黎小瑛 謝旭智 沈文濤 言普 庹德財(cái) 周鵬

摘 ?要??本研究以多重PCR技術(shù)鑒定的番木瓜實(shí)生苗兩性株莖尖作為外植體，建立和優(yōu)化了一套組培苗繁殖體系，解決了成齡側(cè)芽來(lái)源的無(wú)根苗催根難和移栽成活率低的問(wèn)題。以‘蔬羅‘蜜紅番木瓜品種的實(shí)生苗，通過(guò)多重PCR鑒定出兩性株，將其莖尖培養(yǎng)于MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖?30 g/L+瓊脂?6 g/L（pH?5.8）上，在28?℃、2000?lx條件培養(yǎng)30 d后，繼代于MS+BA 0.5 mg/L+KT 0.25 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L（pH?5.8）上，在28?℃、2000 lx條件下培養(yǎng)30 d形成較為強(qiáng)壯的無(wú)根苗，接種于1/2MS+IBA 0.75 mg/L+NAA 0.05 mg/L+KT 0.01 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂?6g/L（pH?5.8）上進(jìn)行催根，在28?℃、1500 lx條件下培養(yǎng)20 d后，用不同濃度營(yíng)養(yǎng)生根水和不同處理時(shí)間對(duì)‘蔬羅‘蜜紅無(wú)根苗進(jìn)行移栽試驗(yàn)，以確定最佳催根率和移栽成活率的濃度和時(shí)間。研究結(jié)果表明：多重PCR技術(shù)鑒定性別的準(zhǔn)確率達(dá)98%以上，‘蔬羅在50 mg/L營(yíng)養(yǎng)生根水和8 h處理?xiàng)l件下獲得催根率為81.1%、移栽成活率為91.1%。而‘蜜紅品種則催根率為60%、移栽成活率為86.7%。因此利用這一技術(shù)獲得的結(jié)果相比成齡側(cè)芽?jī)?yōu)勢(shì)明顯，可用于番木瓜種苗的商業(yè)化生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞 ?番木瓜;實(shí)生苗;性別鑒定;催根率;移栽成活率中圖分類(lèi)號(hào)??S667.9??????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼??A

Identification and Establishment of Tissue Propagation System of Hermaphroditic Strains of Papaya Seedling

LI Xiaoying¹， XIE Xuzhi¹， SHEN Wentao^1，2， YAN Pu^1，2， TUO Decai^1，2， ZHOU Peng^1，2*

1. Institute of Tropical Biotechnology and Bioscience， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences?/?Hainan Academy of Tropical Agriculture Resource， Haikou， Hainan 571101， China; 2. Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical Crops， Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Haikou， Hainan 571101， China

Abstract ?In this study， the apical stem of the hermaphroditic strain of papaya seedlings identified by multiple PCR technique was used as the explants to establish and optimize a set of propagation system of papaya seedlings in tissue culture. The problem of rootless seedlings and low survival rate of transplanting were solved. In the experiment， the hermaphrodite plants were identified by multiple PCR and the stem tips were cultured on MS supplement with BA 0.5 mg/L， NAA 0.1 mg/L， sucrose 30 g/L， agar 6g/L （pH?5.8）， and cultured at 28?℃for 30 days. The rootless seedlings were formed and?subdivided into small clusters and planted on the strong seedling medium MS supplement with BA 0.5 mg/L， KT 0.25 mg/L， NAA 0.1 mg/L， sucrose 30 g/L， agar 6g/L （pH 5.8）， cultured at 28?℃and 2000 lx for 30 days. The rootless seedlings?were inoculated on the 1/2MS supplement with IBA 0.75 mg/L， NAA 0.05 mg/L， KT 0.01 mg/L， sucrose 30?g/L， agar 6?g/L （pH 5.8） medium. After being cultured at 28?℃and 1500 lx for 20 days. In order to obtain the best rooting rate and survival rate of transplanting， the rootless seedlings were tested with different concentrations of nutrient rooting water and different treatment time. The results showed that the accuracy of multiple PCR technique for sex identification was over 98%. Under the conditions of 50 mg/L nutrient rooting water and 8 h treatment， the rooting rate of ‘Solo was 81.1%， and the survival rate of transplanting was 91.1%. The rooting rate of ‘Mihong was 60% and the survival rate of transplanting was 86.7%. The results obtained by the technique are superior to those of mature lateral buds， and could be used in the commercial production of papaya seedlings.

Keywords ?papaya; seedling; sex identification; root-inducing rate; transplant survival rate

DOI10.3969/j.issn.1000-2561.2019.09.014

番木瓜（Carica papaya L.）屬番木瓜科番木瓜屬植物，為熱帶、南亞熱帶常綠軟木質(zhì)大型多年速生草本果樹(shù)，常規(guī)生產(chǎn)種植使用種子培育的實(shí)生苗，由于其種性復(fù)雜，一般分為雌株（占20%～30%）、兩性株（占60%～70%）和雄株（占3%～5%）。兩性株所結(jié)果實(shí)由于其果肉厚、果形美觀均一等特點(diǎn)具有商品價(jià)值。因此，利用種子培育實(shí)生苗應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中時(shí)，等株性明確后必須采取“除雄去雌補(bǔ)種兩性”的工序，這會(huì)造成財(cái)力、人力的浪費(fèi)，大大增加了生產(chǎn)成本。成齡側(cè)芽組織培養(yǎng)技術(shù)可解決這一番木瓜生產(chǎn)上的問(wèn)題，但由于該技術(shù)存在外植體滅菌難、催根難和移栽成活率低等問(wèn)題，使得這一技術(shù)未能取代種子實(shí)生苗而規(guī)模化應(yīng)用于生產(chǎn)中^[1-3]。

實(shí)生苗莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)由于番木瓜苗期性別鑒定技術(shù)的研究而得到了開(kāi)發(fā)。何堯聲等^[4]利用分子標(biāo)記技術(shù)篩選獲得了番木瓜性別特異SCAR標(biāo)記的基因片段：番木瓜雄株特異基因片段（1001 bp）、兩性和雄性的特異基因片段（225 bp）設(shè)計(jì)引物，對(duì)番木瓜苗期株性進(jìn)行了多重PCR鑒定，其準(zhǔn)確率幾乎達(dá)到100%，用這一技術(shù)鑒定番木瓜實(shí)生苗株性是完全可行的。但單株批量性別鑒定兩性實(shí)生苗，用于實(shí)際生產(chǎn)中明顯存在成本提高的問(wèn)題，而基于番木瓜實(shí)生苗性別鑒定技術(shù)的組織培養(yǎng)種苗繁育體系的研究至今未見(jiàn)報(bào)道。

番木瓜品種‘蔬羅是主栽品種，生產(chǎn)上對(duì)優(yōu)質(zhì)種苗的需求量較大;‘蜜紅品種是三亞緣之海公司用‘小白和美國(guó)‘line品種雜交選育的品種，由于含糖量高（>15%）、有蜂蜜奶香味，近年來(lái)頗受消費(fèi)者的青睞，果品的需求量大，種苗的需求量也大。因此，本研究利用多重PCR技術(shù)鑒定篩選這2種番木瓜的兩性株進(jìn)行組織培養(yǎng)種苗繁育，建立和優(yōu)化番木瓜實(shí)生苗兩性株組培苗繁殖體系，不僅能解決成齡側(cè)芽來(lái)源的無(wú)根苗催根難和移栽成活率低的問(wèn)題，而且有利于番木瓜實(shí)生苗組培種苗的規(guī)模化生產(chǎn)和應(yīng)用，這對(duì)促進(jìn)番木瓜生產(chǎn)和相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1??材料與方法

1.1材料

每年9—11月份選擇晴天午后3：00—5：00，從中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所番木瓜課題組實(shí)驗(yàn)田栽培的‘蔬羅‘蜜紅母株上采集外表呈“三畫(huà)黃”的番木瓜果實(shí)，用無(wú)菌水清洗番木瓜3次，轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)后，用70%酒精仔細(xì)擦洗果實(shí)表面;若果實(shí)較小，也可將整個(gè)番木瓜放入6%次氯酸鈉溶液里浸泡，盡量使其淹沒(méi)，過(guò)程中加以搖晃，8 min后取出，用無(wú)菌水泡洗4～5次;把消毒紙墊在番木瓜下面后，用消過(guò)毒的刀子慢慢切開(kāi)番木瓜，取出種子放到無(wú)菌濾紙上晾曬，然后用鑷子把種子表面的膜去除，直接播種到MS或繼代培養(yǎng)基中，每瓶培養(yǎng)基宜播種5～8粒種子，27～28?℃，1500 lx光照12 h培養(yǎng)2～3周形成小苗備用。

預(yù)備實(shí)驗(yàn)中選擇‘蔬羅（A）、‘日升（B）、‘穗中紅（C）、‘臺(tái)農(nóng)2號(hào)（D）、‘蜜紅（F）等5個(gè)品種（系）大田兩性株、雄株和雌株的嫩葉提取DNA進(jìn)行多重PCR驗(yàn)證。本預(yù)備實(shí)驗(yàn)中成齡植株兩性株的DNA提取方法參照文獻(xiàn)[4]。

營(yíng)養(yǎng)生根劑：雙吉爾-GGR（含氨基酸水溶肥料）為北京艾比蒂生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1??實(shí)生苗性別鑒定??（1）實(shí)生苗葉片DNA提取??培養(yǎng)20 d后種子萌發(fā)出幼苗，選取10株番木瓜幼苗分別在培養(yǎng)瓶底編號(hào)為1～10。在超凈臺(tái)用消過(guò)毒的剪刀剪下1～2片嫩葉（約100～200 mg），裝入相應(yīng)編號(hào)的離心管里。采用TIANGEN公司生產(chǎn)的植物基因試劑盒提取總DNA，具體操作方法見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。

（2）性別鑒定特異引物合成??參考文獻(xiàn)[4-5]利用分子標(biāo)記技術(shù)篩選獲得的番木瓜性別特異SCAR標(biāo)記的基因片段：番木瓜雄株特異基因片段（1001?bp）、兩性和雄性的特異基因片段（225?bp）設(shè)計(jì)并合成引物。225 bp引物：P1 5?-GCACGATTTAGATTAGATGT-3?;P2 5?-GGAT?AGCTTGCCCAGGTCAC-3?。1001 bp引物：P3 5?-GGGCTAGTCAATGTGCTAATGG-3?和P4 5?-G?GGCTAGTCATCACTATCGC-3?。

（3）多重PCR擴(kuò)增和電泳分析??預(yù)備實(shí)驗(yàn)：選擇‘蔬羅（A）、‘日升（B）、‘穗中紅（C）、‘臺(tái)農(nóng)2號(hào)（D）、‘蜜紅（F）等5個(gè)品種（系）兩性株、雄株和雌株進(jìn)行多重PCR驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。采用25 ?L反應(yīng)體系：Taq酶Mix緩沖液12.5 ?L，4種引物各0.5 ?L，基因組DNA 1 ?L，補(bǔ)足ddH₂O至25 ?L。擴(kuò)增反應(yīng)：94?℃，3 min后，進(jìn)行94?℃，30 s;55?℃，30 s;72?℃，1 min;30個(gè)環(huán)循。1.5%瓊脂糖凝膠電泳：在120 V電壓下電泳20 min。電泳結(jié)束后，將凝膠放入凝膠成像儀里觀察分析多重PCR擴(kuò)增結(jié)果。

檢測(cè)實(shí)驗(yàn)：采用上述同樣方法對(duì)‘蔬羅‘蜜紅無(wú)菌實(shí)生苗進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增，按事先編號(hào)對(duì)所屬材料進(jìn)行擴(kuò)增及電泳分析，記錄屬于兩性株的番木瓜實(shí)生苗編號(hào)，取其莖尖作為下一步組織培養(yǎng)繁育的材料。

1.2.2??實(shí)生苗兩性株無(wú)根苗誘導(dǎo)及繁殖??取經(jīng)性別鑒定為‘蔬羅‘蜜紅兩性株的幼苗莖尖，接種于MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6 g/L（pH=5.8）上，在28?℃、2000 lx條件培養(yǎng)約30 d形成叢芽，分割成小叢芽接種于MS+BA 0.5 mg/L+KT 0.25 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂?6g/L（pH=5.8）上，在28 ℃、2000 lx條件培養(yǎng)30 d進(jìn)行繼代及壯苗培養(yǎng)。

1.2.3 ?實(shí)生苗兩性株生根誘導(dǎo)及移栽試驗(yàn)??對(duì)檢驗(yàn)獲得的‘蔬羅番木瓜兩性實(shí)生苗莖尖進(jìn)行繼代培養(yǎng)，待擴(kuò)繁獲得繼代苗并壯苗后，將無(wú)根苗分單株接種于1/2MS+IBA 0.75 mg/L+NAA 0.05 mg/L+KT 0.01 mg/L+蔗糖?30? g/L+瓊脂6 g/L（pH=5.8）上，每次試驗(yàn)接種30株，重復(fù)3次。其次利用對(duì)比試驗(yàn)將蔬羅無(wú)根苗浸泡在濃度梯度分別為10、25、50、75 mg/L的營(yíng)養(yǎng)生根水中6 h，確定成苗率最高的生根水濃度，再以此濃度做不同梯度浸泡時(shí)間試驗(yàn)，分別為2、4、6、8 h，最終確定成苗率最高的生根水浸泡時(shí)間。

挑選生根培養(yǎng)基里長(zhǎng)勢(shì)良好的‘蔬羅木瓜苗，根據(jù)1.2.3獲得的生根水最佳催根濃度與最佳浸泡時(shí)間浸泡木瓜苗，分3次移栽，每次分別移栽了38、36、39株，做好試驗(yàn)記錄，統(tǒng)計(jì)實(shí)生苗兩性株的移栽存活率。

以上催根試驗(yàn)同時(shí)以‘蜜紅品種作對(duì)比驗(yàn)證。

1.2.4??實(shí)生組培苗田間株性鑒定??經(jīng)多重PCR篩選出的實(shí)生兩性株經(jīng)過(guò)組培苗培育移栽田間4個(gè)月，待其開(kāi)花結(jié)果時(shí)從花型上觀察性別，以此來(lái)驗(yàn)證PCR技術(shù)鑒定的番木瓜實(shí)生苗性別的準(zhǔn)確性。

1.3數(shù)據(jù)處理

利用Excel軟件和SAS軟件對(duì)試驗(yàn)得到的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差顯著性分析。

2??結(jié)果與分析

2.1利用多重PCR鑒定實(shí)生苗性別結(jié)果

多重PCR預(yù)備實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增結(jié)果如圖1。以雄株總DNA為模板得到1條1001 bp和1條225 bp的擴(kuò)增產(chǎn)物帶，以雌株總DNA為模板無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物，以?xún)尚灾昕侱NA為模板得到1條225 bp的擴(kuò)增產(chǎn)物帶。將多重PCR擴(kuò)增獲得的1001 bp和225 bp的擴(kuò)增產(chǎn)物回收、克隆并送到大連Takara公司進(jìn)行測(cè)序，應(yīng)用Vector NTI 9.0分析軟件對(duì)測(cè)序后的序列進(jìn)行分析，測(cè)序后的序列與番木瓜性別特異基因序列的同源性達(dá)到99%以上?？梢?jiàn)根據(jù)多重PCR擴(kuò)增結(jié)果，能夠準(zhǔn)確地將番木瓜兩性株鑒定出來(lái)，可用于番木瓜種子實(shí)生苗兩性株的篩選。

利用上述方法對(duì)10株‘蔬羅番木瓜實(shí)生苗進(jìn)行多重PCR性別鑒定，擴(kuò)增結(jié)果（圖2）顯示：1、3、5、7號(hào)DNA樣品能擴(kuò)增出225 bp條帶，說(shuō)明所對(duì)應(yīng)編號(hào)的4株番木瓜實(shí)生苗則為兩性株。2、4、6、8、9、10未擴(kuò)增出DNA條帶，則為雌株。本實(shí)驗(yàn)所選10株實(shí)生苗未測(cè)出雄株，‘蜜紅多重PCR性別鑒定結(jié)果與‘蔬羅基本相符。結(jié)合后期田間的實(shí)際植株生長(zhǎng)發(fā)育的觀察情況，這種性別鑒定技術(shù)的準(zhǔn)確率達(dá)98%以上，可用于實(shí)生苗幼齡期的兩性株鑒定。

2.2采用實(shí)生苗兩性株繁殖無(wú)根苗結(jié)果

這一階段的所需的培養(yǎng)基成分、培育程序與成齡側(cè)芽基本一致^[6-7]，主要由于番木瓜組織培養(yǎng)的基因依賴(lài)性較大，但從生長(zhǎng)狀態(tài)上來(lái)看，實(shí)生苗莖尖培養(yǎng)比成齡側(cè)芽生長(zhǎng)速度快，而且繁殖率相比較高。從方差分析結(jié)果來(lái)看，在0.05水平差異顯著。

2.3誘導(dǎo)實(shí)生兩性組培苗生根及其移栽結(jié)果

2.3.1??最佳生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的生根誘導(dǎo)結(jié)果??試驗(yàn)結(jié)果顯示，以成齡側(cè)芽組培篩選出的最佳生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合IBA 0.75 mg/L+NAA 0.05 mg/L+KT 0.01 mg/L配制的生根培養(yǎng)基對(duì)實(shí)生兩性組培苗的生根誘導(dǎo)效果更加明顯，每次試驗(yàn)的催根率都要高于成齡側(cè)芽組培苗，其3次試驗(yàn)的平均催根率達(dá)到81.1%，比成齡側(cè)芽組培苗66.7%高出約14.4%（表1），方差顯著性分析結(jié)果為差異顯著（P<0.05）。而且番木瓜實(shí)生苗來(lái)源的組培苗無(wú)論是生長(zhǎng)周期還是長(zhǎng)勢(shì)都比成齡側(cè)芽來(lái)源的組培苗好，多數(shù)木瓜苗在繼代2～3代后就能長(zhǎng)到10 cm，且十分健壯，這在成齡側(cè)芽組培苗培養(yǎng)過(guò)程中比較少見(jiàn)。從不同番木瓜品種的‘蜜紅和‘蔬羅實(shí)生苗來(lái)源的組培苗在催根率上可以看到，‘蔬羅的催根率比‘蜜紅的催根率高21.1%（表2），表明不同的番木瓜品種在同一培養(yǎng)基質(zhì)上產(chǎn)生差異明顯的結(jié)果，這進(jìn)一步證明在番木瓜組培苗培育過(guò)程中存在著品種或基因依賴(lài)性問(wèn)題，因此研究通用型的番木瓜組培苗培育規(guī)程，包括培養(yǎng)基質(zhì)，對(duì)實(shí)際生產(chǎn)中大規(guī)模推廣應(yīng)用番木瓜組培苗替代種子實(shí)生苗具有極其重要的現(xiàn)實(shí)意義^[2，8]。本研究利用幼態(tài)型外植體解決成齡側(cè)芽來(lái)源的番木瓜組培苗催根率和移栽成活率低的問(wèn)題，至于通用型培養(yǎng)規(guī)程還有待于更深入的研究。

2.3.2 ?生根劑最佳濃度和浸泡時(shí)間作用下的移栽成活結(jié)果??利用誘導(dǎo)生根后的番木瓜實(shí)生兩性組培苗做移栽試驗(yàn)。在成齡側(cè)芽組培苗試驗(yàn)中篩選出的最佳濃度50 mg/L的生根劑里浸泡8 h的基礎(chǔ)上，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，統(tǒng)計(jì)3次試驗(yàn)的成活率分別為92.1%、91.7%、89.7%，其平均成活率達(dá)到91.1%，比成齡側(cè)芽組培苗87.5%的成活率稍顯高，且番木瓜苗生長(zhǎng)速度很快，對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性則更強(qiáng)^[9-10]。方差顯著性分析結(jié)果為差異顯著（P<0.05）。以上試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，采用同樣的試驗(yàn)條件和方法，實(shí)生兩性組培苗對(duì)于生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和生根劑最佳濃度以及浸泡時(shí)間的應(yīng)激性效果更好（表3）?？赡茉蚴遣煌M織器官對(duì)于基因表達(dá)和應(yīng)激能力不一樣^[11-12]。

同時(shí)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也發(fā)現(xiàn)，不同番木瓜品種（‘蔬羅‘蜜紅）兩性組培苗的最佳生根劑濃度和浸泡時(shí)間下的移栽成活率也不盡相同（表4），但差異不大，方差顯著性分析結(jié)果為不顯著（P>0.05）。從總體效果上看實(shí)生苗兩性株組培苗比成齡側(cè)芽組培苗優(yōu)勢(shì)明顯，能滿(mǎn)足商業(yè)生產(chǎn)的水平。

2.4從成齡株植性狀上驗(yàn)證多重PCR性別鑒定的結(jié)果

實(shí)生兩性組培苗經(jīng)過(guò)田間移栽4個(gè)月后長(zhǎng)大開(kāi)花結(jié)果，從花型上觀察組培苗性別兩性株率為100%，這一結(jié)果表明本研究利用多重PCR技術(shù)鑒定的性別準(zhǔn)確率達(dá)到100%，而且長(zhǎng)勢(shì)良好，生長(zhǎng)均一（圖3，圖4）。因此，利用多重PCR技術(shù)鑒定性別后進(jìn)行兩性組培苗的研發(fā)的結(jié)果技術(shù)可靠性相當(dāng)高，這為利用番木瓜種子實(shí)生苗作為外植體進(jìn)行組培快繁提供了保證，同時(shí)也為其他作物組培快繁技術(shù)研發(fā)提供了技術(shù)參考。

3??討論

3.1避免在鑒定番木瓜實(shí)生苗兩性株性別時(shí)產(chǎn)生“假陽(yáng)性”結(jié)果

在本研究的試驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)實(shí)生苗采用了PCR技術(shù)做性別鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)，利用何堯生等^[4]報(bào)道的多重PCR技術(shù)方法對(duì)番木瓜實(shí)生苗進(jìn)行性別鑒定，結(jié)果出現(xiàn)極少量的性別“假陽(yáng)性”——即雌株或兩性株被鑒定為雄性或既是雄株又是兩性株的情況，給鑒定的準(zhǔn)確率帶來(lái)一定的不確定性。本研究用同樣的方法提取番木瓜總DNA，并以此作為模板采用單一PCR技術(shù)，同時(shí)調(diào)整PCR循環(huán)參數(shù)，鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)準(zhǔn)確率相當(dāng)高，經(jīng)分析推測(cè)產(chǎn)生這樣的結(jié)果可能是多重PCR在擴(kuò)增過(guò)程中不同引物間相互作用或反應(yīng)體系的復(fù)雜性造成的“假陽(yáng)性”。因此，筆者采用單一PCR技術(shù)盡管在實(shí)驗(yàn)步驟上會(huì)繁瑣一點(diǎn)，即把每個(gè)DNA模板按兩份分開(kāi)加不同的引物，這能保證穩(wěn)定準(zhǔn)確的鑒定結(jié)果，對(duì)進(jìn)一步開(kāi)展實(shí)生苗組培種苗技術(shù)研發(fā)具有重要意義。

3.2需要對(duì)實(shí)生苗組織培養(yǎng)體系作進(jìn)一步的優(yōu)化和深入研究

由于番木瓜株性復(fù)雜，種子組培苗在初始培養(yǎng)的苗期無(wú)法保證株性一致，需要對(duì)株苗做性別鑒定，待篩選到具有商業(yè)化價(jià)值的兩性株時(shí)作為外植體進(jìn)行組培研究，雖然這一技術(shù)較易獲得無(wú)菌材料，并且材料為幼態(tài)更易進(jìn)行后續(xù)的增殖及誘導(dǎo)生根，但以此培育的組培種苗在性狀（如果型、品質(zhì)、產(chǎn)量及抗病性等）上難以預(yù)測(cè)，這在一定程度上需要其他分子及生化證據(jù)的支持，因此除了對(duì)性別進(jìn)行鑒定外，還應(yīng)對(duì)各實(shí)生苗的遺傳性狀進(jìn)行確定，包括果實(shí)的品質(zhì)、抗病、耐寒、矮化、高產(chǎn)等，而這些性狀僅在植株生長(zhǎng)到成熟階段才能確定，這需要在今后的工作中研究獲得相關(guān)的分子證據(jù)及佐證技術(shù)方法證實(shí)苗期的性狀。成齡側(cè)芽在組培過(guò)程中除了預(yù)備期外植體消毒難，以及老態(tài)化而導(dǎo)致低誘根率和低移栽成活率問(wèn)題外，其培育的組培苗不僅與母體一樣的兩性株，而且具有明確的與母體一樣的優(yōu)良性狀。這是采用成齡側(cè)芽進(jìn)行組培種苗研發(fā)的最大優(yōu)勢(shì)，也是目前利用種子實(shí)生苗進(jìn)行組培苗快繁無(wú)法比擬的^[6]。因此番木瓜組培種苗生產(chǎn)上還是優(yōu)先采用兩性成齡側(cè)芽開(kāi)展的生產(chǎn)，而實(shí)生兩性組培苗則有待于開(kāi)展幼苗期與品質(zhì)、產(chǎn)量等相關(guān)的分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究。筆者認(rèn)為兩者可以結(jié)合一起運(yùn)用于生產(chǎn)中，即利用實(shí)生兩性組培苗技術(shù)建立多個(gè)株系，通過(guò)田間比較篩選優(yōu)良母株作為后期兩性成齡側(cè)芽組培苗培養(yǎng)的材料，這樣就有可能保證組培種苗在生長(zhǎng)速度、遺傳穩(wěn)定、植株質(zhì)量等方面都能取得俱佳的效果。針對(duì)番木瓜組培苗的快速繁殖，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)實(shí)生兩性組培苗的基礎(chǔ)及技術(shù)研究，大力推廣組培苗的規(guī)?；a(chǎn)，并通過(guò)政府、研究機(jī)構(gòu)等渠道加強(qiáng)宣傳番木瓜組培種苗的優(yōu)勢(shì)，讓更多生產(chǎn)商參與進(jìn)來(lái)，加快推進(jìn)番木瓜產(chǎn)業(yè)更快的發(fā)展，同時(shí)也堅(jiān)信未來(lái)番木瓜常規(guī)的種子繁殖也會(huì)逐漸被組織培養(yǎng)所取代^[13-14]。

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