童妍　李歡歡　羅丹　趙煥瑛　羅倫才

【摘 要】 目的：探討益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶對(duì)慢性疲勞綜合征（CFS）小鼠內(nèi)分泌功能的調(diào)節(jié)作用。方法：SPF級(jí)KM小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組：正常組、模型組、陽(yáng)性組、益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶高、中、低劑量組。除正常組外，各組每天上、下午各強(qiáng)制游泳2h，水溫（25±1）℃，水深20cm，各組每天灌胃給藥，連續(xù)7d，測(cè)定各組的血清三碘甲狀腺原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）、促甲狀腺素（TSH）、雌二醇（E2）、睪酮（T）、黃體生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、孕酮（PG）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、皮質(zhì)酮（CORT）、醛固酮（ALD）、脫氫異雄酮（DHEA）的含量。結(jié)果：與模型組相比，益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶小鼠血清中ACTH、ALD、 DEHA、CORT、FSH、LH、T4濃度降低，E2、T3濃度升高。結(jié)論：益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶能改善CFS小鼠的內(nèi)分泌功能。

【關(guān)鍵詞】 益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶;慢性疲勞綜合征;神經(jīng)內(nèi)分泌

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2020）23-0015-03

Regulatory Effect of Yishenbuqiqiangshen Tea on Endocrine Function in Mice with Chronic Fatigue Syndrome

TONG Yan1 LI Huanhuan1 LUO Dan1 ZHAO Huanying1 LUO Luncai2*

1.College of Life Science and Engineering， Southwest Jiaotong University， Chengdu 610031， China;

2.The Second Peoples Hospital of Liangshan Yi Autonomous Prefecture， Xichang 615000， China

Abstract：Objective To investigate the regulatory effect of Yishenbuqiqiangshen tea on the endocrine function of chronic fatigue syndrome mice. Methods Sixty SPF KM mice， half male and half female， were randomly divided into six groups： normal group， model group， positive group， high， medium and low dose group. In addition to control group， each group was forced to swim for 2 hours in the morning and afternoon， the water temperature was （25±1）℃， and the water depth was 20cm， Each group was administrated by gavage every day for 7 consecutive days. The contents of T3， T4， TSH， E2， T， LH， FSH， PG， ACTH， CORT， ALD and DHEA were measured. Results Compared with the model group， compared with the model group， the concentrations of ACTH， ALD， DEHA， CORT， FSH， LH， T4 in the serum of yishenbuqiqiangjian tea mice decreased， while the concentrations of E2 and T3 increased. Conclusion Yishenbuqiqiangshen tea can improve the endocrine function of mice with chronic fatigue syndrome.

Keywords：Yishenbuqiqiangshen Tea; Chronic Fatigue Syndrome; Neuroendocrine

隨著社會(huì)發(fā)展，亞健康問(wèn)題日益突出，而慢性疲勞綜合征（Chronic Fatigue Syndrome，CFS）是亞健康狀態(tài)的最主要的表現(xiàn)形式，CFS的特征是慢性持續(xù)性疲勞，患者由于極度疲勞使其工作生活和身體健康受到嚴(yán)重影響。CFS與高壓力的生活狀態(tài)有關(guān)，隨著人們生活節(jié)奏的加快、生活壓力的增加，CFS的發(fā)病率也越來(lái)越高，對(duì)生活質(zhì)量產(chǎn)生了嚴(yán)重的影響[1]。

后世醫(yī)家認(rèn)為慢性疲勞綜合征當(dāng)屬于虛勞、郁證等范疇。關(guān)于CFS的中醫(yī)學(xué)病機(jī)，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為以虛為主，虛實(shí)夾雜，與五臟有著緊密聯(lián)系，其中脾腎兩臟在疲勞發(fā)病中起著重要的作用，慢性疲勞綜合征的根本病機(jī)是脾腎虧虛，故其根本治法是補(bǔ)益脾腎。益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶是涼山彝族自治州第二人民醫(yī)院的院內(nèi)制劑，集調(diào)理預(yù)防和治療于一體，具有安養(yǎng)五臟、補(bǔ)益脾腎、潤(rùn)燥通便、降脂通脈功能。方中肉蓯蓉補(bǔ)腎陽(yáng)、益精血、潤(rùn)腸通便，黃精補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺、益腎，黃芪補(bǔ)氣養(yǎng)血，用于臟腑功能減退，調(diào)節(jié)失衡所致的虛煩失眠、虛秘、食欲不振、倦怠無(wú)力、體質(zhì)虛弱、反復(fù)感冒、高脂血癥等常見病、多發(fā)病，效果顯著。本實(shí)驗(yàn)以CFS小鼠為對(duì)象，探究益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶對(duì)CFS小鼠內(nèi)分泌功能的調(diào)節(jié)作用，為益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶的臨床應(yīng)用和產(chǎn)品開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶，涼山彝族自治州第二人民醫(yī)院，川藥制字Z20080266;生脈飲，云南白藥集團(tuán)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20044150。Mouse? ACTH ELISA KIT，貨號(hào)：xl-Em0004;Mouse ALD ELISA KIT，貨號(hào)：xlEm0007;Mouse CORT ELISA KIT，貨號(hào)：xlEm0551;Mouse DHEA ELISA KIT，貨號(hào)：xlEm1041;Mouse E2 ELISA KIT，貨號(hào)：xlEm0478;Mouse FSH ELISA KIT，貨號(hào)：xlEm0427;Mouse LH ELISA KIT，貨號(hào)：xlEm1065;Mouse PROG ELISA KIT，貨號(hào)：xlEm0477;Mouse T ELISA KIT，貨號(hào)：xlEm0476;Mouse T3 ELISA KIT，貨號(hào)：xlEm0468;Mouse T4 ELISA KIT;Mouse TSH ELISA KIT，貨號(hào)：xlEm0472;以上試劑盒規(guī)格：96孔/盒，abcam生產(chǎn)，鑫樂生物進(jìn)口分裝。

1.2 動(dòng)物 昆明種小鼠，雌雄各半，60只，體重為18～22g，購(gòu)于簡(jiǎn)陽(yáng)達(dá)碩動(dòng)物科技有限公司，合格證號(hào)：SCXK（川）2013-24。

1.3 儀器酶標(biāo)儀，型號(hào)，Multlskan? Mk3，賽默飛世爾儀器有限公司生產(chǎn)。

1.4 分組與造模 SPF級(jí)昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為6組：正常組、模型組、陽(yáng)性組、益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶高、中、低劑量組，每組10只。各組每天上、下午各強(qiáng)制游泳2h，水溫（25±1）℃，水深20cm，連續(xù)7d，同時(shí)各組每天灌胃給藥，陽(yáng)性組生脈飲口服液10mL/kg，益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶高、中、低劑量組（5.08g/kg、2.54g/kg、1.27g/kg），正常組和模型組給予等體積蒸餾水，連續(xù)灌胃7d。

1.5 指標(biāo)檢測(cè) 采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定ACTH、CORT、E2、FSH、PROG、T，采用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)ALD、DHEA、LH、T3、T4、TSH。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以（x±s）表示，先用方差分析，再用q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶對(duì)下丘腦-垂體-腎上腺軸的影響 與正常組相比，模型組ACTH、ALD、DHEA含量升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組相比，高劑量組小鼠血清中ACTH、ALD、DHEA濃度降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），可見通過(guò)益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶的治療之后，小鼠腎上腺激素水平有所改善。 見表1。

2.2 益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶對(duì)下丘腦-垂體-性腺軸的影響 與正常組相比，模型組血清FSH、LH水平上升，而E2水平下降，小鼠出現(xiàn)下丘腦-垂體-性腺軸紊亂情況，在服用益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶之后，與模型組相比，高劑量組小鼠血清中FSH、LH濃度降低，E2水平上升。E2的含量與FSH、LH含量負(fù)相關(guān)。 見表2。

2.3 益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶對(duì)下丘腦-垂體-甲狀腺軸的影響 與正常組相比，模型組小鼠血清T3濃度明顯降低，T4濃度明顯升高，兩組數(shù)據(jù)均具有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。與模型組相比，高劑量組小鼠血清中T3濃度升高，T4濃度明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 見表3。

3 討論

慢性疲勞是亞健康主要表現(xiàn)形式之一，建立CFS動(dòng)物模型是研究CFS的基礎(chǔ)[2]。強(qiáng)制游泳法是目前CFS單因素造模的主要方法之一，通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間游泳，造成軀體疲勞為主的動(dòng)物模型?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，長(zhǎng)期的慢性應(yīng)激是導(dǎo)致或誘發(fā)慢性疲勞的重要因素。該方法它既模擬了中醫(yī)有關(guān)疲勞的發(fā)病過(guò)程，也符合西醫(yī)所認(rèn)為的由慢性應(yīng)激導(dǎo)致疲勞的理論[3]。

目前對(duì)本病發(fā)病機(jī)制并不清楚，神經(jīng)內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)的功能紊亂被認(rèn)為是CFS的主要發(fā)病機(jī)理之一[4]，CFS患者除表現(xiàn)為慢性疲勞外，常伴隨有記憶力下降、注意力難以集中、睡眠障礙、頭痛、抑郁、焦慮等精神神經(jīng)癥狀，說(shuō)明中樞神經(jīng)系統(tǒng)與內(nèi)分泌系統(tǒng)的異常在的發(fā)生中扮演著重要的角色。神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)是相互協(xié)調(diào)、相互制約的兩大調(diào)節(jié)系統(tǒng)，具有調(diào)節(jié)機(jī)體生命活動(dòng)的功能。有研究者通過(guò)對(duì)患者的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)進(jìn)行綜合分析，發(fā)現(xiàn) CFS 患者整體下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸和下丘腦-垂體-甲狀腺軸以及各種調(diào)節(jié)機(jī)體代謝的激素水平失調(diào)共同導(dǎo)致機(jī)體處于一種低代謝狀態(tài)，這與患者疲勞的狀態(tài)密切相關(guān)[1，5-6]。甲狀腺是人體內(nèi)最大的分泌腺，它分泌的甲狀腺激素T3、T4有促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程等重要生理作用。T3中80%是由T4經(jīng)過(guò)脫碘作用轉(zhuǎn)變而來(lái)，這種脫碘過(guò)程是在5-脫碘酶作用下完成，當(dāng)腎臟受到損傷時(shí)，5-脫碘酶活性會(huì)下降，導(dǎo)致T3含量下降，T4含量上升[7]，有研究表明補(bǔ)腎中藥可促進(jìn)T4轉(zhuǎn)化為T3 [8]。腎藏精，《素問(wèn)》中“腎者主蟄，封藏之本，精之處也?！敝改I與生殖系統(tǒng)功能息息相關(guān)，在現(xiàn)代研究中，腎與下丘腦-垂體-靶腺軸腺靶激素水平息息相關(guān)，補(bǔ)腎藥通過(guò)補(bǔ)腎，從而正相調(diào)節(jié)內(nèi)分泌功能，腎精不足主要是下丘腦-垂體-性腺軸產(chǎn)生病理生理學(xué)改變，導(dǎo)致內(nèi)分泌紊亂[9]。

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，CFS模型小鼠ACTH、ALD含量升高，出現(xiàn)下丘腦-垂體-腎上腺功能亢進(jìn)現(xiàn)象。使用益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶治療后，治療組小鼠ACTH、ALD、DHEA水平下降，可緩解腎上腺功能亢進(jìn)，改善小鼠HPA軸功能。血清甲狀腺激素含量較治療前，T3水平有所上升，T4水平有所下降，可能是因?yàn)橐婺I補(bǔ)氣強(qiáng)身茶修復(fù)腎臟損傷，促進(jìn)T4轉(zhuǎn)化為T3，維持了血中TSH、T3、T4的動(dòng)態(tài)平衡，對(duì)下丘腦-垂體-甲狀腺軸系統(tǒng)起到穩(wěn)定和保護(hù)作用。血中TSH治療前后變化不大，可能是益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶直接作用于腎臟，改善了T3、T4的分泌，而未作用于TSH受體，對(duì)TSH的分泌影響不大。CFS模型小鼠內(nèi)分泌紊亂，導(dǎo)致E2含量下降，通過(guò)正反饋使FSH、LH含量升高，E2是雌激素中最主要活性最強(qiáng)的激素，是性腺功能啟動(dòng)的標(biāo)志，E2、FSH、LH含量的變化是腎虛證的有效指標(biāo)，這一結(jié)果說(shuō)明腎虛會(huì)導(dǎo)致內(nèi)分泌紊亂。益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶組E2水平有所升高，F(xiàn)SH、LH水平有所下降，出現(xiàn)E2抑制FSH、LH的現(xiàn)象，這可能是因?yàn)橐婺I補(bǔ)氣強(qiáng)身茶通過(guò)提高E2水平，抑制了FSH、LH的分泌，從而調(diào)整小鼠的內(nèi)分泌功能、緩解小鼠卵巢衰老。

綜上，益腎補(bǔ)氣強(qiáng)身茶能調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，增強(qiáng)下丘腦-垂體系統(tǒng)功能，治療慢性疲勞綜合征可能是通過(guò)改善應(yīng)激引起的下丘腦-垂體系統(tǒng)內(nèi)分泌紊亂，調(diào)節(jié)失調(diào)的激素水平。

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（收稿日期：2020-06-16 編輯：程鵬飛）

基金項(xiàng)目：涼山州科技局應(yīng)用技術(shù)研究開發(fā)項(xiàng)目（16YYJS0008）。

作者簡(jiǎn)介：童妍（1976-），女，漢族，博士，講師，研究方向?yàn)橹兴幩幚?。E-mail：tongyanmail@126.com

通信作者：羅倫才（1964-），男，漢族，本科，主任中藥師，研究方向?yàn)槊褡逅幬锏拈_發(fā)研究及臨床應(yīng)用。E-mail：1040710596@qq.com