林潮金，秦愛(ài)萍，李松沛，霍 然，鄧 賽，傅小媚，向 楊，余細(xì)勇

(廣州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院、廣東省分子靶標(biāo)與臨床藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室藥理學(xué)組，廣東 廣州 511436)

心肌纖維化(myocardial fibrosis，MF)主要表現(xiàn)為心肌組織中膠原纖維的過(guò)量沉積，膠原濃度以及膠原容積分?jǐn)?shù)增加，各種類型的膠原比例失調(diào)而使心臟僵硬、心功能降低[1]。MF與高血壓、糖尿病、風(fēng)濕性心臟病、肥厚性心肌病等多種心血管疾病密切相關(guān)，是心室重構(gòu)的重要原因，最終演變?yōu)樾牧λソ遊2]。近十年來(lái)，干細(xì)胞在臨床前或早期臨床試驗(yàn)中主要顯示出對(duì)損傷心臟的修復(fù)功能，其在心臟疾病中的潛在治療效果備受關(guān)注[3]。但是，心臟干細(xì)胞及其微環(huán)境(Niche)調(diào)控在心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展與防治中的作用尚未清楚。傳統(tǒng)的研究認(rèn)為，MF是由于成纖維細(xì)胞過(guò)度增殖，使細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)蛋白大量沉積[4]。最近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，心肌血管周圍的Gli1+間充質(zhì)干細(xì)胞樣的細(xì)胞在損傷情況下大量增殖并轉(zhuǎn)化為活化狀態(tài)的成纖維細(xì)胞[5]，但對(duì)于這種轉(zhuǎn)化是否存在旁分泌信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)控尚不清楚。外泌體被認(rèn)為是細(xì)胞旁分泌的重要介質(zhì)，它所攜帶的內(nèi)容物(蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、mRNA、非編碼RNA)對(duì)多種生物過(guò)程起到關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用[6,7]。盡管心肌細(xì)胞(cardiomyocytes，CMs)并非分泌型細(xì)胞，但經(jīng)誘導(dǎo)后也可產(chǎn)生大量的外泌體。已有文獻(xiàn)提出，CMs分泌的外泌體通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞間通訊，對(duì)心臟疾病起到促進(jìn)作用[8]。有研究表明，受損CMs衍生的外泌體加速了梗死心臟移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的損傷[9]。那么，在受損情況下，心臟固有的Gli1+細(xì)胞纖維化是否受CMs衍生外泌體的影響，尚未清楚。因此，本研究主要探究缺氧CMs衍生的外泌體及其發(fā)揮關(guān)鍵作用的miR-223對(duì)Gli1+細(xì)胞纖維化的調(diào)節(jié)作用。

1 材料

1.1 試劑MSC qualified FBS (Life Technologies)；α-MEM(GlutaMAX，Life Technologies)；鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、鼠表皮生長(zhǎng)因子(Peprotech)；CD140a磁珠分選試劑盒、分選緩沖液(MiltenyiBiotec)；Foxp3 /轉(zhuǎn)錄因子染色緩沖液試劑盒(Invitrogen)；Exo-Quick提取試劑盒(System Bioscience)；抗小鼠CD105-PE、CD29-PE、CD31-FITC、CD34-AF647、CD45-PerCP-Cy5.5(BD Biosciences)；抗小鼠Gli1(Novus)；抗兔IgG-PE(eBioscience)；PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kits(Sigma Aldrich)；miRcute miRNA Isolation Kit(TIANGEN)；Mir-XTMmiRNA First-Strand Synthesis Kit(TaKaRa)；Lipo3000(Invitrogen)。

1.2 儀器Amnis?Image StreamX MarkII流式細(xì)胞儀(德國(guó)Merck公司)；Amersham Imager 600成像儀(美國(guó)GE公司)；LightCycler? 480 Ⅱ?qū)崟r(shí)熒光定量PCR儀(瑞士Roche公司)；Confocal激光共聚焦顯微鏡(德國(guó)Zeiss公司)；普通熒光顯微鏡(德國(guó)Leica公司)；NanosightNS500 納米粒子分析儀(英國(guó)Malveron公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8～9周齡的C57BL/6J小鼠，♂，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證為SCXK(粵)2013-0034，使用許可證為SCXK(粵)2016-0168。

2 方法

2.1 Gli1+細(xì)胞的分離與鑒定取♂成年C57BL/6J小鼠，用無(wú)菌剪打開(kāi)胸腔取出心臟，然后置于10 mL D-PBS中清洗3遍，去除心臟里的血跡，再將心臟剪成1 mm3的小塊，加入5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的Collagen II混勻，37 ℃水浴反復(fù)搖晃多次，消化并用吸管吹打，直至消化完全，經(jīng)過(guò)濾后，濾液用300×g離心5 min使細(xì)胞沉淀，加入1 mL分選緩沖液混勻，進(jìn)行磁珠分選，按照MiltenyiBiotec公司試劑盒說(shuō)明書(shū)操作(Cat.no.130-101-502)，細(xì)胞用含有體積分?jǐn)?shù)為0.1的胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)基(也稱為α-MEM完全培養(yǎng)基)培養(yǎng)。

細(xì)胞表面抗原的染色：平均取106個(gè)細(xì)胞置于流式管中，按照1 ∶100的稀釋比例，分別加入1 μL抗小鼠抗體CD105-PE、CD29-PE、CD31-FITC、CD34-AF647和CD45-PerCP-Cy5.5混勻，然后室溫避光孵育0.5 h，用PBS洗1遍，300×g離心5 min，棄上清，每管加入50 μL體積分?jǐn)?shù)為0.04的多聚甲醛混勻，轉(zhuǎn)移到1.5 mL的離心管中，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞內(nèi)抗原Gli1的染色：將細(xì)胞進(jìn)行固定、透化30 min后，用含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的BSA封閉15 min(可選)，再加入Gli1一抗(1 ∶1 000)混勻，置于室溫孵育30 min，用1 mL PBS洗2次，300×g離心5 min，棄上清，然后加入PE(1 ∶1 000)標(biāo)記的熒光二抗混勻，再室溫避光孵育30 min，用1 mL PBS洗2次，300×g離心5 min，棄上清，加入50 μL體積分?jǐn)?shù)為0.04的多聚甲醛混勻，轉(zhuǎn)移至1.5 mL的離心管中，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

2.2 SD乳鼠心肌細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定1～3 d SD乳鼠用體積分?jǐn)?shù)為0.75的酒精消毒后，放入超凈臺(tái)，用無(wú)菌直剪打開(kāi)胸腔，輕輕用力迅速擠壓乳鼠背部，暴露心臟，用彎鑷夾取心臟，放入裝有適量預(yù)冷的HBSS液中晃洗3次，再將心臟放入培養(yǎng)皿，去除心耳以及動(dòng)脈，用彎剪剪成糊狀，加入10 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%胰酶消化13 h，加入2 mL FBS替代等量的原消化液來(lái)停止消化，再加入Collagen II使其最終質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%，37 ℃水浴反復(fù)晃動(dòng)消化15 min，吸管吹打幾次，用220目篩網(wǎng)過(guò)濾到等體積的L15培養(yǎng)基中，300×g離心5 min，去上清，加入高糖DMEM完全培養(yǎng)基制備成單細(xì)胞懸液，置于培養(yǎng)皿中差速貼壁0.5 h，吸上清300×g離心5 min，再加入含有20 mmol·L-15-溴脫氧尿嘧啶核苷的高糖DMEM完全培養(yǎng)基吹打均勻進(jìn)行培養(yǎng)。

心肌細(xì)胞的鑒定：將原代貼壁生長(zhǎng)且搏動(dòng)的心肌細(xì)胞用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.25%的胰酶消化，傳至24孔板中，待細(xì)胞貼壁后，去掉培養(yǎng)基，用PBS洗2遍，然后將細(xì)胞固定、透化0.5 h，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的BSA封閉15 min，再加入心肌肌鈣蛋白T(cardiac troponin T，cTnT)和α-輔肌動(dòng)蛋白(α-Actinin)一抗(1 ∶50稀釋)，4 ℃孵育過(guò)夜，用PBS清洗2遍，加入熒光二抗(1 ∶1 000稀釋)，置于室溫避光孵育0.5 h，用PBS洗2遍，加入DAPI(1 ∶500稀釋)，再室溫避光孵育5 min，用PBS洗3遍，滴加抗熒光淬滅劑，即可放在熒光顯微鏡下檢測(cè)。

2.3 外泌體的提取與鑒定將心肌細(xì)胞分為正常條件培養(yǎng)組與缺氧條件培養(yǎng)組，分別換成高糖DMEM與無(wú)糖DMEM，均不含胎牛血清，經(jīng)48 h后收集上清，提取正常心肌細(xì)胞來(lái)源的外泌體(normal CMs-derived exosomes，N-exo)和缺氧處理心肌細(xì)胞來(lái)源的外泌體(hypoxia-treated CMs-derived exosomes，H-exo)。按照外泌體提取試劑盒說(shuō)明操作，上清 ∶提取液=5 ∶1的比例加入外泌體提取試劑，上下翻轉(zhuǎn)混勻，4 ℃靜置12 h以上，然后1 500×g離心0.5 h，吸出大部分上清，再1 500×g離心5 min，所得沉淀即為外泌體，加入100 μL PBS重懸，取15 μL用于濃度檢測(cè)，其余可放置-80 ℃保存。

外泌體的鑒定：往外泌體溶液中加入適量5× loading buffer，95 ℃水浴煮5 min，再經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、孵一抗(1 ∶1 000稀釋，4 ℃過(guò)夜)、TBST清洗、孵二抗(1 ∶5 000稀釋，室溫孵育1 h)、TBST清洗，滴加適量發(fā)光液，最后用Amersham Imager 600成像儀自動(dòng)曝光拍照。另外，用Nanosight進(jìn)行外泌體粒徑以及濃度分析，一定量外泌體加入PBS液稀釋至1 mL，加入樣品槽后自動(dòng)上樣并生成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。用電鏡對(duì)外泌體大小形態(tài)進(jìn)行分析。

2.4 外泌體攝取實(shí)驗(yàn)使用PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kits對(duì)外泌體進(jìn)行標(biāo)記，按照試劑盒(Cat.no.MINI26-1KT)說(shuō)明書(shū)操作，用1 mL的Diluent C溶液重懸外泌體沉淀，往其中快速加入1 mL含PKH26的Diluent C混勻，室溫放置5 min，再加入等量的FBS終止反應(yīng)，100 000×g離心70 min，去除沒(méi)有與外泌體結(jié)合的PKH26，沉淀用α-MEM完全培養(yǎng)基重懸后，加入Gli1+細(xì)胞中培養(yǎng)24 h。用共聚焦熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞對(duì)外泌體的攝取情況。

2.5 外泌體與Gli1+細(xì)胞共培養(yǎng)為探究缺氧心肌細(xì)胞上清提取的外泌體對(duì)Gli1+細(xì)胞纖維化的影響，設(shè)置陰性對(duì)照組、正常外泌體組(N-exo)、缺氧外泌體組(H-exo)，以及TGF-β(100 μg·L-1)陽(yáng)性對(duì)照組。按照1×1014particles·L-1的濃度將外泌體加入到Gli1+細(xì)胞中培養(yǎng)48 h，收集細(xì)胞并進(jìn)行裂解與變性，用Western blot分析細(xì)胞中纖維化蛋白的表達(dá)情況(如“2.3”所述)。

2.6 外泌體中miRs的差異分析將“2.3”中提取到的兩種外泌體樣本，按照miRcute miRNA Isolation Kit操作說(shuō)明提取外泌體中總miRs后，使用Mir-XTMmiRNA First-Strand Synthesis Kit 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，嘗試擴(kuò)增5個(gè)相關(guān)miRs，比較其在N-exo與H-exo中的差異表達(dá)。

2.7 Gli1+細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-223 mimic和inhibitor待6孔板中的Gli1+細(xì)胞匯合至50%后，按照Lipo3000操作說(shuō)明轉(zhuǎn)染miR-223 mimic、inhibitor以及相應(yīng)的negative control(NC)。操作步驟如下：250 μL opti-MEM中加入5 μL 25 pmol mimic，輕微地混勻，室溫放置5 min，再將稀釋的mimic與稀釋的Lipo3000混勻，室溫放置20 min，(inhibitor、NC以及Lipo3000的稀釋方法同上)，最后將混合液與1.5 mL opti-MEM培養(yǎng)基混勻再加入到細(xì)胞中，12 h后更換為α-MEM完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12 h，提取細(xì)胞蛋白后用Western blot分析(如“2.3”所述)。

3 結(jié)果

3.1 Gli1+細(xì)胞與心肌細(xì)胞的形態(tài)鑒定磁珠分選法獲得的原代Gli1+細(xì)胞，培養(yǎng)于含體積分?jǐn)?shù)為0.1胎牛血清的α-MEM完全培養(yǎng)基中，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后，形態(tài)為長(zhǎng)梭形成纖維細(xì)胞樣(Fig 1A)。用流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示，細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記CD29、CD105和Gli1，基本不表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記CD31、造血干細(xì)胞標(biāo)記CD34和淋巴細(xì)胞標(biāo)記CD45(Fig 1B)。表明所分選的Gli1+細(xì)胞純度高，可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

差速貼壁法提取的心肌細(xì)胞，培養(yǎng)至d 3后，細(xì)胞呈現(xiàn)一致性的搏動(dòng)，將細(xì)胞傳至24孔板中，用免疫熒光法鑒定。結(jié)果顯示，心肌細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)cTnT和α-Actinin(Fig 1C)，符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。

Fig 1 Identification of Gli1+cells and cardiomyocytes

A:Morphology of isolated Gli1+cells in day 5 (scale bar=200 μm); B:Expression of Gli1,CD29,CD105,CD31,CD34 and CD45 in Gli1+cells were detected by flow cytometry (negative control in black,Gli1+cells in white); C:Expression of cTnT and α-Actinin in cardiomyocytes were examined by immunofluorescence (scale bar=100 μm).

Fig 2 Characteristics of cardiomyocyte-derived exosomes

A:Exosomes markers Flotillin-1,Alix,HSP70 and CD63 were measured by Western blot; B:Electron microscopy analysis of exosomes secreted by cardiomyocytes (scale bar=200 nm); C:Expression of CD63 in exosomes and morphology of exosomes were detected by flow cytometry; D:Sizes of exosomes were detected by nanoparticle tracking analysis (NTA) (mode:127 nm).

3.2 心肌細(xì)胞外泌體特性分析分別從正常和缺氧條件培養(yǎng)的心肌細(xì)胞獲得的培養(yǎng)基中提取外泌體(N-exo、H-exo)，Western blot結(jié)果顯示，N-exo和H-exo均陽(yáng)性表達(dá)Flotillin-1、Alix、HSP70以及CD63(Fig 2A)。電鏡結(jié)果顯示，外泌體呈“杯型”或“碟狀”形態(tài)，大小在100 nm左右(Fig 2B)。流式結(jié)果也顯示，外泌體陽(yáng)性表達(dá)CD63(Fig 2C)。以上結(jié)果提示，心肌細(xì)胞上清外泌體成功提取。

3.3 外泌體攝取實(shí)驗(yàn)將外泌體與PKH26紅色熒光標(biāo)記染料結(jié)合使之帶上紅色熒光，再與Gli1+細(xì)胞共培養(yǎng)12 h，用Hoechst 33342染料對(duì)細(xì)胞核染色，置于共聚焦熒光顯微鏡下觀察，可見(jiàn)帶熒光的外泌體被細(xì)胞內(nèi)吞，此時(shí)主要聚集在細(xì)胞核周圍(Fig 3)。

3.4 H-exo促進(jìn)Gli1+細(xì)胞纖維化蛋白質(zhì)印跡法結(jié)果顯示，相比于陰性對(duì)照組，與H-exo共培養(yǎng)或者TGF-β(100 μg·L-1)處理組的Gli1+細(xì)胞明顯增加纖維化相關(guān)蛋白α-SMA、DDR-2和Collagen I的表達(dá)(Fig 4A，4B)。流式檢測(cè)陰性對(duì)照組與H-exo處理組，結(jié)果顯示H-exo處理后，Gli1+細(xì)胞中α-SMA與DDR-2雙陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)由27.5%上調(diào)為60.3%(Fig 4C)。以上兩種實(shí)驗(yàn)結(jié)果均提示，H-exo可以促進(jìn)Gli1+細(xì)胞纖維化。

Fig 3 Gli1+cells internalization

3.5 miR-223促進(jìn)Gli1+細(xì)胞纖維化RT-qPCR分析N-exo與H-exo中與細(xì)胞纖維化相關(guān)的microRNAs的差異表達(dá)，發(fā)現(xiàn)miR-223在H-exo中的表達(dá)量明顯上調(diào)(Fig 5A)。流式檢測(cè)陰性對(duì)照組與miR-223的模擬物(mimic)處理組，結(jié)果顯示miR-223 mimic處理后，Gli1+細(xì)胞中α-SMA與DDR-2雙陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)由27.6%上調(diào)為88.3%(Fig 5B)。Western blot檢測(cè)纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-223 mimic(50 nmol·L-1)處理組細(xì)胞中α-SMA、DDR-2和Collagen I的表達(dá)量明顯上升(Fig 5C,5D)，提示miR-223可能促進(jìn)Gli1+細(xì)胞纖維化。

Fig 4 The fibrotic effect of hypoxic exosomes on Gli1+cells

4 討論

多年來(lái)，心臟纖維化的細(xì)胞起源一直不清楚，Weber等[10]研究表明，心臟纖維化可能涉及血管周圍細(xì)胞。傳統(tǒng)理論認(rèn)為，心外膜細(xì)胞通過(guò)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化后形成成纖維細(xì)胞，損傷引發(fā)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化失調(diào)可導(dǎo)致心臟纖維化[11]。而在壓力超負(fù)荷引起的心臟病變中，大部分成纖維細(xì)胞來(lái)源于病理誘導(dǎo)的內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[12-13]。近期有研究發(fā)現(xiàn)，心肌血管周圍的間充質(zhì)細(xì)胞樣Gli1+細(xì)胞是器官纖維化的起源細(xì)胞之一，在組織損傷后，Gli1+細(xì)胞轉(zhuǎn)化為活化狀態(tài)的成纖維細(xì)胞，介導(dǎo)纖維化的發(fā)生[5]。但是，導(dǎo)致Gli1+細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的機(jī)制尚不清楚。細(xì)胞所處的微環(huán)境是調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝和表型轉(zhuǎn)化的重要因素，特別是其中的外泌體在細(xì)胞之間信息傳遞中發(fā)揮重要作用。心肌細(xì)胞是心臟組織中數(shù)量最多的細(xì)胞群體，其外泌體在心臟微環(huán)境調(diào)節(jié)以及Gli1+細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化中的作用還不清楚。

外泌體是由細(xì)胞合成并分泌的攜帶多種物質(zhì)(脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、mRNA和非編碼RNA)的活性囊泡。它作為旁分泌效應(yīng)的重要介質(zhì)，可在生理病理?xiàng)l件下介導(dǎo)細(xì)胞、組織和器官之間的信息交流。已有研究表明，糖剝奪可以增加CMs中外泌體的合成和分泌[14]，提示心肌損傷后其生物學(xué)特性可能發(fā)生改變，其所分泌的外泌體內(nèi)容物也可能有所變化。為了探討病理(缺氧)條件下，CMs分泌的外泌體對(duì)Gli1+細(xì)胞纖維化表型轉(zhuǎn)變的作用，我們?cè)隗w外缺氧條件下培養(yǎng)CMs，收集其上清提取外泌體(H-exo)，并將H-exo加入到Gli1+細(xì)胞中共培養(yǎng)。蛋白質(zhì)印跡顯示，與陰性對(duì)照組相比，H-exo處理組的Gli1+細(xì)胞中纖維化相關(guān)蛋白α-SMA、DDR-2和Collagen I表達(dá)明顯增加，TGF-β陽(yáng)性對(duì)照組的結(jié)果與之一致。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果也顯示，H-exo處理組的α-SMA和DDR-2雙陽(yáng)性表達(dá)率明顯上調(diào)。以上結(jié)果均提示H-exo可以促進(jìn)Gli1+細(xì)胞的纖維化。

在外泌體所有的內(nèi)容物中，microRNAs被證實(shí)調(diào)控多種心血管疾病的病理生理學(xué)過(guò)程，包括心肌細(xì)胞肥大、圍產(chǎn)期心肌病、糖尿病和敗血癥誘發(fā)的心肌病等[15]。microRNAs可以介導(dǎo)mRNA的切割，翻譯抑制或mRNA去穩(wěn)定化，并且通過(guò)與靶轉(zhuǎn)錄物中的3'端非翻譯區(qū)互補(bǔ)配對(duì)，是基因表達(dá)的主要調(diào)節(jié)因子。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，糖氧剝奪條件下可以改變CMs來(lái)源外泌體中某些與纖維化相關(guān)的miRNAs的含量，其中miR-223的變化最為明顯。提示H-exo中的miR-223可能對(duì)Gli1+細(xì)胞纖維化轉(zhuǎn)變起主要調(diào)節(jié)作用。轉(zhuǎn)染miR-223的mimic、inhibitors以及mimic nc和inhibitor nc，蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示，相對(duì)于陰性對(duì)照組，過(guò)表達(dá)miR-223后，Gli1+細(xì)胞中α-SMA、DDR-2和Collagen I的表達(dá)明顯增加，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果與之一致；而抑制miR-223后，Gli1+細(xì)胞中DDR-2的表達(dá)相應(yīng)降低，α-SMA和Collagen I的表達(dá)沒(méi)有差異。綜上所述，H-exo與miR-223均可以促進(jìn)Gli1+細(xì)胞纖維化表型轉(zhuǎn)換，提示H-exo可能主要通過(guò)其中的miR-223發(fā)揮促纖維化作用。

Fig 5 The fibrotic effect of miR-223 on Gli1+cells

以上實(shí)驗(yàn)研究揭示了損傷心肌細(xì)胞通過(guò)其分泌的外泌體，促進(jìn)心臟固有的Gli1+細(xì)胞的纖維化轉(zhuǎn)變，加速了受損心臟的纖維化進(jìn)程。本研究揭示了Gli1+細(xì)胞纖維化表型轉(zhuǎn)換的機(jī)制，為闡明心臟纖維化發(fā)生的機(jī)制和新的治療手段的研發(fā)提供科學(xué)基礎(chǔ)。