林明星，余見棟，王國(guó)慶，吳志遠(yuǎn)2，沈鴦鴦

(1.平陽(yáng)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，浙江 平陽(yáng) 325400； 2.平陽(yáng)縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局)

豬繁殖障礙性疫病是一類疫病的統(tǒng)稱。引起豬繁殖障礙的疾病很多，目前普遍認(rèn)為能夠引起豬繁殖障礙的傳染性疫病主要有豬瘟(CSF)、豬繁殖與呼吸障礙綜合征(PRRS)、豬偽狂犬病(PR)、豬細(xì)小病毒病(PP)、豬乙型腦炎(JE)、豬圓環(huán)II型病毒病(PCV-2)、豬布魯氏菌病等[1-2]，而病毒性疫病所造成的危害更大，特別在自繁自養(yǎng)和繁育為目的的規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)，給養(yǎng)豬業(yè)造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重制約了養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。豬繁殖障礙性疫病，以母豬發(fā)情期延遲或不發(fā)情、返情、不孕；妊娠豬流產(chǎn)、早產(chǎn)，產(chǎn)死胎、木乃伊胎、畸形胎、無(wú)活力的弱仔，少仔；初生仔豬吃奶無(wú)力或不吃奶，先天衰弱，哺乳仔豬發(fā)病死亡，仔豬成活率低及公豬性欲低下、配種力下降、精液品質(zhì)下降﹑睪丸炎等為其主要特征[3-4]。近年來(lái)，隨著養(yǎng)豬業(yè)呈集約化、規(guī)模化的發(fā)展，疾病也越來(lái)越復(fù)雜，其中豬繁殖障礙性疫病的發(fā)生率逐年上升，已成為規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)最重要疾病之一，嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。對(duì)于平陽(yáng)縣豬場(chǎng)，以及新建豬場(chǎng)的免疫效果和疫病流行情況，尤其是隱性感染缺乏了解。本研究通過血清學(xué)的方法對(duì)平陽(yáng)縣生豬養(yǎng)殖場(chǎng)送檢的血清分別進(jìn)行了CSFV、PRRSV、PRV、PPV和JEV等5種豬繁殖障礙性疫病病毒的免疫抗體檢測(cè)和PRV野毒(gE)抗體檢測(cè)。通過免疫抗體水平檢測(cè)，掌握了豬群免疫狀態(tài)和豬場(chǎng)群體的抗體水平，科學(xué)評(píng)價(jià)免疫效果，優(yōu)化免疫程序，對(duì)達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)的豬場(chǎng)及時(shí)補(bǔ)針，保證疫苗免疫效果，保障和促進(jìn)生豬養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1血清來(lái)源 樣品采集自平陽(yáng)縣11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)生豬養(yǎng)殖場(chǎng)，分免疫和未免疫的兩類，養(yǎng)殖場(chǎng)按生豬存欄規(guī)模分為100頭以上規(guī)模場(chǎng)和100頭以下的散養(yǎng)場(chǎng)。樣品采樣后置于-20℃下保存?zhèn)溆眉皺z測(cè)。

1.1.2養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫情況

CSF：21-28日齡首免，60日齡二免，后備公母豬150-160日齡、180-190日齡各補(bǔ)免一次；經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬次年起每年普免3次；

PRRS：15日齡或45日齡首免，過60日齡后二免；后備母豬160-170日齡、200日齡各補(bǔ)免一次；經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬次年起每年普免3次；

PR：1日齡首免，75日齡二免，或45日齡首免，100日齡二免；后備母豬150-160日齡、180-190日齡各補(bǔ)免一次；經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬次年起每年普免3次；

PP和JE：母豬和種公豬3、9月普免，母豬產(chǎn)后15-21 d跟胎2免。

1.1.3主要試劑和儀器 豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：CPA.7G82)，購(gòu)自西班牙海博萊公司；豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：1CABB18113)，購(gòu)自韓國(guó)金諾；豬偽狂犬病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：107HS891)，購(gòu)自韓國(guó)金諾；豬細(xì)小病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：018017)，豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：018011)，均購(gòu)自深圳芬德生物科技有限公司。

主要儀器有酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、離心機(jī)等。

1.2方法

1.2.1血清處理 血液樣品自-20℃取出后先于室溫放置30 min后，再置4℃冰箱中30 min，室溫下4000 r/min離心5 min，收集上清液置一新EP管中，按照抗體檢測(cè)試劑盒說明，各取血清分別進(jìn)行豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒、豬偽狂犬病毒、豬細(xì)小病毒、豬乙型腦炎病毒5種病毒的ELISA抗體檢測(cè)。

1.2.2結(jié)果判斷 通過ELISA抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)5種病毒性疫病進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)如下：

1.2.2.1 豬瘟病毒 樣品PC值=(陰性對(duì)照血清OD450nm平均值-樣品OD450nm)/(陰性對(duì)照血清OD450nm平均值-陽(yáng)性對(duì)照血清OD450nm平均值)*100%；樣品PC值≥40%，判為陽(yáng)性；樣品PC值<40%，判為陰性。

1.2.2.2 豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒 結(jié)果用IRPC表示，以下是計(jì)算公式 IRPC=(OD450nm樣品-OD450nm陰性對(duì)照平均值)/(OD450nm陽(yáng)性對(duì)照平均值-OD450nm陰性對(duì)照平均值)*100，IRPC>20，判為陽(yáng)性；IRPC≤20，判為陰性。

1.2.2.3 豬偽狂犬病毒GB/GE 計(jì)算待檢樣品SN值，樣品SN值=樣品OD450nm/OD450nm陰性對(duì)照平均值，S/N值≤0.6，判為陽(yáng)性；S/N值>0.6，判為陰性。

1.2.2.4 豬細(xì)小和乙型腦炎病毒 于450 nm(用630 nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A值)，樣品A值≥0.38，為陽(yáng)性；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑；樣品A值<0.2為陰性。

2 結(jié) 果

對(duì)采集自平陽(yáng)縣11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)不同養(yǎng)殖規(guī)模、不同批次的血清樣本進(jìn)行了CSFV、PRRSV、PRV、PPV和JEV等5種繁殖障礙性疫病免疫抗體水平的檢測(cè)和PRV gE抗體的檢測(cè)，累計(jì)檢測(cè)2913樣次，結(jié)果見表1。

表1 平陽(yáng)縣生豬養(yǎng)殖場(chǎng)5種豬繁殖障礙性疫病的免疫抗體水平和PRV非抗體水平

由表1可知免疫群體中CSFV總體免疫抗體陽(yáng)性率為89.25%，其中規(guī)模豬場(chǎng)的免疫陽(yáng)性率達(dá)到91.98%，散養(yǎng)戶的免疫陽(yáng)性率僅達(dá)到55.74%；PRRSV總體免疫陽(yáng)性率為87.18%，其中規(guī)模豬場(chǎng)的免疫陽(yáng)性率達(dá)到93.37%，散養(yǎng)戶的免疫陽(yáng)性率僅達(dá)到22.95%；PRV gB、PPV和JEV規(guī)模場(chǎng)的免疫陽(yáng)性率分別為52.81%、84.01%和96.32%，散養(yǎng)戶均未免疫。野毒抗體檢測(cè)PRV gE的抗體陽(yáng)性率為12.83%。

3 結(jié)論與討論

對(duì)平陽(yáng)縣11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)生豬養(yǎng)殖場(chǎng)的CSFV、PRRSV、PRV、PPV和JEV等5種血清學(xué)免疫抗體檢測(cè)結(jié)果表明，免疫群體中CSFV總體免疫抗體陽(yáng)性率為89.25%，其中規(guī)模豬場(chǎng)的免疫陽(yáng)性率達(dá)到91.98%，散養(yǎng)戶的免疫陽(yáng)性率僅達(dá)到55.74%；PRRSV總體免疫陽(yáng)性率為87.18%，其中規(guī)模豬場(chǎng)的免疫陽(yáng)性率達(dá)到93.37%，散養(yǎng)戶的免疫陽(yáng)性率僅達(dá)到22.95%；PRV、PPV 和JEV規(guī)模場(chǎng)的免疫陽(yáng)性率分別為52.81%、84.01%和96.32%，散養(yǎng)戶均未免疫。從病種免疫結(jié)果分析，PRV免疫效果一般；從養(yǎng)殖規(guī)模來(lái)看，散養(yǎng)戶免疫效果較差或是未進(jìn)行免疫。生豬養(yǎng)殖場(chǎng)需制定更科學(xué)合理的免疫程序并實(shí)施，同時(shí)散養(yǎng)戶的免疫防控還需進(jìn)一步完善。

豬偽狂犬病(PR)是由偽狂犬病病毒(PRV) 引起的一種高度接觸性傳染病，廣泛存在于我國(guó)不同地區(qū)的豬場(chǎng)中。種豬主要表現(xiàn)為繁殖障礙，妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎；對(duì)仔豬危害最嚴(yán)重，死亡率可高達(dá)100%；成年豬一般為隱形感染，無(wú)臨床癥狀或癥狀輕微，一般產(chǎn)能下降[5]。PRV感染會(huì)引起機(jī)體免疫抑制，而且豬體可長(zhǎng)期帶毒和排毒，容易并發(fā)感染其他疾病。目前，我國(guó)主要以PRV gE基因缺失的疫苗用于預(yù)防PRV，這種疫苗的使用可以通過血清學(xué)方法區(qū)分免疫抗體和自然感染抗體[6]。配套使用 PRV gE抗體檢測(cè)試劑盒和PRV gB抗體檢測(cè)試劑盒能夠快速、方便、準(zhǔn)確檢測(cè)PR野毒抗體和免疫抗體，從而評(píng)估豬群PR野毒感染和免疫狀況。經(jīng)調(diào)查全縣豬偽狂犬病免疫抗體水平不高的原因如下：一是免疫成本高，免疫次數(shù)減少。種公豬和經(jīng)產(chǎn)母豬應(yīng)每年普免3次，每隔四個(gè)月一次；仔豬在出生時(shí)、35-45日齡、70-80日齡各免疫一次；后備母豬在配種前2、6周各免疫一次[7]。相較于豬瘟和豬繁殖與呼吸障礙綜合征是政府強(qiáng)制免疫、疫苗政府免費(fèi)提供給養(yǎng)殖戶，細(xì)小和乙腦種公豬、母豬3、9月普免兩次，頭胎和二胎母豬跟胎2次而言，偽狂犬的免疫成本較高，從全縣的免疫程序來(lái)看，仔豬只進(jìn)行了2次免疫，有減少免疫次數(shù)的現(xiàn)象。二是免疫方法不當(dāng)。不同的疫苗，使用的方法也不同。豬偽狂犬病疫苗有適合滴鼻的活疫苗和肌肉注射的滅活疫苗，在不同時(shí)期應(yīng)選擇合適的疫苗，同時(shí)在使用疫苗進(jìn)行免疫時(shí)方法要得當(dāng)。三是疫苗的質(zhì)量。不同的疫苗，有不同的儲(chǔ)存條件。這就要求養(yǎng)豬戶在購(gòu)買、運(yùn)輸、儲(chǔ)存和使用疫苗時(shí)，要嚴(yán)格按照說明書上的要求去做。

經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)全縣散養(yǎng)戶豬群免疫效果差或未免疫的原因有以下幾點(diǎn)：一是防疫意識(shí)不強(qiáng)。散養(yǎng)戶采取自繁自養(yǎng)模式，養(yǎng)殖戶主充當(dāng)獸醫(yī)員，防疫意識(shí)不強(qiáng)。二是免疫程序不科學(xué)。豬場(chǎng)未根據(jù)當(dāng)?shù)刎i病流行現(xiàn)狀和本場(chǎng)實(shí)際制定出合理的免疫程序，或是免疫程序不健全。三是疫苗接種操作規(guī)程不規(guī)范。豬群患病或是應(yīng)激狀態(tài)時(shí)進(jìn)行免疫，同時(shí)疫苗保存、接種操作不規(guī)范。四是環(huán)境衛(wèi)生差。散養(yǎng)戶養(yǎng)殖場(chǎng)地簡(jiǎn)陋，同時(shí)生產(chǎn)中產(chǎn)生的垃圾、豬糞、豬尿未進(jìn)行及時(shí)清理，影響豬群健康和免疫效果。

對(duì)平陽(yáng)縣生豬養(yǎng)殖場(chǎng)PRV gE血清學(xué)ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果表明，PRV gE的抗體陽(yáng)性率為12.83%，提示全縣生豬養(yǎng)殖場(chǎng)可能存在影響豬繁殖障礙的PRV的野毒感染。因此建議，生豬養(yǎng)殖場(chǎng)特別是規(guī)模種豬場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)PRV的綜合防控，可以從完善生物安全措施、選擇合適的疫苗、制定科學(xué)合理的免疫程序、做好引種檢疫、進(jìn)行定期的疫病監(jiān)測(cè)、淘汰繁殖性能低下的種豬等多方面著手，以防止養(yǎng)殖場(chǎng)PRV的感染及爆發(fā)流行，進(jìn)而避免或降低疫病帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失[8]。