魏寧頤，杜玲玉珊，楊 梅

(云南中醫(yī)學(xué)院，昆明 650500)

云南春燥證動(dòng)物模型的研制已經(jīng)開(kāi)展一段時(shí)間，課題組成員在采用人工氣候箱的辦法下，結(jié)合致病外因-氣候、內(nèi)因-飲食模擬云南春燥氣候環(huán)境并給予香燥食物制作小鼠模型，采用“以方測(cè)證”對(duì)比臨床常見(jiàn)癥狀的變化，確認(rèn)復(fù)制模型小鼠符合云南春燥證的臨床特征[1]。現(xiàn)課題組在已研制的模型小鼠上選取與云南春燥證候相關(guān)的生化指標(biāo)進(jìn)行測(cè)量，從而揭示云南春燥證生理變化的實(shí)質(zhì)，進(jìn)一步完善對(duì)云南春燥小鼠模型評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇。

1 氣道內(nèi)分泌型免疫球蛋白A(sIgA)

近年來(lái)，在外燥證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)[2-3]動(dòng)物模型氣道內(nèi)分泌型免疫球蛋白A(sIg A)等免疫分子及活性物質(zhì)的變化同外燥證動(dòng)物模型有密切的相關(guān)性，在一定程度上可以反映出外燥證動(dòng)物模型肺氣衛(wèi)外功能變化的規(guī)律。免疫球蛋白A(sIgA)主要存在于上呼吸黏膜，是上呼吸道防御病原微生物侵害極為重要的免疫球蛋白，在氣道內(nèi)對(duì)抗外來(lái)邪氣起著重要的作用，反映出了呼吸道的免疫防御情況。機(jī)體sIgA的水平可以提高呼吸道黏膜局部抗感染能力[4]， sIgA含量升高，則提示邪氣盛而正不虛，機(jī)體鼓動(dòng)正氣衛(wèi)外抗邪；sIg A含量降低，則提示正虛邪湊，燥邪傷肺，會(huì)損傷肺氣衛(wèi)外的功能[5]。選用該指標(biāo)可以直接反映出云南春燥證小鼠的呼吸道免疫防御情況。除了各類(lèi)燥證模型研究選擇該指標(biāo)作為特異性指標(biāo)外，國(guó)內(nèi)諸多對(duì)肺臟疾病的研究也將該指標(biāo)作為觀察指標(biāo)之一。

2 氣道內(nèi)分泌型免疫球蛋白G(IgG)

IgG對(duì)病原微生物具有一定的吞噬作用，是氣道內(nèi)廣譜、高效的抗體球蛋白，在疾病早期發(fā)揮防御功能。免疫球蛋白G水平增高可能與某些外來(lái)抗原或自身抗原有關(guān)，這些抗原刺激了淋巴系統(tǒng)，引起免疫球蛋白G合成。有研究發(fā)現(xiàn)，痰熱壅肺證、痰濕阻肺證、痰蒙神竅證等IgG均值逐漸偏低[6]。在臨床研究時(shí)期，總結(jié)出云南春燥證的主要證型有：肺衛(wèi)皮孔燥證、風(fēng)燥犯肺證、肝熱肺燥證、脾濕胃燥證這四證。由此可見(jiàn)，痰、濕等病因是構(gòu)成云南春燥證的主要因素，從一定層面影響了機(jī)體。故課題組借鑒其他研究辦法，選取免疫球蛋白G作為云南春燥證的觀察指標(biāo)之一。

3 肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白 A(SP-A) 、D(SP-D)

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，相關(guān)蛋白 A(SP-A)、相關(guān)蛋白 D(SP-D)是肺表面活性物質(zhì)的中重要成分，其主要分布于肺泡上皮內(nèi)側(cè)，由肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞和呼吸性細(xì)支氣管上皮Clara細(xì)胞合成及分泌，具有降低肺泡表面張力、維持肺泡穩(wěn)定性等作用，是肺部重要的天然免疫防御分子。兩者可以通過(guò)調(diào)理吞噬、結(jié)合過(guò)敏原與多種免疫分子互相作用來(lái)調(diào)節(jié)急慢性炎癥反應(yīng)[7-8]。由此把SP-A、SP-D對(duì)機(jī)體的功能看作是中醫(yī)中正氣的一種表達(dá)。正氣強(qiáng)則機(jī)體雖然感受春燥之邪氣，但是臨床表現(xiàn)會(huì)不同。SP-A的劑量用于調(diào)節(jié)炎細(xì)胞因子的合成與釋放，從而抑制炎癥反應(yīng)，但其是增強(qiáng)還是減弱炎性反應(yīng)則主要取決于病原菌、反應(yīng)細(xì)胞及細(xì)胞因子微環(huán)境。SP-D能抑制淋巴細(xì)胞的增殖，而且與肺泡巨噬細(xì)胞有高親和力，能增加它的活性，從而達(dá)到抑制過(guò)敏反應(yīng)和殺滅微生物的作用[9]。課題組試圖用表面活性蛋白指標(biāo)參數(shù)來(lái)解釋云南春燥證在發(fā)生過(guò)程中機(jī)體正氣抗邪的變化。如果取得相關(guān)規(guī)律性數(shù)據(jù)，將選擇其為云南春燥證特異性指標(biāo)。

4 氣道黏液中黏蛋白Muc5ac

研究表明，小鼠氣道黏液層中凝膠層和溶膠層的變化可以在一定程度上反映出吸入空氣對(duì)氣道津液代謝的影響規(guī)律。至今已發(fā)現(xiàn)19氣道黏蛋白，但只有Muc5ac和Muc56的基因產(chǎn)物構(gòu)成了正常人體氣道分泌物中的黏蛋白[10]。在受到外界因素刺激時(shí)，小鼠氣道表皮細(xì)胞 Muc5acmRNA表達(dá)豐富且定位于致敏源誘導(dǎo)的杯狀細(xì)胞[11]，故考慮采用Muc5ac的測(cè)定來(lái)檢測(cè)模型組小鼠中氣道發(fā)生的微觀改變，進(jìn)一步解釋云南春燥證機(jī)體病理的改變。

5 細(xì)胞膜選擇性水通道蛋白(AQPs)

水是氣道黏液的另一重要成分，其運(yùn)轉(zhuǎn)通過(guò)細(xì)胞膜選擇性水通道蛋白(AQPs)來(lái)進(jìn)行。研究顯示，AQP5基因剔除的小鼠，其氣道黏膜上下腺分泌液體的功能明顯減低，而且肺部感染病毒的小鼠在第7天、第14天均出現(xiàn)AQP5mRNA及蛋白表達(dá)下降。由此可見(jiàn)，氣道Muc5acmRNA及其蛋白的表達(dá)可反映出氣道黏液黏度的變化。而氣道AQP5 mRNA機(jī)器蛋白的表達(dá)可以提示氣道水分的變化，故本課題預(yù)觀察云南春燥證小鼠肺臟津液代謝的規(guī)律。

6 結(jié)語(yǔ)

結(jié)合云南春燥證的定義及在臨床研究中的主要證型肺衛(wèi)皮孔燥證、風(fēng)燥犯肺證、肝熱肺燥證、脾濕胃燥證四證，可見(jiàn)鼻腔干燥、干咳的臨床表現(xiàn)[12]。擬對(duì)云南春燥證動(dòng)物模型在呼吸系統(tǒng)選擇以上5種呼吸道相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，意在從另一個(gè)角度解釋云南春燥證小鼠機(jī)體免疫活性物、免疫功能、津液分布規(guī)律等病理改變情況。獲得相關(guān)數(shù)據(jù)后，對(duì)小鼠該指標(biāo)與對(duì)應(yīng)的中醫(yī)學(xué)癥狀科學(xué)進(jìn)行對(duì)比分析，解釋云南春燥證模型小鼠機(jī)體產(chǎn)生變化和中醫(yī)邪氣入侵、正氣抗邪等理論的關(guān)系，為云南春燥證模型特異性指標(biāo)的篩選奠定基礎(chǔ)。