張志強(qiáng) 江洪波 梁雪蘭

摘?要：目的：研究不同等級(jí)麥冬化學(xué)成分是否有差異。方法：通過(guò)測(cè)試不同等級(jí)麥冬提取物的氫核磁共振譜，并通過(guò)比較氫譜對(duì)比，比較不同等級(jí)麥冬差異。結(jié)果：不同等級(jí)麥冬的氫核磁共振譜整體差異不大，不能直接區(qū)分，但通過(guò)分段積分比較可以看出不同等級(jí)麥冬之間存在化學(xué)成分差異。結(jié)論：利用氫核磁共振分段積分比較法，可以客觀區(qū)分不同等級(jí)麥冬之間的差異，也可以為其它所含成分相似但比例不同的藥材分析提供參考。

關(guān)鍵詞：氫核磁共振;麥冬;等級(jí)

中藥材在商品上有等級(jí)劃分，比如根據(jù)不同產(chǎn)地，質(zhì)量，大小等因素進(jìn)行諸如“一等、二等、三等”等的等級(jí)劃分，或者采用“統(tǒng)貨”來(lái)表示藥材的商品規(guī)格。但是中藥飲片在藥店或者醫(yī)院卻不分等級(jí)而進(jìn)行出售或者處方用藥，因此二者有一定的矛盾。這就給中藥的臨床應(yīng)用及中藥的科學(xué)研究帶來(lái)疑惑。

不同等級(jí)藥材之間到底有多大的差異？氫核磁共振圖譜可以客觀的反映中藥材中的幾乎所有有機(jī)化合物的種類和相對(duì)含量，從而區(qū)別出不同等級(jí)中藥材之間的差異，明確等級(jí)之間的差異。

麥冬為百合科沿階草屬植物麥冬Ophiopogon japonicus Ker-Gawl.的干燥塊根，藥性甘、微苦、微寒，歸胃、肺心經(jīng)，具有養(yǎng)陰生津、潤(rùn)肺清心之功效。自古以來(lái)為常用中藥，臨床上應(yīng)用廣泛，保護(hù)心肌缺血和心肌梗塞;免疫調(diào)節(jié)作用;抗衰老作用;降低血糖作用;抗腫瘤作用;抗血栓及血液流變學(xué)改變及其它方面的作用。[1]麥冬的化學(xué)成分主要有甾體皂苷、高異黃酮、多糖、氨基酸、揮發(fā)油等?，F(xiàn)代研究表明天然高異黃酮類成分具有良好的抗炎、抗應(yīng)激、抗組胺、鎮(zhèn)咳、心血管保護(hù)功能和磷酸化抑制劑等作用。[2]

本研究課題以中藥麥冬為研究對(duì)象，利用氫核磁共振技術(shù)探究不同等級(jí)麥冬之間的化學(xué)差異。進(jìn)而推廣應(yīng)用之其它中藥材的等級(jí)區(qū)分。

對(duì)于不同等級(jí)藥材的區(qū)分，大多是根據(jù)外觀、氣味等，對(duì)利用化學(xué)成分的區(qū)分僅僅是在某單一成分或一類成分的區(qū)分。氫核磁共振譜可以較為全面的反映藥材的化學(xué)成分和種類，故利用此方法進(jìn)行整體分析。

1 儀器、試藥與軟件

1.1 儀器

Sartorius BS 224s電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）SENCOR-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器儀;W201D恒溫水浴鍋（上海申順生物科技有限公司）;Bruker AV II-600核磁共振儀。

1.2 藥物、試劑與軟件

選取四川綿陽(yáng)三臺(tái)花園鎮(zhèn)、桐君閣大藥房麥冬樣品。對(duì)不同來(lái)源樣品按重量進(jìn)行分類，并按傳統(tǒng)麥冬規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)：

一等麥冬：干貨。呈紡錘形半透明體。表面淡白色，木質(zhì)心細(xì)軟。味微甜，嚼之少粘性。每50克190粒以內(nèi)，無(wú)須根、烏花、油粒、雜質(zhì)、霉變。

二等麥冬：干貨。呈紡錘形半透明體。表面淡白色。斷面淡白色。木質(zhì)心細(xì)軟。味微甜，嚼之少粘性。每50克300粒以內(nèi)。無(wú)須根、烏花、油粒、雜質(zhì)、霉變。

三等麥冬：干貨。呈紡錘形半透明體。表面淡白色。斷面淡白色。木質(zhì)心細(xì)軟。味微甜，嚼之少粘性。每50克300粒以外，最小不低于麥粒大。間有烏花、油粒不超過(guò)10%，無(wú)須根、雜質(zhì)、霉變。）。具體麥冬來(lái)源如右表所示：

DMSO-d6（ARMAR chemicals）;甲醇（分析純）。麥冬對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。數(shù)據(jù)分析軟件：Excel;Mestre-C;SIMCA-P 11.0。

2 方法與結(jié)果

2.1 總特征物的提取方法

本試驗(yàn)的對(duì)象是麥冬的整體成分，選取甲醇作為試驗(yàn)提取溶劑。提取方式為：將麥冬粉碎，取10g，加入甲醇（每次50ml），50℃水浴溫浸提取三次，每次1h;合并濾液，減壓濃縮至無(wú)液體，再真空干燥30分鐘。稱重，計(jì)算收率。后將提取物用50ml水分散、溶解，用乙酸乙酯萃取三次，每次50ml，合并乙酸乙酯萃取液，回收溶劑得乙酸乙酯萃取物。萃余相回收溶劑，得到水溶性成分。分別稱取乙酸乙酯萃取物和水溶性成分0005g提取物，用0.5ml DMSO-d6溶解，制得供1H-NMR譜測(cè)定樣品溶液。

2.2 1H-NMR圖譜的測(cè)定條件

1H-NMR的測(cè)定條件：恒溫在296K，以DMSO-d6作為內(nèi)鎖，掃描128次，采樣時(shí)間域?yàn)?4 k，譜寬為12335.526 Hz，采樣時(shí)間為2.66 s，脈沖間隔D1為3.00 s，采用標(biāo)準(zhǔn)的預(yù)飽和脈沖序列（zgpr）壓制水峰信號(hào)，采用CPMG脈沖序列抑制大分子信號(hào)。

2.3 1H-NMR圖譜的轉(zhuǎn)換

將測(cè)定獲得的各樣品1H-NMR自由衰減（FID）信號(hào)，導(dǎo)入MestRe-C軟件，分別進(jìn)行傅立葉（FT）轉(zhuǎn)換、象限調(diào)整、基線校正及以TMS峰作內(nèi)標(biāo)調(diào)整化學(xué)位移值，即獲得各樣品相應(yīng)的1H-NMR圖譜，可供指紋圖譜分析。將1H-NMR圖譜去掉DMSO-d6溶劑峰，按0.05化學(xué)位移值單位進(jìn)行分段、積分、調(diào)整相位，即得到每個(gè)樣本的各化學(xué)位移值段與相對(duì)應(yīng)的信號(hào)峰面積積分值。本試驗(yàn)有18個(gè)樣本，即構(gòu)成18×196數(shù)據(jù)矩陣，供模式識(shí)別分析。

2.4 麥冬的1H-NMR數(shù)據(jù)的分析及結(jié)果

A，B，C三個(gè)系列的不同等級(jí)麥冬的乙酸乙酯萃取部分和水溶性部分的1H-NMR圖譜在0-10信號(hào)出峰位置均顯示出高度的一致性，幾乎沒(méi)有差別，說(shuō)明不同等級(jí)的麥冬的脂溶性和水溶性成分所含的主要成分一致。不同等級(jí)間的麥冬只有積分值的微小差異，從圖譜上無(wú)法區(qū)分出來(lái)。

2.5 不同等級(jí)麥冬分段積分值比較

A系列樣品有較好的區(qū)分度，而且不同等級(jí)之間存在的差異比較確定，故用A系列樣品為樣本進(jìn)行不同等級(jí)麥冬氫譜分段積分值比較。

2.5.1 脂溶性部分

對(duì)A系列樣品的氫譜用軟件處理，從10-1每隔1個(gè)單位進(jìn)行自動(dòng)積分，排除溶劑段2-3。并對(duì)積分?jǐn)?shù)值進(jìn)行相對(duì)比處理，便于比較各個(gè)樣品之間的相互比值。不同樣品在A1和A2積分相對(duì)值非常接近，這和主成分分析結(jié)果非常一致。三等麥冬A5及麥冬須根A6的1-4的積分值在整個(gè)積分值的比例非常大，比一二等級(jí)比例更大，說(shuō)明低等級(jí)的樣品所含脂溶性成分的比例相對(duì)較大。

2.5.2 水溶性部分

不同樣品在A1，A2和A3在δ3-4積分值占整個(gè)積分值的比例顯著高于A4，A5，A6。說(shuō)明單粒較重的一，二等級(jí)麥冬δ3-5的信號(hào)顯著高于三等麥冬及麥冬須根，按資料分析，這段區(qū)間信號(hào)應(yīng)該來(lái)自于糖信號(hào)，故推斷高等級(jí)的麥冬所含的糖顯著高于低等級(jí)的麥冬。

3 討論

（1）對(duì)三個(gè)系列不同等級(jí)的麥冬進(jìn)行脂溶性部分和水溶性部分的氫核磁共振譜的測(cè)定，通過(guò)直接分析氫譜發(fā)現(xiàn)，不同等級(jí)麥冬之間的氫譜非常相似，直接觀察出峰位置幾乎一摸一樣。說(shuō)明不同等級(jí)的麥冬所含的主要成分是一致的。

（2）但還是發(fā)現(xiàn)不同等級(jí)麥冬相同位置的峰的相對(duì)高度有所差異。說(shuō)明不同等級(jí)的麥冬所含主要成分之間的比例是有所差異的，說(shuō)明不同等級(jí)的麥冬之間所含主要成分的比例是有差異的。

（3）通過(guò)對(duì)不同等級(jí)麥冬氫譜在各個(gè)區(qū)間的積分值比較，一二等的麥冬水溶性部分的氫譜在δ3-5區(qū)間的積分值比例顯著高于三等級(jí)和須根的比例，這一區(qū)間是糖的信號(hào)區(qū)間，故等級(jí)較高的麥冬含有更多的糖類。而脂溶性成分氫譜在δ1-4區(qū)間，低等級(jí)麥冬積分值比例顯著高于高等級(jí)麥冬，這與以上分析一致。故等級(jí)越高的麥冬，即單粒越重的麥冬，所含糖的比例越高。等級(jí)越低的麥冬所含脂溶性成分的比例越高。所以不同等級(jí)的麥冬主要化學(xué)成分種類沒(méi)有顯著差異，主要差異體現(xiàn)在所含糖類和脂溶性成分整體的比例差異。在應(yīng)用是應(yīng)該有所差異，故臨床應(yīng)用時(shí)，不同等級(jí)麥冬所含的脂溶性成分是有差異的，同等用量的不同等級(jí)的麥冬，所含的水溶性成分和脂溶性成分是不一樣的，應(yīng)加以考慮。不同等級(jí)的麥冬所含的化學(xué)成分比例有所差異，在臨床用藥時(shí)應(yīng)加以考慮，因等級(jí)不同的麥冬，在同等重量的情況下，有效成分含量一定有差異，而且等級(jí)差別越大，有效成分含量差異也越大。現(xiàn)還無(wú)法具體區(qū)分含量差異究竟有多大，還進(jìn)一步研究?，F(xiàn)在存在的用藥問(wèn)題是：高等級(jí)的藥材均進(jìn)入了藥店展示銷售，而低等級(jí)的產(chǎn)品均進(jìn)入藥廠制成中成藥，臨床療效就無(wú)法確定。故對(duì)于不同等級(jí)的藥品有效成分的含量差異的研究應(yīng)進(jìn)一步深入，真正保證藥材的療效。

參考文獻(xiàn)：

[1]蔣鳳榮，張旭，范俊，等.麥冬藥理作用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2006，24（2）：236-237.

[2]江洪波，黃靜，郭明娟，等.天然高異黃酮研究進(jìn)展[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2007，42（2）：118-126.