易新文， 陳瑞愛， 徐家華

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510642; 2.肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司，廣東 肇慶 526238; 3.深圳市澳華集團股份有限公司，廣東 深圳 518054)

雞肉粉是雞加工過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物經(jīng)過蒸煮、壓榨、烘干、粉碎等工序而生產(chǎn)的一種重要動物蛋白源。雞肉粉具有 蛋白含量高，氨基酸平衡，消化率高，利用率高等特點；生產(chǎn)量大，價格適中，被廣泛用作魚粉的替代蛋白源。然而，與魚粉相比，雞肉粉中蛋氨酸和賴氨酸等必需氨基酸含量低，缺乏促生長因子等，成為限制雞肉粉替代魚粉的一個重要因素[1]。有研究表明雞肉粉適量替代魚粉對異育銀鯽 (CarassiusauratusgibelioBloch)[2]、馬拉巴石斑魚(Epinephelusmala-bricus)[3]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[4-5]和尼羅羅非魚(Oreochromisniloticus)[6]的生長和飼料利用未造成顯著性影響。

卵形鯧鲹 (Trachinotusovatus)俗稱黃臘鯧、金鯧魚等，隸屬于鱸形目(Perciformes)鲹科(Carangidae (Rafinesque, 1815))鯧鲹屬(Trachinotus)，為暖水性中上層魚類，廣泛分布于大西洋、太平洋和印度洋，在中國東海、南海均有分布。卵形鯧鲹具有生長快、抗逆性強、成活率高和肉質(zhì)鮮美等特點，成為廣東、廣西、海南等地一種重要的海水養(yǎng)殖魚類。隨著卵形鯧鲹養(yǎng)殖的興盛，對其營養(yǎng)研究逐漸增多。目前已有卵形鯧鲹適宜蛋白和脂肪水平[7]，卵形鯧鲹對精氨酸[8]、亮氨酸[9]、纈氨酸[10]、碳水化合物[11]、ARA[12]等的需求量，以及卵形鯧鲹適宜投飼頻率[13]的研究報到。

隨著飼料行業(yè)競爭的加劇，如何在保持養(yǎng)殖效果的前提下，有效降低配方成本是飼料企業(yè)關(guān)注的焦點之一。作為肉食性魚類，卵形鯧鲹配方中魚粉含量較高，魚粉替代研究已經(jīng)成為目前卵形鯧鲹營養(yǎng)研究的重點之一。Wu等[14]研究表明在基礎(chǔ)配方含有40%魚粉的膨化料中，大豆?jié)饪s蛋白可以替代20%的魚粉而不影響卵形鯧鲹的生長，補充牛磺酸可以替代40%的魚粉。雞肉粉也是北美鯧鯵(Trachinotuscarolinus)的一種良好魚粉替代蛋白源，隨著雞肉粉替代量的增加，配方中魚粉含量可以從15%降低到5%而不影響北美鯧鯵的生長[15]。Ma等[16]采用膨化飼料研究雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹的影響，基礎(chǔ)配方中含有35%的魚粉，雞肉粉替代40%、60%、80%和100%的魚粉，結(jié)果表明當(dāng)雞肉粉替代40%的魚粉時會顯著影響卵形鯧鲹的生長、飼料利用和氮磷排放。其實驗設(shè)計中雞肉粉替代魚粉的起始替代比例過高(40%)，未能真正探索到雞肉粉替代魚粉的合適比例；同時實驗配方中脂肪含量較低(6.5%)，目前企業(yè)卵形鯧鲹膨化配合飼料中脂肪含量一般在10%以上，因此在卵形鯧鲹實際生產(chǎn)配方中雞肉粉替代魚粉的具體比例有待進一步研究。

本研究配制粗蛋白為43%，粗脂肪為12%的實驗膨化配合飼料，基礎(chǔ)配方中魚粉和雞肉粉添加量分別為34%和6%，探索雞肉粉不同梯度等量替代魚粉對卵形鯧鲹生長、體組成、飼料利用、腸道酶活和抗氧化力的影響，為卵形鯧鲹商業(yè)膨化配合飼料的配制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗飼料

以魚粉、雞肉粉、玉米蛋白粉和豆粕為主要蛋白源，以魚油和豆油為主要脂肪源，以小麥粉為主要糖源。對照組(Diet1)含有34%的魚粉和6%的進口雞肉粉，在Diet1的基礎(chǔ)上分別增加4%、8%和12%的進口雞肉粉等量替代4%、8%和12%的魚粉，分別命名為Diet2～4，配制成43%粗蛋白和12%粗脂肪的實驗飼料(見表1)。考慮實際生產(chǎn)過程中魚油后噴涂添加的均勻性，實驗組魚油統(tǒng)一添加2.5%，采用豆油調(diào)平各處理組粗脂肪含量。

注：1.魚粉：粗蛋白65%，粗脂肪10%。2.進口雞肉粉：粗蛋白66%，粗脂肪13.6%。3.多維(mg或g/ kg diet)：維生素B1，25 mg；核黃素，45 mg；維生素B6(鹽酸吡哆醇)，20 mg ；維生素B12，0.1 mg；維生素K3，10 mg；肌醇，800 mg；維生素B3(泛酸)，60 mg；煙酸，200 mg；葉酸，20 mg；生物素，1.20 mg；維生素A，32 mg；維生素D3，5 mg；維生素E，120 mg；維生素C，2 000 mg；乙氧基喹啉，150 mg；次粉，6.52 g。4. 多礦(mg或g/ kg diet)：氟化鈉，2 mg；碘化鉀，18 mg；氯化鈷(1%)，50 mg；硫酸銅，10 mg；硫酸鐵，80 mg；硫酸鋅，50 mg；硫酸錳，60 mg；硫酸鎂，1 200 mg；氯化鈉，100 mg；沸石粉，8.43 g。

Notes：1. Fishmeal: Crude protein 65%, crude lipid 10%.2. Imported poultry by-product meal: Crude protein 66%, crude lipid 13.6%.3. Vitamin premix (mg or g/ kg diet)：Thiamin，25 mg；Riboflavin，45 mg；Pyridoxine HCl，20 mg；Vitamin B12, 0.1 mg; Vitamin K3, 10 mg; Inositol, 800 mg; Pantothenic Acid, 60 mg; niacin acid, 200 mg; Folic acid, 20 mg, biotin, 1.20 mg; Retinol acetate, 32 mg; Cholecalciferol, 5 mg ; Alpha-tocopherol, 120 mg; ascorbic acid, 2 000 mg; Ethoxyquin, 150 mg; Wheat middling, 6.52 g.4. Mineral premix (mg or g/ kg diet )：NaF, 2 mg; KI, 18 mg; CoCl2· 6H2O (1%), 50 mg; CuSO4·5H2O, 10 mg; FeSO4·H2O, 80 mg; ZnSO4· H2O, 50 mg; MnSO4·H2O, 60 mg; MgSO4·7H2O, 1 200 mg; Ca(H2PO4)2· H2O, 10 g; NaCl, 100 mg; Zoelite, 8.43 g.

所有原料首先經(jīng)粉碎過160 μm篩，精確稱量后加25%的水混勻，采用孔徑為2.0 mm的模板經(jīng)小型膨化機(廣東省羅定市華強飼料膨化機械公司，Q75)制成規(guī)格均一的膨化飼料。飼料水分烘干至10%，所有烘干后的飼料用黑色塑料袋儲存于-20 ℃冰箱中，每種飼料取樣品200 g保存用于分析。

1.2 實驗魚來源和馴化

本實驗在湛江實驗基地池塘網(wǎng)箱中進行，卵形鯧鲹購置于湛江養(yǎng)殖戶同一批苗，在正式實驗前先將魚苗放置于3 m×3 m×2 m的網(wǎng)箱中暫養(yǎng)2周以適應(yīng)實驗環(huán)境，暫養(yǎng)期間投喂商業(yè)膨化配合飼料，每天在5:00和17:00投喂2次。

1.3 實驗過程

馴化結(jié)束后，挑選規(guī)格一致，體格健壯的卵形鯧鲹幼魚(24.90±0.06)g隨機分組，放置于16個池塘網(wǎng)箱(2 m×2 m×1.5 m)中，每個網(wǎng)箱中放40尾魚。每種實驗飼料隨機投喂4個網(wǎng)箱，每天在5：00和17：00投喂2次，實驗共進行52天。養(yǎng)殖期間水溫在22～31 ℃，鹽度為25～32，溶解氧≥6 mg·L-1。

1.4 樣品采集和分析

實驗結(jié)束時，將魚饑餓處理24 h，用丁香酚(1∶10 000)麻醉后，將每個網(wǎng)箱中的魚全部稱重計數(shù)。對實驗魚進行取樣，樣品保存于-20 ℃冰箱中待測。飼料和全魚的常規(guī)指標(粗蛋白、粗脂肪、水分、粗灰分、鈣和磷)采用AOAC(1995)[17]方法進行測定。肝臟中谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、過氧化物酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、還原性谷胱甘肽(GSH)、腸道蛋白酶和淀粉酶活性均采用南京建成試劑盒進行測定。

1.5 實驗統(tǒng)計和分析

存活率(Survival rate，SR，%)=100×終末尾數(shù)/初始尾數(shù)；

增重率(Weight gain，WG，%)=100×(終末體重(g)-初始體重(g))/初始體重(g)；

特定生長率(Specific growth rate，SGR，%/d)=100×(Ln終末體重(g)-Ln初始體重(g))/實驗天數(shù)；

飼料系數(shù)(Feed conversion ratio，F(xiàn)CR)=飼料消耗量(g)/魚體重增加量(g)；

肥滿度(Condition factor，CF)=100×體重(g)/體長(cm)3；

肝體比(Hepatopancreas somatic indices, HSI，%)=100×肝重(g)/體重(g)。

實驗數(shù)據(jù)采用平均值±標準誤表示，經(jīng)SPSS15.0軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差(ANOVA)分析，當(dāng)差異顯著時用Tukey進行多重比較(Tukey HSD test)，顯著水平為0.05。

2 實驗結(jié)果

2.1 雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹生長的影響

如表2所示，各處理組間卵形鯧鲹存活率、增重率、特定生長率、餌料系數(shù)、肥滿度和肝體比均無顯著性差異(P>0.05)。各處理組存活率在93.13%～95.63%之間，特定生長率在2.90～3.02之間，表明實驗魚成活率高，生長速度快。餌料系數(shù)隨著雞肉粉替代魚粉水平的升高而呈上升趨勢。

2.2 雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹體組成的影響

全魚水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量在各處理組組間均無顯著性差異(P>0.05)(見表3)。全魚鈣含量隨著雞肉粉替代魚粉水平的升高而呈上升趨勢，從0.98%增加到1.05%，而全魚磷含量隨著雞肉粉替代魚粉水平的升高而呈下降趨勢，從0.63%降低到0.60%，盡管各處理組間無顯著性差異(P>0.05)。

表2 雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹生長和飼料利用的影響

注：1.數(shù)據(jù)為四個重復(fù)的平均值加標準誤。2.表中同一列內(nèi)右上角標有相同英文字母或無字母的數(shù)據(jù)之間無顯著性差異(P>0.05)。

Notes: 1.Values are means and standard errors of four replicates. 2.Values in the same row with the same superscript or absence of superscripts are not significant different by Tukey’s test (P>0.05).

①Number; ②Initial weight; ③Final weight; ④Survival rate; ⑤Weight gain; ⑥Specific growth rate; ⑦Feed conversion ratio; ⑧Condition factor; ⑨Hepatopancreas somatic indices

表3 雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹體成分的影響

注：1.數(shù)據(jù)為四個重復(fù)的平均值加標準誤。2.表中同一列內(nèi)右上角標有相同英文字母或無字母的數(shù)據(jù)之間無顯著性差異(P>0.05)。

Notes: 1.Values are means and standard errors of four replicates.2.Values in the same row with the same superscript or absence of superscripts are not significant different by Tukey’s test (P>0.05).

2.3 雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹肝臟酶活的影響

如表4所示，Diet1處理組肝臟過氧化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)均顯著高于Diet3和Diet4處理組(P<0.05)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)隨著雞肉粉替代魚粉水平的升高而呈下降趨勢，盡管各處理組間無顯著性差異(P>0.05)。Diet2處理組谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)顯著高于Diet1處理組(P<0.05)。谷胱甘肽(GSH)含量隨著雞肉粉替代魚粉水平的升高而呈上升趨勢，盡管各處理組間無顯著性差異(P>0.05)。

表4 雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹肝臟酶活的影響

注：1.數(shù)據(jù)為四個重復(fù)的平均值加標準誤。2.表中同一列內(nèi)右上角標有相同英文字母或無字母的數(shù)據(jù)之間無顯著性差異(P>0.05)。

Notes: 1.Values are means and standard errors of four replicates.2.Values in the same row with the same superscript or absence of superscripts are not significant different by Tukey’s test (P>0.05).

2.4 雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹腸道酶活的影響

雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹前腸、中腸和后腸的淀粉酶活性均無顯著性影響(P>0.05)，中后腸的淀粉酶活性高于前腸的淀粉酶活性(見表5)。各處理組中腸蛋白酶活性高于前腸和后腸蛋白酶活性，前腸蛋白酶活性最低。中腸蛋白酶活性隨著雞肉粉替代魚粉水平的升高而升高，Diet4處理組和Diet3處理組顯著高于Diet1處理組(P<0.05)(見表6)。

3 討論

在本研究中，隨著飼料中雞肉粉含量從6%增加到18%，魚粉含量從34%降低到22%，雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹的生長未造成顯著性影響。而Ma等[16]對卵形鯧鲹進行相似的研究表明，當(dāng)基礎(chǔ)配方中魚粉含量從35%降低到21%，雞肉粉含量從10%增加到25%時，顯著降低了卵形鯧鲹的生長、能量保留率和氮保留率。盡管兩者使用的魚體規(guī)格(16.7 g VS 24.8 g)，養(yǎng)殖周期(56 d VS 52 d)，基礎(chǔ)配方中的魚粉含量(35% VS 34%)均相似，但本研究中卵形鯧鲹的增重率遠高于Ma等[16]的研究結(jié)果。Wang等[19]指出基礎(chǔ)配方結(jié)構(gòu)不同是導(dǎo)致不同魚粉替代實驗結(jié)果差異的重要原因之一。本研究的基礎(chǔ)配方中粗蛋白為43%、粗脂肪為12%，而Ma等[16]的實驗基礎(chǔ)配方粗蛋白為48%，粗脂肪為6.5%，這表明本研究的配方結(jié)構(gòu)可能更適合卵形鯧鲹生長的需要。由于本實驗采用雞肉粉等量替代魚粉，所用雞肉粉蛋白含量略高于魚粉，導(dǎo)致實驗組的實際蛋白含量高于對照組，這可能是導(dǎo)致雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹生長影響不顯著的原因之一。Keramat等[18]研究表明雞肉粉的質(zhì)量，尤其是雞肉粉蛋白的質(zhì)量和含量，影響雞肉粉替代魚粉的水平；雞肉粉的質(zhì)量越好，則雞肉粉替代魚粉的比例越高。本實驗和Ma等[16]實驗中使用的雞肉粉均為進口雞肉粉。目前，在很多養(yǎng)殖魚類中雞肉粉還不能完全替代魚粉而不影響?zhàn)B殖魚類的生長和健康。限制雞肉粉替代魚粉的因素主要有：(1)與魚粉相比，雞肉粉賴氨酸和蛋氨酸等氨基酸相對缺乏，(2)雞肉粉的消化吸收率相對偏低，(3)缺乏未知促生長因子，(4)適口性需要提升等[2,18-19]。通過補充賴氨酸、蛋氨酸、?；撬帷⒂袡C硒，采用復(fù)合蛋白源，改進雞肉粉生產(chǎn)工藝提高雞肉粉質(zhì)量等措施均可以提高雞肉粉替代魚粉的比例[2,4,6,15,18-19]。在本實驗配方結(jié)構(gòu)下，配方中魚粉可以降低至22%而不顯著影響卵形鯧鲹的生長和飼料利用，因此雞肉粉替代魚粉的比例可以繼續(xù)提高，具體替代比例和改進方法需要進一步研究。

表5 雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹前腸、 中腸和后腸淀粉酶活影響Table 5 Effects of dietary fish meal replaced with poultry by-product meal on intestine amylase of golden pompano (Trachinotus ovatus) (Mean±S.D., n=41,2) /U·mgprot-1

注：1.數(shù)據(jù)為四個重復(fù)的平均值加標準誤。2.表中同一列內(nèi)右上角標有相同英文字母或無字母的數(shù)據(jù)之間無顯著性差異(P>0.05)。

Notes: 1.Values are means and standard errors of four replicates. 2.Values in the same row with the same superscript or absence of superscripts are not significant different by Tukey’s test (P>0.05).

表6 雞肉粉替代魚粉對卵形鯧鲹前腸、 中腸和后腸蛋白酶活影響Table 6 Effects of dietary fish meal replaced with poultry by-product meal on intestine protease of golden pompano (Trachinotus ovatus) (Mean ± S.D., n=41,2) /U·mgprot-1

注：1.數(shù)據(jù)為四個重復(fù)的平均值加標準誤。2.表中同一列內(nèi)右上角標有相同英文字母或無字母的數(shù)據(jù)之間無顯著性差異(P>0.05)。

Notes: 1.Values are means and standard errors of four replicates.2.Values in the same row with the same superscript or absence of superscripts are not significant different by Tukey’s test (P>0.05).

在本研究中雞肉粉替代魚粉對各處理組全魚的粗蛋白、粗脂肪、水分和粗灰分均無顯著性影響。這與Ma等[16]對卵形鯧鲹、Aydin[6]對尼羅羅非魚、羅嘉翔等[20]對黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)、Wang等[21]對馬拉巴石斑魚的研究結(jié)果一致。然而，Ali等[22]對黑海菱鲆(Scophthalmusmaeoticus)的研究表明高雞肉粉替代組(50%、75%和100%)魚體水分和灰分高于低替代組(0%和25%)，而全魚脂肪則相反。北美鯧鯵隨著雞肉粉替代魚粉比例增加，全魚水分顯著升高，而全魚粗蛋白在各處理組間無顯著性差異[15]。這些研究結(jié)果的差異可能與研究對象、養(yǎng)殖環(huán)境和飼料配方等有關(guān)。

活性氧是正常生理代謝的產(chǎn)物，低濃度的活性氧是細胞發(fā)揮正常生理功能必要條件之一[23]。細胞擁有多層次抗氧化系統(tǒng)，包含一系列氧化和過氧化清除酶(如超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽還原酶等)和低分子物質(zhì)(如谷胱甘肽、VE、VC和類胡蘿卜素)。肝臟是機體重要的代謝中心，魚類尤其是海水魚富含高不飽和脂肪酸，易于被氧化，因此肝臟中抗氧化水平能夠反映整個機體的抗氧化水平[24]。由于魚粉和魚粉替代蛋白源在品質(zhì)上(如新鮮度等)和營養(yǎng)組成上(如脂肪酸、氨基酸等)的差異，可能影響魚體代謝和抗氧化狀態(tài)。在本研究中，隨著雞肉粉替代魚粉比例的升高，卵形鯧鲹肝臟中CAT、SOD 活性不斷降低，這表明雞肉粉替代魚粉一定程度的降低了卵形鯧鲹的抗氧化能力。羅嘉翔等[20]研究表明20%雞肉粉替代魚粉組黃顙魚肝臟SOD活性顯著高于0%替代組，但各處理組間CAT活性無顯著性差異。然而，Zhou等[25]研究表明寵物級雞肉粉替代魚粉對軍曹魚幼魚肝臟SOD、CAT、GST和GPX活性均無顯著性影響。GOT和GPT是動物肝臟中重要的氨基酸代謝酶類，酶活性升高說明蛋白質(zhì)用于能量代謝加強[26]。在本研究中，卵形鯧鲹肝臟中GOT活性隨著雞肉粉替代水平的升高而增加，但GPT在各處理組組間無顯著性差異，這與Lu等[4]在虹鱒上的研究結(jié)果一致。李宗升等[27]研究表明大菱鲆肝臟中GOT和GPT均隨著雞肉粉替代魚粉的增加而升高。鄧君明[28]指出飼料氨基酸平衡性會影響蛋白質(zhì)代謝活動。與魚粉相比雞肉粉缺乏賴氨酸、蛋氨酸等必需氨基酸。在本實驗中雞肉粉等量替代魚粉，并未補平氨基酸，因此隨著雞肉粉替代魚粉的增加，飼料中的氨基酸不平衡性加劇，導(dǎo)致卵形鯧鲹肝臟中氨基酸代謝活動加強，與氨基酸代謝相關(guān)的酶活性改變，以適應(yīng)飼料中雞肉粉含量的增加。

消化酶是機體內(nèi)具有催化活性的物質(zhì)，能促進食物消化與營養(yǎng)吸收。消化酶活性的增強，表明營養(yǎng)物質(zhì)被消化利用的能力加強。在本研究中，隨著雞肉粉替代的增加，Diet4處理組和Diet3處理組中腸蛋白酶活性顯著高于Diet1處理組，這表明雞肉粉的增加需要更多的蛋白酶才能被充分消化利用吸收。羅嘉翔等[20]研究表明隨著雞肉粉替代魚粉比例的增加，黃顙魚胃蛋白酶活性增加。本研究中各處理組淀粉酶活性在前中后腸均無顯著性差異，這與羅嘉翔等[20]在黃顙魚上的研究不同，黃顙魚前腸淀粉酶活性隨雞肉粉替代魚粉比例的增加而升高。曹俊明等[29]使用蠅蛆粉替代魚粉并未影響凡納濱對蝦胃、腸和肝胰腺中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。這可能與魚種和魚粉替代物的不同有關(guān)。

4 結(jié)論

在本實驗條件下，卵形鯧鲹配方中的魚粉可以從34%降低至22%，雞肉粉從6%提升至18%而不影響其生長、體組成、飼料利用。在卵形鯧鲹配方中雞肉粉是否可以替代更高比例的魚粉還需要進一步研究。