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二氧化氯水體消毒劑對細(xì)菌的滅殺效果

2019-10-24 09:09:11覃惠明黃杰羅福廣文衍紅易弋
河北漁業(yè) 2019年8期
關(guān)鍵詞:水產(chǎn)養(yǎng)殖二氧化氯細(xì)菌

覃惠明 黃杰 羅福廣 文衍紅 易弋

摘要:為給水產(chǎn)養(yǎng)殖戶使用二氧化氯進(jìn)行池塘消毒提供科學(xué)依據(jù),以大腸桿菌和無乳鏈球菌為測試對象,研究了二氧化氯在不同濃度和不同時(shí)間下的殺菌效果。結(jié)果表明:使用真實(shí)含量為6%左右的二氧化氯片,用量在6.0kg/hm2時(shí)(按1m水深計(jì))有非常好的殺菌效果,殺菌率超過90%。此外,二氧化氯殺菌時(shí)間較快,在合理的濃度下,處理30~45min左右就能夠達(dá)到較好的效果。

關(guān)鍵詞:二氧化氯;消毒;細(xì)菌;水產(chǎn)養(yǎng)殖

二氧化氯(ClO2)是一種黃綠色到橙黃色的氣體,是國際上公認(rèn)的安全、無毒的綠色消毒劑,無“三致”效應(yīng)(致癌、致畸、致突變),同時(shí)在消毒過程中也不與有機(jī)物發(fā)生氯代反應(yīng)生成可產(chǎn)生“三致作用”的有機(jī)氯化物或其他有毒類物質(zhì)[1]。由于其安全性和高效性,二氧化氯已成為繼第一代消毒劑漂白粉、第二代優(yōu)氯精、第三代強(qiáng)氯精后的第四代消毒劑,是世界公認(rèn)并得到世界衛(wèi)生組織確認(rèn)的A1級(jí)廣譜、安全、高效消毒劑[2]。1983年,美國的環(huán)保部門和食品藥品管理部門以及農(nóng)林牧漁管理部門等先后批準(zhǔn)二氧化氯可作為消毒劑在農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)等領(lǐng)域使用[3]。

近年來,在國內(nèi)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中,二氧化氯作為治療和預(yù)防疾病的消毒劑,因其對魚、蝦、蟹、貝類等具有療效好、毒性低、刺激性小,以及對水產(chǎn)動(dòng)物致病菌以及芽胞等具有較強(qiáng)的殺滅能力等優(yōu)點(diǎn),已得到廣泛應(yīng)用[4]。但目前市面上的二氧化氯消毒劑質(zhì)量參差不齊,使用方法也差異巨大[5]。比如,標(biāo)注有效含量均為10%的產(chǎn)品,各廠家在使用說明上推薦的用量也從750~3000g/hm2(即50~200g/畝,按1m水深計(jì),下同)不盡相同,這給養(yǎng)殖戶們正確使用二氧化氯造成了巨大的困惑。要確定水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用二氧化氯進(jìn)行池塘消毒的準(zhǔn)確用量,就必須對二氧化氯的殺菌效果進(jìn)行詳細(xì)研究。國內(nèi)也有研究者開展了相關(guān)的工作[6-8],但其是按照商品標(biāo)注的二氧化氯含量計(jì)算的工作狀態(tài)下的二氧化氯濃度,而沒有考慮商品本身的含量是否達(dá)標(biāo)。而且這些研究中的濃度是以mg/L為單位,而不是養(yǎng)殖戶習(xí)慣的g/畝。這樣的結(jié)果對于指導(dǎo)養(yǎng)殖戶科學(xué)使用二氧化氯意義不大。因此,筆者采購了市面上2種不同價(jià)位的水產(chǎn)用二氧化氯消毒劑,實(shí)測了其含量,并以養(yǎng)殖戶熟悉的g/畝的用量測試了其抑菌效果,以期為水產(chǎn)養(yǎng)殖戶使用二氧化氯進(jìn)行池塘消毒提供科學(xué)依據(jù)。

1材料

1.1二氧化氯

本研究中使用的2個(gè)品牌的一元二氧化氯消毒劑均從廣西柳州市本地市場購買,品牌A零售價(jià)20元/kg,品牌B售價(jià)26元/kg,商品標(biāo)注二氧化氯含量均為10%。

1.2菌種和培養(yǎng)基

實(shí)驗(yàn)所使用的大腸桿菌為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)大腸桿菌JM109,無乳鏈球菌分離自羅非魚[9],均由廣西科技大學(xué)微生物研究室提供。培養(yǎng)細(xì)菌所用腦心浸液肉湯(BHI)培養(yǎng)基購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司。

1.3化學(xué)試劑

本研究中所使用到的NaCl、KI等化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。

2方法

2.1二氧化氯含量測定

二氧化氯含量測定采用國標(biāo)GB/T20783-2006和改良五步碘量法進(jìn)行。改良五步碘量法具體操作步驟參考文獻(xiàn)[10]。最后根據(jù)所取二氧化氯片的質(zhì)量和溶解體積換算成固體產(chǎn)品中二氧化氯的含量。

2.2細(xì)菌培養(yǎng)

按說明書制備BHI液體和固體培養(yǎng)基,分別取10μL大腸桿菌和無乳鏈球菌甘油種于50mLBHI液體培養(yǎng)基中,在37℃培養(yǎng)12h(此時(shí)菌體濃度約為109CFU/mL左右)。然后用滅菌生理鹽水逐級(jí)稀釋200000倍備用(此時(shí)菌體濃度估計(jì)在103~104CFU/mL左右)。

2.3二氧化氯母液制備

準(zhǔn)確稱取1片一元二氧化氯片劑的質(zhì)量,分別按15、30、45和60kg/hm2(即1000、2000、3000和4000g/畝,按1m水深計(jì))的用量換算需要用多少體積的水溶解二氧化氯片。如果換算出來需要的水體積太多,可以減少水的體積,先配制高濃度的溶液,再進(jìn)行稀釋(為保證濃度準(zhǔn)確,每次稀釋最多按10倍進(jìn)行)。

2.4不同用量二氧化氯消毒劑殺菌試驗(yàn)

取2.2中制備的稀釋后的菌液4.5mL,分別取2.3中制備的二氧化氯母液0.5mL混合均勻,此時(shí)二氧化氯工作濃度分別為1.5、3.0、4.5和6.0kg/hm2(即按1m水深計(jì),分別為100、200、300、和400g/畝,與水產(chǎn)養(yǎng)殖中二氧化氯的常規(guī)用量一致),同時(shí)設(shè)置不處理組作為對照。室溫放置1h后取100μL涂布BHI固體平板(每個(gè)濃度涂布3個(gè)平板),37℃培養(yǎng)12h后,對長出的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),再計(jì)算不同濃度二氧化氯的殺菌率。為便于計(jì)數(shù)和提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性,不處理組平板的菌落數(shù)控制在200~500個(gè)左右為宜,若菌落數(shù)太少或太多,則改變2.2中稀釋的倍數(shù)。

2.5不同處理時(shí)間下二氧化氯消毒劑的殺菌試驗(yàn)

根據(jù)2.4的試驗(yàn)結(jié)果,選擇一個(gè)合理的二氧化氯濃度,按2.4的方法混合菌液和二氧化氯母液,分別處理15、30、45、60、90和120min后涂布平板,37℃培養(yǎng)12h后平板計(jì)數(shù),并計(jì)算不同處理時(shí)間下的殺菌率。

3結(jié)果與分析

3.1二氧化氯含量測定

采用國標(biāo)GB/T20783-2006和改良五步碘量法分別對2個(gè)品牌的二氧化氯消毒劑的含量進(jìn)行了測定,結(jié)果見表1。

6.1從國標(biāo)法的測定結(jié)果可以看出品牌A二氧化氯有效含量為3.2%,品牌B為6.3%,均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于包裝袋上標(biāo)注的10%。國標(biāo)法的測定結(jié)果略高于五步碘量法,但差別不大,與趙巧玲等人的研究一致[1]。

3.2不同用量二氧化氯消毒劑的殺菌效果

根據(jù)2.2和2.3所述,我們對不同用量二氧化氯的殺菌效果進(jìn)行了測試,結(jié)果見表2。

從表2可以看出殺菌率與二氧化氯的實(shí)際含量明顯正相關(guān),品牌A實(shí)際含量3%左右,在3.0kg/hm2的用量下殺菌率不到50%,而品牌B實(shí)際含量6%左右,在3.0kg/hm2的用量下殺菌率超過了90%。另外,不同細(xì)菌對二氧化氯的敏感性不同,二氧化氯對大腸桿菌的滅殺效果要明顯優(yōu)于無乳鏈球菌。

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