藍(lán)碧波 冉愛冬 沈少俊

【摘 要】目的：研究HPV（人乳頭狀病毒）E6/E7 mRNA與HPV DNA于宮頸癌早期篩查中的價(jià)值。方法：選擇本院2015年1月至2017年12月宮頸癌篩查的500例女性，觀察HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果：HPV E6/E7 mRNA陽(yáng)性率64.40%高于HPV DNA的49.80%（P<0.05）。聯(lián)合檢測(cè)的敏感性、特異性高于單一檢測(cè)（P<0.05）。結(jié)論：HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA在宮頸癌篩查中意義重大，但聯(lián)合檢測(cè)的敏感性及特異性更高。

【關(guān)鍵詞】早期篩查;宮頸癌;人乳頭狀病毒;宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查

文章編號(hào)：WHR2019032213

[Abstract] Objective：To study the value of HPV （human papillomavirus） E6/E7 mRNA and HPV DNA in the early screening of cervical cancer.Methods： 500 women checked from January 2015 to December 2017 in our hospital were selected. HPV E6/E7 mRNA and HPV DNA detection results were recorded. Results： The positive rate of HPV E6/E7 mRNA （64.40%） was higher than HPV DNA （49.80%） （P<0.05）; the detection sensitivity and specificity based on the combination examination was higher than single examination （P<0.05）.Conclusion： HPV E6/E7 mRNA and HPV DNA are of great importance in clinical screening. However， the diagnosis sensitivity and specificity based on the combination mode is higher.

[Key words]Early screening; Cervical cancer; Human papillomavirus; Thin-cytologic test

近年來宮頸癌發(fā)生率不僅逐年升高，其發(fā)生率約占女性惡性腫瘤的第二位，同時(shí)呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)，隨疾病進(jìn)展，癥狀加重，可能產(chǎn)生全身衰竭癥狀。臨床上大部分患者確診時(shí)已經(jīng)錯(cuò)過最佳治療時(shí)間，因此早期篩查具有重要意義[1]。報(bào)道表明高危型HPV感染是造成疾病的主要風(fēng)險(xiǎn)因素，侵犯上皮細(xì)胞，產(chǎn)生較多癌蛋白，與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)蛋白發(fā)生結(jié)合，使細(xì)胞周期紊亂，發(fā)生癌變[2]。目前臨床上宮頸病變通常利用病毒學(xué)及形態(tài)學(xué)進(jìn)行檢查，隨后HPV E6/E7 mRNA診斷也日漸受到重視。因此本院展開研究，選擇本院2015年1月至2017年12月宮頸癌篩查的500例女性作為研究對(duì)象，探討HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA運(yùn)用于宮頸癌早期篩查中的意義，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本院2015年1月至2017年12月宮頸癌篩查的500例女性，年齡30～50歲，平均年齡（41.47±1.03）歲?；颊呔嬖诋惓３鲅?、陰道分泌物異味及增多等癥狀，并經(jīng)過病理活檢：未明確意義非典型鱗狀細(xì)胞137例（A組），高度鱗狀上皮病變172例（B組），低度鱗狀上皮病變166例（C組），宮頸癌25例（D組）。本研究經(jīng)過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意;患者及家屬均簽署知情同意書，并自愿加入本次研究中;均經(jīng)過病理活檢確診;資料齊全，意識(shí)正常，能夠配合研究者;排除研究前存在盆腔放療或者宮頸物理治療史者;合并精神類疾病、文盲或者溝通障礙者;合并急性生殖道炎癥者。

1.2 方法

標(biāo)本采集：將新柏氏液基細(xì)胞學(xué)檢查專用刷置于患者宮頸管，旋轉(zhuǎn)5～8周，采集其宮頸口及宮頸管脫落的上皮細(xì)胞，將刷頭放于保存液瓶中待檢。

將標(biāo)本按照3000r/min離心，5min后去除上層清液，蒸餾水（2mL）清洗后離心，去除上層清液后放入裂解劑。溶解液、蛋白酶按照1∶800比例混合，于65℃下水浴30min獲得裂解劑，檢測(cè)HPV E6/E7 mRNA。NaOH（2.5mol/L）放入裂解液，于55℃水浴下30min，放入終止反應(yīng)液。釋放所需檢測(cè)的目的RNA。于-20℃下保存待檢。

HPV E6/E7 mRNA：利用兩種捕獲探針雜交捕獲目的RNA，固定在檢測(cè)板上，另將LEs、CEs靶探針雜交結(jié)合于目的RNA。預(yù)放大分子雜交結(jié)合兩個(gè)相近LEs、CEs靶探針，放大分子雜交結(jié)合預(yù)防大分子，連接堿性磷酸酶的標(biāo)記探針雜交結(jié)合放大分子，加入底物，結(jié)合堿性磷酸酶，出現(xiàn)化學(xué)發(fā)光信號(hào)。光強(qiáng)弱與目的RNA量呈正相關(guān)，利用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀計(jì)算目的RNA，按照拷貝數(shù)表示。

HPV DNA：遵照二代雜交捕獲法，從宮頸管中選擇標(biāo)本，置于試管中，按熒光法檢測(cè)不同HPV DNA分型。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組檢測(cè)結(jié)果，記錄四組HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA陽(yáng)性率，并觀察單一檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)的敏感性、特異性，探討HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA在宮頸癌篩查中的價(jià)值。

HPV E6/E7 mRNA轉(zhuǎn)錄數(shù)>4000陽(yáng)性;HPV DNA值≥1.0ng/L陽(yáng)性。病理活檢為金標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

選擇SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)系統(tǒng)，其中計(jì)量數(shù)據(jù)通過（±s）表達(dá)，利用t檢查，而計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)通過百分比表達(dá)，利用χ2檢查，當(dāng)P<0.05時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)結(jié)果

HPV E6/E7 mRNA陽(yáng)性率64.40%高于HPV DNA的49.80%（P<0.05）。見表1。

2.2 敏感性、特異性

聯(lián)合檢測(cè)的敏感性、特異性高于單一檢測(cè)（P<0.05）。見表2。

3 討論

近年來，隨著宮頸癌的發(fā)生率逐年升高，其死亡率也隨之增加，雖然發(fā)達(dá)國(guó)家宮頸癌篩查的防治措施不斷完善，其患病率出現(xiàn)減低趨勢(shì)，但大部分發(fā)展中國(guó)家的疾病發(fā)生率仍然呈現(xiàn)升高趨勢(shì)[3]。HPV屬于無包膜的雙鏈閉環(huán)DNA病毒，可廣泛存在于自然界。一旦宮頸上皮細(xì)胞受到感染后，病毒癌基因E6、7mRNA轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生E6、E7兩種癌蛋白。癌蛋白與宿主細(xì)胞中P53或者Rb蛋白發(fā)生結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)胞周期控制失衡，形成癌變[4-5]。早期基因E6、E7是HPV致癌中的研究重點(diǎn)，一旦其表達(dá)丟失抑制后可逐漸引發(fā)宮頸癌，其中E6可結(jié)合、殺滅腫瘤抑制因子P53，而E7可結(jié)合、降解抑制蛋白pRb，最終使細(xì)胞無限分裂，并不會(huì)造成凋亡，因此盡早診斷，及時(shí)給予治療至關(guān)重要，可提高患者生存率及生活質(zhì)量[6]。

既往HPV DNA檢測(cè)取得過一定診斷價(jià)值，但敏感性及特異性較低，因此臨床迫切需要敏感性及特異性較高的診斷方式。由于宮頸細(xì)胞病變的嚴(yán)重程度不僅與病毒類型及其負(fù)荷量有關(guān)，同時(shí)與病毒活躍程度息息相關(guān)[7]。而HPV E6/E7 mRNA可體現(xiàn)出E6/E7轉(zhuǎn)錄活動(dòng)程度，加上高危型HPV感染是造成宮頸癌的主要因素，因此定期檢查HPV E6/E7 mRNA具有重要作用，可評(píng)估宮頸癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)性，并成為高危人群及癌前病變篩查中的主要方式[8]。HPV E6/E7 mRNA以bDNA專利技術(shù)為主，是新型雜交信號(hào)放大核酸檢測(cè)技術(shù)，過程中不必反轉(zhuǎn)錄、PCR擴(kuò)增，簡(jiǎn)便快速[9]。其中bDNA屬于三明治結(jié)構(gòu)的核酸雜交方式，主要利用bDNA分子放大捕獲目標(biāo)DNA/RNA信號(hào)，但其并不具有呈指數(shù)增長(zhǎng)的擴(kuò)增過程，可明確放大倍數(shù)，穩(wěn)定性較高，同時(shí)可重復(fù)檢查，具有推廣及應(yīng)用的價(jià)值。本文作者對(duì)此展開研究，選擇本院2015年1月至2017年12月宮頸癌篩查的500例女性作為研究對(duì)象，分別給予HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA檢測(cè)，結(jié)果顯示：HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)陽(yáng)性率64.40%高于HPV DNA的49.80%（P<0.05）。聯(lián)合檢測(cè)的敏感性、特異性高于單一檢測(cè)（P<0.05），提示HPV E6/E7 mRNA陽(yáng)性率較高，但聯(lián)合檢測(cè)的敏感性及特異性更高。HPV DNA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HPV感染類型，而HPV E6/E7 mRNA可檢測(cè)HPV病毒癌基因E6/E7 mRNA的連續(xù)表達(dá)量，從而判定細(xì)胞中的病毒類型，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此E6 /E7 mRNA 檢測(cè)在宮頸病變的檢測(cè)與診斷中具有廣闊的應(yīng)用前景，甚至認(rèn)為它將會(huì)與細(xì)胞病理學(xué)一樣，成為宮頸癌篩查的輔助診斷指標(biāo)[10]。

綜上所述，兩種檢測(cè)方式均具有一定價(jià)值，聯(lián)合檢測(cè)后效果更好，提升敏感性及特異性。

參考文獻(xiàn)

[1] 李劍，曲芃芃.HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA檢測(cè)在宮頸癌早期篩查中的臨床價(jià)值[J].天津醫(yī)藥，2016，44（04）：466-469.

[2] 王娟，楊嵐，崔彬，等.HPV E6/E7 mRNA和HPVDNA作為宮頸癌篩查分子標(biāo)記物的比較研究[J].海南醫(yī)學(xué)，2016，27（21）：3458-3460，3461.

[3] 蒙志平，黎勇明，楊玲，等.HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值探討[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2016，20（11）：76-79.

[4] 劉甚佳，尹利榮，李洪林，等.高危型HPV感染宮頸病變中E6/E7 mRNA的表達(dá)水平[J].天津醫(yī)藥，2015，43（02）：186-188.

[5] Ye-li YAO，Qi-fang TIAN，Bei CHENG，等.宮頸脫落細(xì)胞人乳頭瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA檢測(cè)在HPV陽(yáng)性女性篩查中的應(yīng)用[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（英文版）（B輯：生物醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)），2017，18（03）：256-262.

[6] 張博，張穎，牛力春，等.液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPV mRNA檢測(cè)對(duì)宮頸癌的診斷價(jià)值[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2016，24（01）：118-122.

[7] 許育絢，崔永勝，耿建祥，等.968例宮頸細(xì)胞中人乳頭瘤病毒E6/E7 mRNA基因分析[J].中國(guó)婦幼保健，2015，30（04）：617-619.

[8] 劉集鴻，何曉清，張麗科，等.人乳頭瘤病毒E6/E7 mRNA檢測(cè)在宮頸癌篩查中的應(yīng)用[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，38（08）：532-536.

[9] 王小紅，錢藝美，繆鈴，等.高危型HPV E6/E7 mRNA與宮頸癌相關(guān)性分析[J].中華流行病學(xué)雜志，2016，37（07）：1003-1005.

[10]杜彩英，李芳.人乳頭瘤病毒DNA及E6/E7 mRNA檢測(cè)在宮頸病變?cè)\斷中的比較研究[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2015，23（04）：38-40.