)存于-30 ℃冰箱中備用。隨后通過Real-time PCR測定樣品中雙歧桿菌和乳酸菌，進(jìn)行定量分析。特異性引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，引物Bif164序列(5′-3′)，F(xiàn): GGGTGGTAATGCCGGATG，R: TAAGCCATGGACTTTCACACC，擴(kuò)增長度440 bp；引物L(fēng)ac序列(5′-3′)，F(xiàn): AGCAGTAGGGAATC TTCCA；R: ATTYCACCGCTACACATG，擴(kuò)增長度344 bp。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 對雛雞生產(chǎn)性能的影響

如表1可見，添加42 d后，復(fù)合益生菌+低聚果糖組和復(fù)合益生菌組雞體重顯著高于對照組。各處理間平均日增重差異不顯著。

表1 飲用微生態(tài)制劑對雛雞生產(chǎn)性能的影響

注：同列數(shù)據(jù)后無相同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，表2～3同。

2.2 對雛雞免疫器官的影響

如表2可見，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，復(fù)合益生菌+低聚果糖組雞胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)顯著高于對照組，各處理間脾臟指數(shù)無顯著差異。

表2 飲用微生態(tài)制劑對雛雞免疫器官的作用

2.3 對雛雞腸道菌群的影響

如表3所示，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，復(fù)合益生菌+低聚果糖組十二指腸雙歧桿菌數(shù)量和盲腸乳酸桿菌數(shù)量顯著高于對照組，復(fù)合益生菌組十二指腸乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量顯著高于對照組。

表3 飲用微生態(tài)制劑對雛雞腸道菌群的影響

3 討論

復(fù)合微生態(tài)制劑能改善雞的生產(chǎn)性能，而且優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用1種微生態(tài)制劑的效果，其中復(fù)合芽孢桿菌制劑,應(yīng)用最為廣泛。薛冬玲等[5]發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌能夠提高試驗(yàn)組肉雞末期的平均體重、凈增重和日增重；鄧文等[6]發(fā)現(xiàn)，同時(shí)添加丁酸梭菌和低聚木糖能顯著提高肉雞平均日增重，兩者有明顯的互作效應(yīng)，而單獨(dú)添加對肉雞平均日增重的影響不顯著；任冰等[7]發(fā)現(xiàn)，果寡糖-地衣芽孢桿菌組肉仔雞體重顯著高于對照組，而果寡糖組的體重增加不顯著。本試驗(yàn)結(jié)果與戴晉軍等[8]、Rosidi等[9]研究結(jié)果一致。

微生態(tài)制劑具有提高動(dòng)物免疫功能的作用，能增強(qiáng)動(dòng)物對病原的抵抗能力，降低發(fā)病率，進(jìn)而提高生產(chǎn)性能[10]。國內(nèi)外大量研究表明，益生芽孢桿菌、丁酸梭菌和低聚果糖都能夠提高機(jī)體免疫功能。趙希彥[11]利用芽孢桿菌微生態(tài)飼料添加劑飼喂雛雞，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組各免疫器官指數(shù)均顯著高于對照組。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飲用復(fù)合微生態(tài)制劑顯著提高雞胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)，對試驗(yàn)組雞胸腺和法氏囊的發(fā)育均有促進(jìn)作用，有助于提高動(dòng)物體液免疫水平和細(xì)胞免疫水平，增強(qiáng)機(jī)體抗病力[12-13]。

改善肉雞的生產(chǎn)性能還可能是通過調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系，使其維持良好平衡，由此促進(jìn)腸道功能[14]。穩(wěn)定的腸道微生物區(qū)系對宿主抵御病原菌的入侵有重要作用[15]。已有研究表明，微生態(tài)制劑通過調(diào)節(jié)腸道菌群來改善家禽的生產(chǎn)性能[12-13,16]。芽孢桿菌微生態(tài)制劑具有拮抗腸道病原細(xì)菌、維持和調(diào)整腸道微生態(tài)平衡的作用[17]。低聚果糖在體內(nèi)能夠促進(jìn)雙歧桿菌和乳酸桿菌增殖，進(jìn)而發(fā)揮有益作用，抑制有害菌增殖并通過拮抗作用減少有害菌對腸道上皮的黏附[18-19]。丁酸梭菌產(chǎn)生的丁酸是結(jié)腸黏膜的主要能量物質(zhì)，對維持正常的腸道絨毛形態(tài)和吸收功能有重要作用[11]，丁酸梭菌還能促進(jìn)肉雞腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳酸桿菌的增長[20]。本試驗(yàn)中，復(fù)合微生態(tài)制劑對十二指腸乳酸桿菌、雙歧桿菌，以及盲腸內(nèi)乳酸桿菌都有明顯的增殖作用，但是對盲腸內(nèi)的雙歧桿菌的作用不顯著。