郭青春 譚勇

（1，湖南省懷化職業(yè)技術(shù)學(xué)院 418000；2，湖南省株洲市茶陵縣畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)局 412400）

近年來我們國家產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)不斷調(diào)整，很多人選擇返鄉(xiāng)創(chuàng)業(yè)，養(yǎng)殖業(yè)成為首選。隨著養(yǎng)殖隊(duì)伍及規(guī)模的擴(kuò)大，基于各類牲畜頻繁販運(yùn)，動(dòng)物疾病也不再由單一病原所致，往往多以病原多重感染或混合感染為主要流行形式，發(fā)病快、防控難度大，再加上新進(jìn)的創(chuàng)業(yè)者缺乏專業(yè)技術(shù)，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。株洲市茶陵縣某私人養(yǎng)豬場新購一批豬仔出現(xiàn)死亡，前來求助，后經(jīng)診斷為巴氏桿菌病與豬瘟并發(fā)，經(jīng)緊急防治將損失降到最低[1]?，F(xiàn)結(jié)合筆者臨床實(shí)踐談?wù)剬υ摬≡\治。

1 發(fā)病情況

湖南省某私人豬場老板于2018 年3 月底從外來豬販?zhǔn)种匈彽?5kg 左右的豬仔70 頭。新豬購入第二天就發(fā)現(xiàn)有幾頭豬仔發(fā)病，食欲減退或不食，場主認(rèn)為是應(yīng)激引起的感冒發(fā)燒，給豬仔注射了青霉素等藥物進(jìn)行簡單治療，不見好轉(zhuǎn)，同時(shí)這種疾病傳染很快，沒幾天整欄仔豬發(fā)病，仔豬進(jìn)欄第3 天后開始出現(xiàn)死亡，見組圖1。筆者應(yīng)邀對仔豬進(jìn)行臨床與病理剖檢診斷，然后取病料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測，診斷為巴氏桿菌病并發(fā)豬瘟，后采取綜合防治措施，收到一定療效。

2 臨床癥狀

仔豬病初體溫升高至40.1～41.4℃，精神委頓，拱背，仔豬扎堆，畏寒，食欲減少或廢絕，然后出現(xiàn)拉稀，糞便呈灰色；病豬的鼻端流膿性鼻涕，呼吸明顯，部分仔豬耳朵耳尖發(fā)紺，眼神暗淡無光，眼結(jié)膜呈蒼白色；病豬死前出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，四肢呈劃水樣，大部分仔豬死后頭部角弓反張，身體發(fā)紅，發(fā)病快，死亡率很高。

3 病理變化

病死仔豬剖檢可見鼻腔、氣管分泌黏液；鼻喉、氣管和支氣管黏膜充血；肺臟灰白，有出血斑；心臟有出血斑；肝臟上可見散在分布的黃色斑塊、肝臟邊緣腫大、表面有出點(diǎn)血；腸系膜充血、出血；腸外膜充血，腸內(nèi)充氣，腸黏膜可見卡它性潰瘍，參見圖1。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 細(xì)菌檢查

4.1.1 病料采集

無菌采集病死仔豬肺臟、肝臟、脾臟、淋巴結(jié)及小腸內(nèi)容物，置于冰箱4℃待檢。

4.1.2 涂片染色鏡檢

取無菌采集的病死仔豬組織涂片進(jìn)行美蘭染色，顯微鏡鏡檢，鏡檢結(jié)果為革蘭氏陰性菌，菌體里兩極濃染、中間著色淺的短桿菌。

4.1.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌操作將病死仔豬的肺組織、淋巴結(jié)和腸黏膜上的病料接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和血液瓊脂培養(yǎng)基（自行配制），在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h 后在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，基本上沒有看到成型的菌落生長；在血液瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)微隆圓形、表面濕潤、邊緣整齊的淺灰白色菌落，該菌落不溶于血。

組圖1 病死仔豬與病理剖檢圖

結(jié)合仔豬發(fā)病時(shí)臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌學(xué)診斷，初步斷定病原微生物為巴氏桿菌。

4.2 病毒檢測

4.2.1 生化試劑

從康百得生物科技有限公司直接訂購豬瘟病毒RT-PCR 檢測試劑盒。依據(jù)試劑盒說明將盒內(nèi)塑料袋試劑（陽性對照、RT-PCR 反應(yīng)液A 和B）-20℃凍存，裂解液2～8℃冷藏，其他室溫保存。

4.2.2 操作方法

（1）樣品制備

將采集好的病變淋巴結(jié)等組織稱取0.1g 于研磨器中磨碎，再加1ml 生理鹽水繼續(xù)磨至無塊狀物；然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5ml滅菌離心管中，8000rpm 離心2min，取100μl 上清液于1.5ml滅菌離心管中。

（2）病毒RNA 的提取

①將處理的樣品、陽性對照組和陰性對照組，分別加入450μl 裂解液，充分顛倒混勻，室溫靜置3min。

②加入275μl 無水乙醇，輕輕混勻。

③將混合液吸入吸附柱中，10000rpm 離心1min，棄去收集管中液體，套回收集管。

④向吸附柱中加入500μl 洗滌液A，10000rpm 離心1min，棄去收集管中液體，套回收集管。

⑤向吸附柱中加入500μl 洗滌液B，10000rpm 離心1min，棄去收集管中液體，套回收集管。

⑥空柱10000rpm 離心2min。

⑦將吸附柱移入新的無RNA 酶的1.5ml 離心管中，在膜中央加入30μl 洗脫液，室溫靜置2min，10000rpm 離心1min，獲得總RNA。

（3）用已知豬瘟引物進(jìn)行RT-PCR

①分別取14μl RT-PCR 反應(yīng)液A （用前混勻）、4μl RTPCR 反應(yīng)液B （用前混勻）和2μl 模板RNA，混勻。

②在PCR 儀上運(yùn)行以下程序：42℃45min，94℃3min，94℃30s，55℃30s，72℃30s，35 個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。

（4）電泳

取5μl PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物點(diǎn)樣于1%瓊脂糖凝膠孔中，以5V/cm 的電壓于50 倍稀釋的TAE 電泳緩沖液中電泳。將電泳好的瓊脂糖凝膠放入30ml 的50 倍稀釋TAE 液（內(nèi)加10μl 染色液）中浸泡混勻，30min 后于紫外燈下觀察結(jié)果。

結(jié)果顯示（見圖2）：1 號陽性對照出現(xiàn)380bp 擴(kuò)增帶；2號陰性對照無帶出現(xiàn)；3 號被檢樣品出現(xiàn)380bp 擴(kuò)增帶，可確診為病死仔豬帶有豬瘟病毒。

5 綜合防治

5.1 預(yù)防

仔豬混合感染發(fā)病強(qiáng)，治愈率低，很多時(shí)候來不及治療就已經(jīng)死亡，因此應(yīng)以預(yù)防為主。

圖2 凝膠電泳圖

從外地販運(yùn)仔豬前必須了解當(dāng)?shù)刎i群疫病流行情況。第一，堅(jiān)持做好引種檢疫，防止外疫傳入；第二，盡量避免到一些高風(fēng)險(xiǎn)的省市引種；第三，作為養(yǎng)殖戶在購入仔豬時(shí)不能一味貪圖便宜。

仔豬運(yùn)輸途中要盡量減少應(yīng)激，一是要選擇好的季節(jié)與天氣，避開寒冷、高溫天氣；二是要將運(yùn)輸車輛提前用復(fù)合酚類、碘制劑等消毒劑；三是運(yùn)輸裝載車要合理裝運(yùn)，避免過分擁擠；四是販運(yùn)前1～2d，給豬群飼喂抗應(yīng)激類等營養(yǎng)藥，如電解多維、黃芪多糖、芪貞增免顆粒、VC等。

新購入仔豬需隔離飼養(yǎng)1 個(gè)月，在確認(rèn)沒有其他疫病的情況下方可與原有豬群同場飼養(yǎng)；制定合理的免疫接種計(jì)劃，接種好疫苗等。

5.2 治療

原則上早隔離、早治療、緊急免疫接種、抗菌抗病毒、中西醫(yī)結(jié)合治療等。

對發(fā)病仔豬立即采取緊急隔離措施。對病豬糞便、分泌物等集中消毒處理，對發(fā)病后豬欄用2%燒堿噴灑消毒，過道灑上生石灰，同時(shí)全場用雙鏈季銨鹽消毒液，作到不留死角，帶豬體消毒。病死豬要深埋或焚燒，作無害化處理。隔離病豬、豬舍、用具每天可用過氧乙酸、復(fù)方戊二醛溶液進(jìn)行噴霧消毒。

對未發(fā)病仔豬進(jìn)行緊急疫苗接種，選用ST 豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源），每頭仔豬肌注1 頭份。發(fā)病仔豬肌注20%氟苯尼考，一般發(fā)病豬發(fā)病后不食，只愿飲水，可通過飲水中添加電解多維，另有腹瀉的水中還可加復(fù)合維生素B 和口服補(bǔ)液鹽，連用3d。也可直接購買中藥復(fù)方劑芪貞增免顆粒、金板藍(lán)顆粒，添加到全體豬群的飲水中。

可用中藥進(jìn)行治療，其方劑石膏40g，知母20g，連翹15g，玄參、金銀花、黃芩、梔子、大黃、甘草各10g，煎水去渣，每日灌服2 次，連用3d。通過上述綜合防治措施3d 后有明顯效果，仔豬死亡率大大降低。

6 結(jié)語

豬瘟是豬傳染病中易感的病毒病，感染豬瘟后易引起免疫抑制，導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降，容易引起其他病原的混合感染。豬巴氏桿菌病又稱為豬肺疫，屬于常見的豬細(xì)菌性傳染病，也是一種條件性致病菌，此病流行與豬的抵抗力有密切關(guān)系，不良因素的刺激易引起該病的發(fā)生和傳染[2]。巴氏桿菌病一般不易查出傳染源，這與動(dòng)物在發(fā)病前帶菌有關(guān)[3]。

近年來，仔豬價(jià)呈上升趨勢，部分養(yǎng)殖戶急于求成、貪圖便宜，從豬販子手中購買沒有經(jīng)過檢疫的仔豬，另外調(diào)運(yùn)時(shí)選擇的冬春時(shí)節(jié)，天氣惡劣氣溫驟變，加上長途運(yùn)輸?shù)葢?yīng)激條件下仔豬抵抗力降低，最后導(dǎo)致致病性巴氏桿菌與豬瘟混合感染。至于后兩者是豬瘟繼發(fā)巴氏桿菌感染還是巴氏桿菌繼發(fā)豬瘟感染的問題有待進(jìn)一步研究探討[4-5]。

近幾年大量返鄉(xiāng)創(chuàng)業(yè)者在選擇創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目時(shí)一定要審時(shí)度勢，不可盲從。當(dāng)前國家為解決“三農(nóng)”問題每年都有很多強(qiáng)農(nóng)惠農(nóng)政策出臺(tái)，并在各縣市免費(fèi)舉辦多類種植、養(yǎng)殖等培訓(xùn)。想要從事這類創(chuàng)業(yè)的年輕人可以到縣級扶貧辦等政府機(jī)構(gòu)咨詢。返鄉(xiāng)創(chuàng)業(yè)者通過培訓(xùn)后認(rèn)識相關(guān)專家和志同道合者，為今后創(chuàng)業(yè)積累豐富的人脈資源，成功的概率也將大大提升。