焦 慧，唐龍俊，錢 凡

(安徽省建筑工程質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)站，安徽 合肥 230088 )

近年來(lái)，隨著國(guó)家大力實(shí)施農(nóng)村飲水安全工程，農(nóng)村自來(lái)水的普及率越來(lái)越高，農(nóng)村飲水安全發(fā)展逐步從大規(guī)模工程建設(shè)向提升服務(wù)質(zhì)量轉(zhuǎn)變，農(nóng)村飲水安全的主要矛盾已從“有水喝”向“喝好水”轉(zhuǎn)變，水質(zhì)安全已成為農(nóng)村飲水的重點(diǎn)監(jiān)管問(wèn)題[1- 2]。按照水利部《關(guān)于進(jìn)一步強(qiáng)化農(nóng)村飲水工程水質(zhì)凈化消毒和檢測(cè)工作的通知》要求，千噸萬(wàn)人以上水廠必須建立水質(zhì)化驗(yàn)室，配備檢驗(yàn)人員和檢驗(yàn)設(shè)備，同時(shí)建立水質(zhì)檢驗(yàn)制度，做好水質(zhì)監(jiān)測(cè)。對(duì)水廠出廠水要做到日檢九項(xiàng)，其中就包括菌落總數(shù)和總大腸菌群，可見農(nóng)村飲水中微生物參數(shù)的檢測(cè)是必不可少的。但相比較于理化項(xiàng)目，微生物檢測(cè)仍然是薄弱環(huán)節(jié)，主要在于微生物檢測(cè)參數(shù)少，質(zhì)控管理意識(shí)欠缺，硬件條件不足，人員素質(zhì)不高等原因造成的[3- 4]。為了保障農(nóng)村供水安全，確保檢驗(yàn)質(zhì)量，加強(qiáng)基層水廠微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理是非常有必要的。本文就基層水廠中微生物檢測(cè)的內(nèi)容和管理措施進(jìn)行分析和總結(jié)，并針對(duì)水廠開展微生物檢測(cè)提出了意見和建議。

1 目前農(nóng)村飲水中微生物檢測(cè)的主要內(nèi)容

根據(jù)GB/T 5750.12—2006 《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法 微生物指標(biāo)》中的規(guī)定，微生物指標(biāo)包括菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲[5]。但在實(shí)際工作中，賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲因?qū)嶒?yàn)操作復(fù)雜，需要特殊儀器設(shè)備、成本高、非指示菌等原因，一般飲用水水廠不檢。耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌是在總大腸菌群有檢出的條件下，才需進(jìn)行檢測(cè)分類，而菌落總數(shù)和總大腸菌群則是各個(gè)基層水廠飲用水必須的基礎(chǔ)檢測(cè)項(xiàng)目。

1.1 菌落總數(shù)的檢測(cè)

菌落總數(shù)檢測(cè)是農(nóng)村飲用水微生物檢驗(yàn)的基本內(nèi)容，是直接決定著飲用水能否可直接飲用的關(guān)鍵性指標(biāo)，對(duì)保障飲水安全起著至關(guān)重要的作用。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的菌落總數(shù)檢測(cè)方法為平皿計(jì)數(shù)法，即有氧條件下1mL水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)48h后所生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落總數(shù)。該方法操作簡(jiǎn)單，對(duì)設(shè)施環(huán)境有一定的要求，需要無(wú)菌條件，一般水廠有超凈工作臺(tái)即可滿足，但是該方法對(duì)于實(shí)驗(yàn)人員的操作水平和手法要求較高。此外要注意培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)典型菌落的計(jì)數(shù)，比如菌落蔓延、稀釋度配比等，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)不同的稀釋度有不同的菌落總數(shù)報(bào)告方法。

1.2 總大腸菌群的檢測(cè)

總大腸菌群是人和溫血?jiǎng)游锬c道內(nèi)的常見菌群，是作為水體是否有糞便污染的指示菌。GB/T 5750.12標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了總大腸菌群的3種檢驗(yàn)方法：多管發(fā)酵法、濾膜法和酶底物法。多管發(fā)酵法需經(jīng)過(guò)初發(fā)酵-培養(yǎng)-復(fù)發(fā)酵-驗(yàn)證的過(guò)程，濾膜法在檢出之后也需要經(jīng)過(guò)復(fù)發(fā)酵和革蘭氏染色驗(yàn)證。2種方法總體上說(shuō)，無(wú)需復(fù)雜設(shè)備，操作簡(jiǎn)單，成本低，但缺點(diǎn)是工作量大，需要時(shí)間長(zhǎng)，遇到批量任務(wù)時(shí)，操作繁重，準(zhǔn)備工作較多。而酶底物法克服了上述2種方法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、需要驗(yàn)證的缺點(diǎn)，具有操作簡(jiǎn)單，無(wú)需配制試劑，檢測(cè)時(shí)間短，準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)飲用水常規(guī)檢測(cè)而言，成本較大，特別是對(duì)于型水廠[6- 7]。水廠可根據(jù)實(shí)際任務(wù)需要選擇適合的方法，對(duì)于應(yīng)急監(jiān)測(cè)、成批量等任務(wù)可采用酶底物法，日常檢測(cè)可選擇多管發(fā)酵法和濾膜法。

2 微生物檢測(cè)的質(zhì)控管理措施

2.1 規(guī)范采樣

水樣采集是微生物檢測(cè)工作的起始，為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，嚴(yán)格規(guī)范采樣環(huán)節(jié)必不可少。農(nóng)村飲用水一般是采集水廠出水口或農(nóng)戶家中水龍頭出水，采樣時(shí)，應(yīng)注意水龍頭的選擇和消毒。選擇的水龍頭或出水口一定要干凈，無(wú)可見的其他異物或安置的濾嘴濾頭等。采樣時(shí)，應(yīng)先用酒精棉球灼燒或擦拭消毒水龍頭周圍，再把水龍頭完全打開，放水10～20s后再取水樣，對(duì)于剛出水渾濁的水樣可適當(dāng)延長(zhǎng)放水時(shí)間。微生物采樣一般多用無(wú)菌采樣袋或采樣瓶，均為一次性使用，不能重復(fù)利用；采樣時(shí)應(yīng)避免手和其他物品對(duì)袋口或瓶口的污染，取樣前可用酒精棉球擦拭手部消毒。同一時(shí)間采集幾類檢測(cè)指標(biāo)水樣時(shí)，應(yīng)優(yōu)先采集微生物用水樣，采完后在低溫避光條件下保存，4h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)[8]。整個(gè)采樣過(guò)程應(yīng)干凈利落，一次性采集完畢，注意無(wú)菌條件，避免交叉污染。

2.2 人員基本素質(zhì)

人員的能力和素質(zhì)是任何檢測(cè)工作首先需要考量的因素之一?；鶎铀畯S的微生物化驗(yàn)人員大多非本專業(yè)或從事本領(lǐng)域，缺乏對(duì)于微生物基礎(chǔ)知識(shí)的了解，應(yīng)在提高實(shí)踐操作能力的同時(shí)著重加強(qiáng)理論知識(shí)的講解，特別是對(duì)于無(wú)菌操作的認(rèn)識(shí)，這樣不僅有助于提高理論知識(shí)水平，還能在實(shí)踐中達(dá)到舉一反三的效果。由于微生物檢測(cè)大多依靠手工操作，不同的手勢(shì)、速度、幅度和順序都可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成很大的影響，因此，在日常工作中，應(yīng)細(xì)化作業(yè)指導(dǎo)書，編制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，通過(guò)加強(qiáng)人員比對(duì)、方法比對(duì)等手段來(lái)減少這些手工操作差異，提高檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化和準(zhǔn)確度[9]。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完善的教育培訓(xùn)機(jī)制，除了定期對(duì)崗位人員進(jìn)行技能培訓(xùn)外，還應(yīng)鼓勵(lì)檢驗(yàn)人員多參加各種技能比拼或能力考核，不同層級(jí)實(shí)驗(yàn)室之間可以多交流溝通經(jīng)驗(yàn)，不僅有助于檢測(cè)業(yè)務(wù)能力的提高，還能開闊眼界，帶動(dòng)整個(gè)檢測(cè)團(tuán)隊(duì)能力的提升。

2.3 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件

基層水廠實(shí)驗(yàn)室由于硬件設(shè)施相對(duì)缺乏，無(wú)菌室或潔凈室的等級(jí)一般不高，甚至有的水廠化驗(yàn)室只有超凈工作臺(tái)，而沒有無(wú)菌室。在這些情況下，更需要做好環(huán)境的清潔工作，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。首先，微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)環(huán)境要相對(duì)獨(dú)立，不要與化學(xué)實(shí)驗(yàn)室共用和混用，可以單獨(dú)做一個(gè)隔間；此外試驗(yàn)過(guò)程所需要的試驗(yàn)用水、試劑、玻璃器皿等也要單獨(dú)存放和使用，不能混淆[10]。對(duì)于潔凈室和超凈工作臺(tái)要做到：①人員進(jìn)入要穿戴潔凈的衣帽鞋和口罩，酒精擦手消毒；②每天檢測(cè)前要開啟紫外燈照射滅菌至少30min，同時(shí)開啟空氣凈化系統(tǒng)；③每次實(shí)驗(yàn)開始前和結(jié)束后，可用75%消毒酒精徹底對(duì)工作臺(tái)面、桌面和超凈工作臺(tái)窗戶等進(jìn)行擦拭消毒；④如長(zhǎng)時(shí)間未實(shí)驗(yàn)，也需要每周對(duì)潔凈室進(jìn)行清潔打掃，可用消毒液對(duì)室內(nèi)地面、墻面、臺(tái)面等進(jìn)行噴灑后擦拭，之后再開啟紫外燈滅菌30min。可在每周清潔消毒完畢后，無(wú)人條件下，于潔凈室和超凈工作臺(tái)均衡放置已傾注好營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿，打開皿蓋，靜置30min后取出在36±1℃條件下培養(yǎng)48h，觀察平皿內(nèi)的菌落數(shù)量來(lái)監(jiān)測(cè)潔凈室的環(huán)境條件，評(píng)估潔凈室的潔凈度[3，11]。水廠實(shí)驗(yàn)室可把微生物潔凈室和超凈工作臺(tái)的使用規(guī)范和注意事項(xiàng)編制成作業(yè)指導(dǎo)書，在日常工作中加強(qiáng)指導(dǎo)和培訓(xùn)，做到應(yīng)知應(yīng)會(huì)。潔凈室和工作臺(tái)的操作環(huán)境對(duì)微生物檢測(cè)的結(jié)果影響很大，因此，一定要養(yǎng)成良好習(xí)慣，遵循無(wú)菌操作，防止人員、環(huán)境對(duì)樣品的污染。

2.4 培養(yǎng)基的管理

培養(yǎng)基是微生物檢測(cè)過(guò)程中不可或缺的試驗(yàn)材料?，F(xiàn)在可以直接購(gòu)買商品化干粉培養(yǎng)基，買回來(lái)能直接用，省去單獨(dú)配制的時(shí)間，如營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、乳糖蛋白胨培養(yǎng)基、EC培養(yǎng)基等。購(gòu)買后一定要注意有效期、保存條件、使用方法、注意事項(xiàng)等，使用時(shí)直接按照方法要求配制分裝即可。對(duì)于培養(yǎng)基的驗(yàn)證，一般選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株或質(zhì)控菌株，但在基層水廠實(shí)驗(yàn)室，條件不足，可以選擇無(wú)菌空白實(shí)驗(yàn)和有菌實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)行。即把分裝好滅菌過(guò)的培養(yǎng)基倒一個(gè)空白培養(yǎng)皿，之后在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，無(wú)菌生長(zhǎng)才可以使用[12]。有菌實(shí)驗(yàn)是驗(yàn)證培養(yǎng)基的有效性，比如用乳糖蛋白胨培養(yǎng)基來(lái)檢測(cè)含有大腸菌群的水樣時(shí)，看它有沒有產(chǎn)酸產(chǎn)氣；伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基平板上有沒有特征菌落等。此外，平時(shí)使用時(shí)應(yīng)注意觀察，若發(fā)現(xiàn)配制后培養(yǎng)基色澤不對(duì)、不澄清透明、有異味等情況時(shí)應(yīng)立即停止使用，查找原因。

2.5 檢測(cè)過(guò)程的控制

因?yàn)槲⑸餀z測(cè)的特殊性，對(duì)于整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的質(zhì)量控制顯得尤為重要。對(duì)于采集長(zhǎng)距離的水質(zhì)樣品，可以使用運(yùn)輸空白來(lái)防止樣品運(yùn)輸、儲(chǔ)存過(guò)程中水樣受到污染。即以無(wú)微生物污染的水質(zhì)，如實(shí)驗(yàn)室純水作為對(duì)照，從實(shí)驗(yàn)室到采樣現(xiàn)場(chǎng)到又返回實(shí)驗(yàn)室，整個(gè)過(guò)程與樣品保持一致，回來(lái)后按照正常操作要求來(lái)檢測(cè)，觀察有無(wú)污染[13]。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，可以每次用培養(yǎng)基或生理鹽水多傾注一個(gè)空白培養(yǎng)皿，同等條件下培養(yǎng)，觀察結(jié)果。不僅檢驗(yàn)了培養(yǎng)基和生理鹽水的滅菌效果，也檢驗(yàn)了整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中是否有污染。除了陰性空白對(duì)照，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，也可以使用已知污染的水源水樣品與常規(guī)樣品一起進(jìn)行全過(guò)程的檢測(cè)，即有菌實(shí)驗(yàn)，這不僅可用于人員能力考核、培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)控，也是對(duì)儀器設(shè)備和環(huán)境設(shè)施的間接控制。微生物檢測(cè)最強(qiáng)調(diào)的是無(wú)菌環(huán)境，最怕的是污染，需要通過(guò)多種方式方法來(lái)管控實(shí)驗(yàn)流程，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。

3 實(shí)驗(yàn)室開展微生物檢測(cè)的建議

3.1 研究標(biāo)準(zhǔn)與方法，確保能開展

基層水廠開展微生物檢測(cè)，首先需要深入了解所開展的檢測(cè)項(xiàng)目和檢測(cè)方法。GB/T 5750.12—2006是生活飲用水微生物檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)仔細(xì)研讀標(biāo)準(zhǔn)，和現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室條件進(jìn)行對(duì)比，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)合理采購(gòu)儀器設(shè)備，并開展新方法的驗(yàn)證工作。如果在人員能力、實(shí)驗(yàn)室管理上有欠缺，可以先送出去培訓(xùn)，學(xué)習(xí)檢測(cè)知識(shí)和管理技巧?？傊?，一定要確保實(shí)驗(yàn)室條件、人員、環(huán)境、設(shè)備等方面都能夠滿足檢測(cè)需要，才能開展檢測(cè)工作。

3.2 重視人員培訓(xùn)，加強(qiáng)安全管理

除了在微生物檢測(cè)項(xiàng)目開展前，應(yīng)對(duì)人員進(jìn)行上崗基礎(chǔ)培訓(xùn)外，在平時(shí)應(yīng)該重視人員綜合能力的提高。可以采取“請(qǐng)進(jìn)來(lái)”和“送出去”相結(jié)合、以老帶新等方式，把培訓(xùn)工作融入到日常工作中。人員能力素質(zhì)的提升不是一朝一夕完成的，都是在實(shí)踐操作中不斷學(xué)習(xí)和總結(jié)的結(jié)果，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)多創(chuàng)造機(jī)會(huì)，多加強(qiáng)監(jiān)督，做好人員的培訓(xùn)工作。盡管基層飲用水的微生物指標(biāo)不多，感染風(fēng)險(xiǎn)不大，但也需要重視生物安全管理。在上崗前，應(yīng)先接受系統(tǒng)的生物安全教育，了解在采樣、使用和處置過(guò)程中可能對(duì)自己、其他人員以及外界環(huán)境產(chǎn)生的危害，特別是微生物固廢的處置[14]。微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全管理跟檢測(cè)項(xiàng)目的多少和難易無(wú)關(guān)，任何一個(gè)微生物檢測(cè)人員都需要有強(qiáng)烈的生物安全意識(shí)，執(zhí)行生物安全制度，落實(shí)好各項(xiàng)措施，維護(hù)自身安全。

3.3 落實(shí)質(zhì)控措施，提升檢測(cè)水平

大部分的基層水廠實(shí)驗(yàn)室因?yàn)闆]有實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定或?qū)嶒?yàn)室認(rèn)可的需求，因而未建立認(rèn)證認(rèn)可的管理體系，在微生物檢測(cè)方面的質(zhì)控管理意識(shí)明顯存在不足甚至是欠缺。微生物檢測(cè)的質(zhì)量控制并不是一項(xiàng)附加的、單獨(dú)的工作，可以貫穿于日常的準(zhǔn)備和檢測(cè)工作中。每一個(gè)規(guī)定的檢測(cè)步驟，每一個(gè)合理的實(shí)驗(yàn)流程，都需要嚴(yán)格來(lái)控制其發(fā)展方向和避免出現(xiàn)偏差，因此質(zhì)量控制不可或缺。依據(jù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量管理措施，可以快速地判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差的可能性，為獲得準(zhǔn)確結(jié)果提供實(shí)證。做好微生物檢測(cè)的質(zhì)量控制工作，有利于實(shí)驗(yàn)室生物安全的控制，也有利于人員素質(zhì)的提升，進(jìn)而提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，起到事半功倍的效果。