宋慧云，段志豪，毛子翎，2，孫 思，2，王 軍，2，單體江，2*

(1. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與風(fēng)景園林學(xué)院，廣東省森林植物種質(zhì)創(chuàng)新與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510642；2. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，廣東省微生物信號(hào)與作物病害防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510642)

【研究意義】紅楠(MachilusthunbergiiSieb. et Zucc.)屬樟科((Lauraceae)潤(rùn)楠屬(Machilus)常綠闊葉喬木，在我國(guó)大多生長(zhǎng)在暖溫帶和亞熱帶地區(qū)[1]。紅楠具有很高的觀賞性，可用作木材和土壤保持樹(shù)種[2]。近年來(lái)隨著人類(lèi)活動(dòng)的增加以及火災(zāi)等影響，導(dǎo)致紅楠棲息地遭到嚴(yán)重破壞，紅楠數(shù)量日益銳減，瀕臨滅絕，目前被列為我國(guó)瀕危樹(shù)種[3]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】近年來(lái)，對(duì)于紅楠的研究主要集中于林間特征[4]、藥用價(jià)值[5-6]、遺傳多樣性[3]及紅楠生長(zhǎng)相關(guān)因素[7]等。Gao等[4]使用模型有效地模擬和預(yù)測(cè)紅楠的種內(nèi)和種間競(jìng)爭(zhēng)，結(jié)果表明當(dāng)紅楠的胸徑低于20 cm時(shí)，應(yīng)實(shí)現(xiàn)撫育管理，以提高黑松的生存及植被恢復(fù)。Su 等[8]從紅楠葉中分離出具有體外細(xì)胞毒性和抗霉菌真菌活性的精油，并確定了活性源化合物是β-Eudesmol。Watanabe等證實(shí)紅楠是異源二性的，由兩種類(lèi)型的原始兩性花組成[9]。Liu等[10]證實(shí)紅楠在低鹽脅迫條件下，地上生物量略有增加，而地下生物量，根長(zhǎng)和根表面積呈下降趨勢(shì)；在高濃度鹽脅迫下，地上生長(zhǎng)受到限制，而地下生長(zhǎng)則沒(méi)有受到顯著抑制。Li等[1]首次報(bào)道了紅楠葉枯和枝枯病，并確定致病菌為L(zhǎng)asiodiplodiagilanensis。但關(guān)于紅楠其他病害的研究報(bào)道較少。【本研究切入點(diǎn)】筆者在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，在紅楠生長(zhǎng)過(guò)程中確實(shí)存在其他病害的發(fā)生和危害，嚴(yán)重影響紅楠的正常生長(zhǎng)，但并未見(jiàn)該病害的任何報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究以發(fā)病嚴(yán)重的紅楠為研究對(duì)象，采集發(fā)病的組織材料，采用組織分離法對(duì)病原菌進(jìn)行分離，進(jìn)一步通過(guò)柯赫氏法則確定致病菌，并通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的方法鑒定病原菌，同時(shí)采用菌絲生長(zhǎng)速率法篩選出對(duì)病原菌具有良好抑制效果的殺菌劑，旨在為紅楠病害的識(shí)別和鑒定以及病害的綜合防治提供重要的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料 紅楠發(fā)病葉片和健康葉片于2016年12月采自廣州市天河區(qū)華南植物園。

1.1.2 供試殺菌劑 本試驗(yàn)所有供試殺菌劑均為殺菌劑原藥，包括98 %嘧菌酯、96.8 %苯醚甲環(huán)銼、97 %嘧霉胺、97 %吡唑醚菌酯、98 %溴菌腈、98 %福美雙、98.4 %多菌靈，均以上藥劑均購(gòu)自中國(guó)農(nóng)科院植保所廊坊農(nóng)藥廠。

1.1.3 儀器與試劑 SW-CJ-2G型超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司)；BX43F生物顯微鏡(奧林巴斯(中國(guó))有限公司)；MLS-3870三洋高壓滅菌鍋(松下電器產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社)；Exceed-C超純水機(jī)(成都唐氏康寧科技發(fā)展有限公司)； JA2003N分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；LRH-50型生化培養(yǎng)箱(上海恒科科技有限公司)。

葡萄糖(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)；瓊脂(健陽(yáng)生物科技有限公司)；升汞(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)；Ezup柱式真菌基因組DNA抽提試劑盒(上海生物工程有限公司)；引物ITS4和ITS5(上海生物工程有限公司)；95 %酒精和二甲基亞砜(DMSO)均為分析純(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 癥狀觀察和描述 使用放大鏡觀察發(fā)病的葉片，對(duì)病斑進(jìn)行描述記錄，如病斑的位置、大小、顏色、排列等，再對(duì)病害植株的生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行觀察和描述。

1.2.2 病原菌的分離和純化 病原菌的分離和純化參照陳哲等[11]和席中剛等[12]的方法，略有修改。首先將發(fā)病的葉片用水沖洗后置于超凈臺(tái)內(nèi)，剪取發(fā)病葉片病健交界處的葉片組織10份，大小約為3 mm× 3 mm，置于75 %酒精中浸泡20 s，再放入0.1 %升汞溶液中浸泡1 min左右，然后用無(wú)菌水沖洗3～4次，用滅菌的濾紙吸干表面的水分，接種于準(zhǔn)備好的PDA平板上。將接種好的PDA平板放入28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌絲后，用滅菌的牙簽挑取菌落邊緣生長(zhǎng)旺盛的菌絲接種到另一個(gè)PDA平板上。重復(fù)以上操作3次左右，獲得純化的菌株，然后將純化后的菌株接種于5 mL凍存管PDA斜面上，于4 ℃冰箱保存。

1.2.3 致病性測(cè)定 致病性的測(cè)定采用Xu 等[13]的方法。采集健康的紅楠葉片，用清水沖洗干凈，再用75 %酒精棉球擦拭葉片表面，而后用無(wú)菌水清洗3次。在每個(gè)葉片中脈兩側(cè)制造兩個(gè)針刺傷口，左右對(duì)稱(chēng)，將純化好的菌絲接種在葉片左邊的針刺傷口處，右邊的針刺傷口作為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。將接種好的葉片置于提前鋪好吸水紙并加入無(wú)菌水的培養(yǎng)皿中，用保鮮膜封住皿口，放入生化培養(yǎng)箱保濕培養(yǎng)。一段時(shí)間后，對(duì)接種葉片進(jìn)行觀察，記錄發(fā)病情況。然后從發(fā)病葉片的病健交界處進(jìn)行病原菌的再次分離鑒定，最終確定致病菌。

1.2.4 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定 用滅菌后的牙簽挑取PDA平板上生長(zhǎng)旺盛的菌落邊緣的菌絲，接種于另一個(gè)PDA平板中央，置于生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，然后用生物顯微鏡觀察菌落的菌絲、分生孢子梗、分生孢子等特征。然后參照《真菌鑒定手冊(cè)》以及《植物病原真菌學(xué)》對(duì)分離的病原菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定[14-15]。

1.2.5 病原菌的分子生物學(xué)鑒定 將純化后的菌株(在PDA生長(zhǎng)5 d)接種到PDB培養(yǎng)基中，28 ℃ 150 r/min振蕩培養(yǎng)5 d，四層紗布過(guò)濾收集菌絲，用液氮進(jìn)行充分研磨至粉末狀，而后采用真菌基因組DNA抽提試劑盒提取其DNA。使用真菌的通用引物ITS4和ITS5擴(kuò)增其ITS序列，反應(yīng)擴(kuò)增體系為：去離子水21 μl，2×TaqPCR MasterMix(含染料)25 μl，ITS4(10 μmol/L)1 μl，ITS5(10 μmol/L)1 μl，模板 DNA(10 ng/μl)2 μl。PCR擴(kuò)增程序： 94 ℃預(yù)變性3 min，然后94 ℃變性40 s，56 ℃退火40 s，72 ℃延伸1 min 20 s，共30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。

PCR產(chǎn)物送生工生物工程(上海)股份有限公司完成測(cè)序。將測(cè)序成功的ITS序列提交至GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得登錄號(hào)。通過(guò)在NCBI網(wǎng)站上進(jìn)行Blast，將測(cè)序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行同源性檢索，下載與其相似性較高的序列及其近似屬的序列，使用MAFTT version 7進(jìn)行序列處理后，采用最大似然法(Maximum likelihood)，用MEGA 7.0.26軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，其中Bootstrap method中重復(fù)抽樣次數(shù)(No. of bootstrap replication)設(shè)置為500，模式為General Time Reversible Model。

1.2.6 不同殺菌劑對(duì)病原菌室內(nèi)毒力測(cè)定 不同殺菌劑對(duì)紅楠炭疽病病原菌的室內(nèi)毒力測(cè)定采用菌絲生長(zhǎng)速率法[16]，分別稱(chēng)取不同的供試殺菌劑12 mg，加入0.3 mL的DMSO，待完全溶解后再加入0.7 mL的無(wú)菌水，然后用30 %的DMSO采用倍半稀釋法依次稀釋成7個(gè)不同的濃度。將配制好的不同濃度的殺菌劑1 mL加到 29 mL的PDA(滅菌，冷卻至60 ℃)中，充分混勻后倒入3個(gè)無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，每皿約10 mL，制成含藥培養(yǎng)基，濃度為6.0、3.0、1.5、0.75和0.375 mg/mL，溶劑為30 %的DMSO。將配制好的不同濃度的殺菌劑1 mL加到 29 mL的PDA(滅菌，冷卻至60 ℃)中，充分混勻后倒入3個(gè)無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，每皿約10 mL，制成含藥培養(yǎng)基，得到供試殺菌劑的終濃度分別為0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125和0.00625 mg/mL。用打孔器將培養(yǎng)5 d且生長(zhǎng)良好的待測(cè)菌邊緣打成直徑為7 mm的菌餅，菌餅朝下接種于含藥PDA平板上，以加入無(wú)菌水的PDA平板為空白對(duì)照，以30 %的DMSO陰性對(duì)照，98.4 %多菌靈為陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。28 ℃培養(yǎng)5 d左右，待空白對(duì)照的菌落生長(zhǎng)至培養(yǎng)皿面積的2/3時(shí)，采用十字交叉法測(cè)得不同處理的菌落直徑，計(jì)算抑菌率。

抑菌率 =

純生長(zhǎng)量=菌落平均直徑-菌餅直徑

計(jì)算出不同濃度下的抑菌率，選取其中的5個(gè)濃度，以殺菌劑濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，以抑菌率的生物統(tǒng)計(jì)機(jī)率值為縱坐標(biāo)，在Origin2018軟件中進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到毒力回歸方程和回歸系數(shù)，同時(shí)計(jì)算出EC50值，比較不同殺菌劑的相對(duì)抑制效果。

A:炭疽病癥狀; B:接種發(fā)病狀; C:菌落正面; D:菌落背面; E:菌絲形態(tài); F:分生孢子A: Symptom of anthracnose; B: Symptom of inoculation; C: Front side of colony; D: Reverse side of colony; E: Mycelial morphology; F: Conidia

圖2 基于ITS序列構(gòu)建的紅楠炭疽病菌Mtf-L1系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)系

2 結(jié)果與分析

2.1 紅楠炭疽病病害癥狀

通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)該病害主要危害紅楠葉片，發(fā)病初期，葉片表面出現(xiàn)棕黃色小點(diǎn)，不規(guī)則圓形。后期病斑逐漸擴(kuò)大，中間壞死呈灰褐色，邊緣顏色較深，呈紅褐色(圖1A)。發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，病斑布滿(mǎn)整個(gè)葉片，導(dǎo)致葉片變黃脫落。

2.2 紅楠炭疽病病原菌的分離和致病性測(cè)定

對(duì)紅楠的發(fā)病葉片進(jìn)行病原分離鑒定，得到3種不同的真菌菌株Mtf-L1、Mtf-L2和Mtf-L3。用針刺法將3種菌株分別接到離體健康的紅楠葉片。接種3 d之后，接種Mtf-L1菌株的葉片開(kāi)始發(fā)病，葉片接種點(diǎn)出現(xiàn)黑色的病斑并逐漸擴(kuò)大，癥狀與自然發(fā)病癥狀類(lèi)似(圖1B左側(cè))，并從發(fā)病的病斑上能再次分離可得到與接種菌株形態(tài)一致的菌落，對(duì)照組織未發(fā)病(圖1B右側(cè))；而接種Mtf-L2和Mtf-L3菌株的葉片未發(fā)病。結(jié)果表明Mtf-L1是紅楠炭疽病的病原菌。其菌落形態(tài)如圖1C所示。

2.3 紅楠炭疽病病原菌的鑒定

PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落為圓形(圖1C)，白色，邊緣整齊，氣生菌絲發(fā)達(dá)，排列整齊，毛絨狀，菌落背面中部呈淺黃色(圖1D)。培養(yǎng)7 d后，菌落長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)基(圖1C，D)。在顯微鏡下可觀察到菌絲有隔(圖1E)，分生孢子無(wú)色，單孢，長(zhǎng)橢圓形或圓柱形，兩端鈍圓 ，大小平均為11.95 μm×4.03 μm(圖1F)。根據(jù)以上形態(tài)特征，將該病原菌初步鑒定為炭疽病菌。

采用真菌通用引物ITS4和ITS5進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得大小為602 bp的序列，將該序列提交至Genebank，獲得登錄號(hào)為MH397501。在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行同源性比對(duì)，通過(guò)MEGA 7.0.26軟件采用最大似然法(Maximum likelihood)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖2)。從圖2可以看出，該病原菌被聚類(lèi)在炭疽菌屬，但無(wú)法確定到種，因此最終確定引起紅楠葉部病害的病原菌為Colletotrichumsp.，屬于半知菌類(lèi)，黑盤(pán)孢目，炭疽菌屬。

2.4 不同殺菌劑對(duì)紅楠炭疽病病原菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

不同供試藥劑對(duì)紅楠炭疽病菌的抑制效果見(jiàn)圖3和表1。從表1中可以看出，所有供試殺菌劑對(duì)紅楠甲炭疽病菌均表現(xiàn)出一定的抑制作用，但不同殺菌劑之間存在明顯的差異。陽(yáng)性對(duì)照98.4 %多菌靈的抑菌效果最好，在供試濃度下對(duì)紅楠炭疽病菌的抑制率均為100 %。其次是97 %吡唑醚菌酯，EC50值為(19.74 ± 1.79)μg/mL，98 %的福美雙也表現(xiàn)出較好的抑菌活性，EC50值為(55.92 ± 5.34)μg/mL。98.4 %的多菌靈在不同濃度下的抑制率均達(dá)100 %，97 %吡唑醚菌酯和98 %的福美雙對(duì)紅楠炭疽病菌的EC50值均小于0.1 μg/mL，說(shuō)明紅楠炭疽病菌對(duì)這幾種藥劑非常敏感；98 %嘧菌酯、98 %溴菌腈、96.8 %苯醚甲環(huán)銼和97 %嘧霉胺的EC50值均為(418.64 ± 81.79)、(353.06± 21.45)、(209.08 ± 14.97)、(329.07 ± 21.10)μg/mL，在0.1～1 μg/mL，即紅楠炭疽病菌對(duì)這幾種藥劑較敏感。該結(jié)果表明，98.4 %多菌靈、97 %吡唑醚菌酯和98 %的福美雙在理論上是化學(xué)防治紅楠炭疽病菌較好的殺菌劑。7種殺菌劑對(duì)膠孢炭疽菌的抑制效果由大到小依次為98.4 %多菌靈>97 %吡唑醚菌酯>98 %福美雙>96.8 %苯醚甲環(huán)銼>97 %嘧霉胺>98 %溴菌腈>98 %嘧菌酯。

表1 殺菌劑對(duì)紅楠炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果

注：EC50值為不同殺菌劑中有效成分的抑制中濃度。

a: 98 %嘧菌酯; b:98 %溴菌腈; c:96.8 %苯醚甲環(huán)銼; d:97 %嘧霉胺;e:97 %吡唑醚菌酯; f:98 %福美雙; 濃度1～5分別從大依次減小。a: 98 %Azoxystrobin; b: 98 %Bromoacetonitrile; c: 96.8 %Diphenyl ether ring; d: 97 %Pyrimethanil; e: 97 % Pyraclostrobin; f: 98 %Fumeishuang; concentration of 1-5 decrease in order from large

3 討 論

形態(tài)學(xué)鑒定和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果表明，紅楠炭疽病的致病為Colletotrichumsp.。炭疽菌屬(Colletotrichum)病原菌廣泛分布于熱帶、亞熱帶，該類(lèi)真菌是全球性的植物病原菌，寄主繁多，可引發(fā)各種林木和農(nóng)作物的炭疽病，造成葉、枝、花、果腐爛等嚴(yán)重癥狀，影響林木及農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[17-18]。Chen等[19]研究發(fā)現(xiàn)紅富士蘋(píng)果炭疽病菌為Colletotrichumgloeosporioides，炭疽病的發(fā)生嚴(yán)重降低了紅富士蘋(píng)果的質(zhì)量和產(chǎn)量，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。炭疽病是世界范圍內(nèi)辣椒的毀滅性疾病，其致病菌為C.gloeosporioides和C.truncatum，兩者都會(huì)導(dǎo)致辣椒大量減產(chǎn)[20]。最新的研究表明該屬真菌還可侵染中國(guó)的香蕉[21]、獼猴桃[22]和Basellaalba[23]，意大利的FeijoasellowianaBerg[24]，墨西哥的Crataegusgracilior[25]以及格魯吉亞的芹菜[26]等。本研究確定紅楠是炭疽病菌的新寄主，通過(guò)觀察致病菌的顯微形態(tài)和基于ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)確定致病菌屬于炭疽菌屬。由于炭疽菌屬種類(lèi)繁多，有些物種缺乏模式標(biāo)本，使得菌種的鑒定愈發(fā)困難。目前，采用多基因進(jìn)行系統(tǒng)學(xué)分析已成為炭疽菌物種鑒定的趨勢(shì)，通過(guò)ITS、ACT、Apn2、Mat1 /Apn2、GAPDH、CHS-1、TUB2、CAL和 ApMAT 等的基因序列對(duì)炭疽菌進(jìn)行鑒定[27-30]，這也是本研究努力的方向及未來(lái)研究的重要課題。

為了篩選抑制紅楠炭疽病菌生長(zhǎng)的殺菌劑，為紅楠炭疽病的防治提供依據(jù)，本研究測(cè)定了8種殺菌劑對(duì)紅楠炭疽病菌的室內(nèi)毒力，篩選出福美雙、吡唑醚菌酯和多菌靈3種有效抑制紅楠疽病菌的殺菌劑。福美雙屬于二硫代氨基甲酸鹽類(lèi)農(nóng)藥，具有低毒廣譜殺菌作用，廣泛用于水果與蔬菜的病蟲(chóng)害，馬珂[31]研究發(fā)現(xiàn)福美雙可有效抑制茄子褐紋病菌(Phomopsisvexans)，鄧之亮等[32]研究發(fā)現(xiàn)福美雙可有效防治棉花立枯絲核病菌(Rhizoctoniasolani)。但是，福美雙的殘留不可忽視，其毒性逐漸引起研究人員的重視，相關(guān)研究表明福美雙會(huì)造成斑馬魚(yú)早起原始生殖細(xì)胞移動(dòng)分布的延遲，以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，也會(huì)造成肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良軟骨細(xì)胞凋亡[33-34]。何煉等[35]和王敏等[36]研究發(fā)現(xiàn)福美雙在川麥冬和豆芽根部的殘留量正常，所以在病害防治中應(yīng)合理使用福美雙，在正常殘留范圍內(nèi)達(dá)到最好的防治效果。吡唑醚菌酯應(yīng)用范圍較廣，可防治多種真菌性病害(如子囊菌、擔(dān)子菌、半知菌和卵菌的真菌引起的病害)，同時(shí)具有內(nèi)吸傳導(dǎo)性和耐雨水沖刷性能，持效期較長(zhǎng)[37]。多菌靈作為商品化的殺菌劑，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，高效低毒，對(duì)半知菌、子囊菌引起的多種真菌性病害有較好的防治效果，主要是通過(guò)干擾脫氧核糖核酸(DNA) 的合成，特別是阻礙核苷的生成過(guò)程起到殺菌作用[38]。近些年，研究人員陸續(xù)使用多種殺菌劑對(duì)炭疽菌進(jìn)行內(nèi)毒力測(cè)定，其中吡唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑?qū)椞烤揖休^好的抑制作用[39]；吡唑醚菌酯對(duì)辣椒炭疽菌有較好的抑制作用[40]，以上結(jié)果與本試驗(yàn)的結(jié)果類(lèi)似。本試驗(yàn)采用菌絲生長(zhǎng)速率法進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，它代表了殺菌劑與病原菌的菌絲直接接觸時(shí)產(chǎn)生的效果，但實(shí)際的抑制效果的不僅與此因素有關(guān)，還與孢子的產(chǎn)生、萌發(fā)等及殺菌劑的特效性有關(guān)；另外寄主植物的生長(zhǎng)環(huán)境，如溫度、濕度等因素，也是影響抑制效果的一個(gè)重要因素[41]。因此在后續(xù)研究中，可將福美雙、吡唑醚菌酯和多菌靈，進(jìn)行林間藥效進(jìn)一步測(cè)定，同時(shí)測(cè)定福美雙的殘留量，為植物病害防治提供科學(xué)依據(jù)。

4 結(jié) 論

采用組織塊分離法分離引起紅楠炭疽病的病原菌，并通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的方法以及病害癥狀觀察和柯赫氏法則，確定紅楠炭疽病的致病菌是Colletotrichumsp.，本論文是首次關(guān)于紅楠炭疽病的報(bào)道。同時(shí)室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，98.4 %多菌靈、97 %吡唑醚菌酯和98 %福美雙對(duì)紅楠炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用最強(qiáng)，可作為防治紅楠炭疽病的化學(xué)殺菌劑，本論文也是首次關(guān)于不同殺菌劑對(duì)紅楠炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定的報(bào)道。