文志平， 閻 萍, 高 尕， 張海濱， 才讓鬧日， 徐才讓

(1.甘肅省甘南州畜牧工作站，甘肅 合作 747000；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所,蘭州 730050；3.甘肅省牦牛繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730050)

應(yīng)用現(xiàn)代生殖技術(shù)加速品種改良及擴(kuò)大種群是目前國際上推動(dòng)畜牧業(yè)、尤其是養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展的重要途徑之一[1]。胚胎移植技術(shù)是畜牧業(yè)生產(chǎn)中繼人工授精后家畜繁殖技術(shù)的又一次重大改革[2]。據(jù)報(bào)道，采用該技術(shù)建立一個(gè)優(yōu)秀奶牛核心繁育群的速度比一般繁育技術(shù)要提高10倍以上[3]。隨著超數(shù)排卵、活體采卵、細(xì)胞培養(yǎng)、性別控制、體外受精、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、克隆技術(shù)、胚胎保存等與動(dòng)物繁殖與育種相關(guān)的現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展與完善，已經(jīng)能夠批量生產(chǎn)高產(chǎn)甚至具有不同特性的玻璃化冷凍細(xì)管胚胎。玻璃化冷凍法大大降低了胚胎生產(chǎn)的條件和成本，細(xì)管保存簡(jiǎn)化了胚胎移植的過程，使胚胎移植可以變得常規(guī)化。凍融胚胎的平均妊娠率已經(jīng)從原來40%～50%提高到了60%～70%，已經(jīng)達(dá)到了國際領(lǐng)先水平。盡管不同季節(jié)對(duì)西門塔爾牛胚胎移植的影響研究較多，但不同地域氣候條件差別很大。為了解在甘肅不同的季節(jié)(月份)對(duì)西門塔爾牛凍融胚胎移植的影響，2015年10月—2017年8月在定西和張掖地區(qū)西門塔爾牛凍融胚胎移植143枚，對(duì)其移植結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，為凍融胚胎移植在甘肅更好的推廣提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn) 試驗(yàn)于2015年10月—2017年8月在甘肅省高臺(tái)縣甘肅共裕高新農(nóng)牧科技開發(fā)有限公司、定西博峰肉牛改良繁育中心有限公司和隴西縣永興養(yǎng)殖有限公司開展。

1.1.2 試驗(yàn)地氣候概況 高臺(tái)縣的位于河西走廊中部，黑河中游下段，氣候?qū)儆诖箨懮衬珊敌蜌夂颍昃鶜鉁?.4 ℃?？h境內(nèi)有黑河等6條河，全縣有中小型水庫和塘壩26座，水資源充足。隴西縣位于甘肅省東南部，氣候?qū)儆跍貛Т箨懶约撅L(fēng)氣候，多屬溫和半干旱區(qū)，年平均氣溫8.1 ℃。

1.1.3 胚胎 由甘肅省家畜繁育中心提供。

1.1.4 藥品與器械 所用藥品有：①PG(氯前列醇鈉)(寧波第二激素廠制備,規(guī)格10×2 mL：0.2 mg)；②鹽酸利多卡因注射液(規(guī)格5×5 mL：0.1 g)；③酒精和高錳酸鉀。器械涉及：①卡式移植槍、軟硬外套(法國進(jìn)口)和液氮罐；②一次性注射器、溫度計(jì)4支、解凍盒、長(zhǎng)臂鑷子、止血鉗和指甲刀或者剪刀以及一些清洗和消毒用品。

1.2 方 法

根據(jù)凍融胚胎移植的需要對(duì)西門塔爾牛群進(jìn)行微調(diào)日糧和飼養(yǎng)管理，選擇適合移胚的受體母牛。在2016年3月—2017年8月在甘肅共裕高新農(nóng)牧科技開發(fā)有限公司(以下簡(jiǎn)稱共裕)的西門塔爾牛凍融胚胎移植6批，2016年的4月、5月、7月(2次)和9月(2次)，累計(jì)達(dá)100頭；博峰肉牛改良繁育中心有限公司(以下簡(jiǎn)稱博峰)2016年6月、8月(2次)西門塔爾牛凍融胚胎移植累計(jì)22頭；隴西縣永興養(yǎng)殖有限公司(以下簡(jiǎn)稱永興 )2016年1月、6月和10月累計(jì)移植西門塔爾牛凍融胚胎21頭，三廠總計(jì)143頭。

1.2.1 同期發(fā)情的方法 PGF2ɑⅠ和PGF2αⅡ。每頭一次注射2.5支(0.5 mg)氯前列醇。PGF2αⅡ二次注射間隔時(shí)間為11 d，在上午9:30之前完成注射，注射當(dāng)日為0 d，注射后2～4 d觀察和記錄發(fā)情情況。

1.2.2 胚胎移植 在發(fā)情后(發(fā)情當(dāng)日為0 d)的第6天下午檢查黃體質(zhì)量，黃體直徑在0.7 cm以上有明顯排卵點(diǎn)的受體牛確定為合格。第7天下午17：00開始移植。按照細(xì)管凍融胚胎移植的操作規(guī)范移植，本組試驗(yàn)的解凍溫度為35～36 ℃之間。在移植后60 d通過直腸檢查確定妊娠情況。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 用Excel軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步處理，采用數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0的單因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan氏法進(jìn)行差異顯著性分析P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同月份對(duì)西門塔爾牛凍融胚胎移植效果

由“共裕”凍融胚胎移植統(tǒng)計(jì)結(jié)果(表1)可以看出，5月中旬的這一組妊娠率最高(100%),其次是9月的兩批(83.33%),第三是7月中旬(80%)、4月中旬(61.11%)和7月底8月初的較低(60.89%)；5月中旬這一組流產(chǎn)率(0)最低，7月中旬(12.5%)比較低，4月中旬(31.82%)、7月底8月初的低(35.75%)和9月下旬相對(duì)較高，9月份中旬最高(50%)；5月中旬的單個(gè)活犢需胚胎數(shù)最低(1枚/頭)。經(jīng)檢驗(yàn)，組間妊娠率、流產(chǎn)率和單個(gè)活犢需胚胎數(shù)差異極顯著(P<0.01)。可能是4月相對(duì)較冷、7月下旬太熱而引起妊娠率相對(duì)較低，累計(jì)流產(chǎn)率高達(dá)30.98%。主要是因?yàn)椤罢{(diào)圈”引起的相互追趕、爬跨甚至摔倒引起的機(jī)械性流產(chǎn)；寒冷的冬天牛群喝冰水、水泥地面太光滑有冰滑倒摔傷也是引起流產(chǎn)的主要因素之一。由“博峰”(表2)的不同月份凍融胚胎移植統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，不同月份妊娠率、流產(chǎn)率差異顯著。由“永興”(表3)可以看出，2016年1月7日移植失敗，表明了氣溫太低和光照不足的情況下不易做胚胎移植。

表1 “共?！蔽鏖T塔爾牛凍融胚胎移植統(tǒng)計(jì)結(jié)果

注：同列數(shù)據(jù)上標(biāo)相同小寫字母表示兩者之間差異不顯著(P>0.05);標(biāo)有不同小寫字母表示兩者之間差異顯著(P<0.05)。下同。

表2 “博峰”西門塔爾牛凍融胚胎移植統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表3 “永興”西門塔爾牛凍融胚胎移植統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.2 不同季節(jié)對(duì)西門塔爾牛凍融胚胎移植效果

2016年立春、立夏、立秋、立冬的日期分別是2月4日、5月5日、8月7日、和11月7日；2016年6月21日是夏至，12月21日是冬，以此作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)3個(gè)地區(qū)的胚胎移植情況按季節(jié)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，相對(duì)宏觀地分析不同季節(jié)對(duì)西門塔爾牛凍融胚胎移植的影響，秋季妊娠率最高80%，結(jié)果見表4。

表4 不同季節(jié)凍融胚胎移植統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3 討 論

3.1 不同月份對(duì)凍融胚胎移植的影響

本試驗(yàn)結(jié)果在5月、6月(在夏至以前)、8月(在立秋以后)、9月、10月上旬、10月中旬適宜做胚胎移植與陳江凌等[4](試驗(yàn)地河南)的研究結(jié)果“1—2月和5—6月份是荷斯坦牛冷凍胚胎移植的最佳時(shí)間”有差異。河南大部分地區(qū)屬于溫帶季風(fēng)氣候，1—2月河南已經(jīng)回暖，處于大西北的甘肅氣溫還很低。

3.2 不同季節(jié)對(duì)凍融胚胎移的影響

本試驗(yàn)是在規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)草料相對(duì)穩(wěn)定的情況下進(jìn)行，季節(jié)對(duì)西門塔爾牛胚胎移植造成的影響不考慮因季節(jié)變化而造成的飼草料的變化，主要是因氣候的變化而引起。秋季妊娠率最高80%，其次夏季72.41%，春季61.11%，冬季最低25%。秋季是最佳的凍融胚胎移植的季節(jié)，這一結(jié)果與殷宗俊等[5]研究的結(jié)果一致；夏季妊娠率高于春季這一結(jié)果與蔡周山等[6]研究(涼州區(qū))春、秋季的受胎率(55.09%)較高夏季(52.69%)的結(jié)果有差異，2個(gè)試驗(yàn)都在甘肅的河西走廊氣候差異不大，造成這一差別的主要原因可能是在規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)與在農(nóng)戶條件下的飼養(yǎng)管理的差異造成，也可能與胚胎的品種(奶牛)與受體品種(西雜)是否一致有關(guān)。秋季的妊娠率(80%)高于夏季的(72.41%)，冬季的25%最低,與孫鳳俊等[7]研究(試驗(yàn)地點(diǎn)內(nèi)蒙古和北京)結(jié)果“春季受胎率最高(71%)，其次是冬季(63.2%)，最低是秋季(60.6%)”不一致，內(nèi)蒙古屬于溫帶大陸性氣候和溫帶季風(fēng)氣候，北京屬于溫帶季風(fēng)氣候，而本試驗(yàn)的主要基地高臺(tái)屬于大陸沙漠干旱型氣候，氣候差異是可能造成春季受胎率高于秋季的主要原因，冬天受胎率的差異可能是養(yǎng)殖場(chǎng)是否采取取暖措施有關(guān)；本試驗(yàn)結(jié)果與吳眩等[8]的研究結(jié)果“(試驗(yàn)地西安)春季胚胎移植受胎率最高(60%)，其次是冬季(52%)，最后是秋季(48%)”差別很大。西安的氣候暖溫帶半濕潤(rùn)大陸性季風(fēng)氣候。從以上討論可以看出，不同的省份氣候一般不屬于同一類型，甚至同一省的不同地區(qū)氣候差異也較大，同一季節(jié)(月份)的氣候條件在不同的地區(qū)差異較大，甚至同一個(gè)縣的不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)氣候條件也不同，相同的地方因廠區(qū)的圈舍的設(shè)計(jì)差異也會(huì)造成飼養(yǎng)場(chǎng)的微環(huán)境的差異，因而不能生搬硬套，應(yīng)根據(jù)不同飼養(yǎng)場(chǎng)的地理位置、飼草料來源和圈舍以及當(dāng)?shù)氐臍v史天氣預(yù)報(bào)和近期的天氣狀況、基礎(chǔ)母畜的存欄情況，以及牛犢的飼養(yǎng)條件做出全面詳細(xì)計(jì)劃。

4 結(jié) 論

在甘肅秋季是西門塔爾牛凍融胚胎移植最佳的季節(jié)，春天和夏天可以根據(jù)具體天氣情況適當(dāng)?shù)倪M(jìn)行胚胎移植，冬季不宜。具體來說，在5—6月(在夏至以前)、8月(在立秋以后)至10月中旬適宜做胚胎移植；3—4月、10月下旬至11月(立冬前)可以移植，但預(yù)產(chǎn)期在寒冷的冬天或者盛夏對(duì)母子均有不利影響，不建議移胚；7月、12月和1月，太熱或者太冷不適宜移植，2月春節(jié)前后，勞動(dòng)力短缺不便移植?？傊诘嗡杀暮拖年柨崾钪畷r(shí)不宜做同期發(fā)情、胚胎移植和產(chǎn)犢。流產(chǎn)率和單個(gè)活犢所需胚胎與后期的飼養(yǎng)管理有關(guān)。