景贊，劉超，劉曉碧

（樂山市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，四川樂山 614000）

硝苯菌酯主要用于防治柑橘類、核果類、仁果類、瓜類蔬菜和觀賞植物的紅蜘蛛和白粉病，有良好的防治效果，同時還具有殺螨卵的作用，是從敵螨普中分離出來具有最高生物活性的異構(gòu)體之一。目前，對于硝苯菌酯的研究主要集中在病蟲害防治方面[1-5]。GB2763-2016 規(guī)定了敵螨普的臨時限量，但缺少相應(yīng)的檢測方法，因此對于硝苯菌酯的風(fēng)險評估很難開展[6]。隨著近年來人們對食品安全的重視，農(nóng)藥殘留問題不容忽視，相應(yīng)的對檢驗(yàn)檢測手段也提出了更高的要求。當(dāng)前質(zhì)譜類儀器普及程度逐年加大，加之質(zhì)譜類儀器有著定性、定量準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，檢驗(yàn)檢測標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用到此類儀器的比例也在逐步提高[7-8]。有少量采用液質(zhì)聯(lián)用檢測硝苯菌酯的報道，但缺少相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)，而且檢測范圍也未涉及到油桃。本研究結(jié)合工作實(shí)際，應(yīng)用氣質(zhì)聯(lián)用和固相萃取技術(shù)，建立了一種快速檢測硝苯菌酯的方法，為硝苯菌酯標(biāo)準(zhǔn)檢測方法的建立提供一定的數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

油桃，購于超市。

硝苯菌酯標(biāo)準(zhǔn)品，100 μg/mL，購于壇墨質(zhì)檢科技有限公司；乙腈、丙酮等均為色譜純，購于百靈威科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

氣質(zhì)聯(lián)用儀，TQ-8030，島津中國有限公司；高速均質(zhì)器，T25，IKA 儀器設(shè)備有限公司；高速冷凍離心機(jī)，TGL16M，長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司。CleanertS C18（2 g/12 mL），Cleanert PestiCarb/NH2（0.5 g/6 mL），均購于博納艾杰爾科技有限公司。

1.3 硝苯菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

取硝苯菌酯標(biāo)準(zhǔn)品1 支，準(zhǔn)確移取1 mL，用丙酮稀釋定容至10 mL，混勻，配制成濃度為10 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，冷藏備用。按照樣品制備方法，提取空白基質(zhì)溶液，用于不同濃度標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的配制。

1.4 樣品提取液的制備

除去樣品不可食用部分，用制樣機(jī)打碎，準(zhǔn)確稱取20 g（精確至0.01 g），加入乙腈50 mL，高速均質(zhì)2 min，加入7 g 氯化鈉，再繼續(xù)均質(zhì)提取1 min，5 000 r/min 冷凍離心5 min，移取乙腈層提取液20 mL，待凈化。

用10 mL 乙腈活化CleanertS C18 柱，移入上述20 mL 提取液，并用15 mL 乙腈洗脫，將收集的溶液在40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至1 mL 左右，在Cleanert PC/NH2柱中加入2 cm 高無水硫酸鈉，加樣前先用4 mL 乙腈+甲苯（3+1）預(yù)洗柱子，當(dāng)液面到達(dá)硫酸鈉的頂部時，迅速將樣品濃縮液轉(zhuǎn)移至凈化柱上，再用少量乙腈洗滌樣液瓶，并將洗滌液移入柱中，用25 mL 乙腈+甲苯（3+1）洗脫，收集所有流出液于雞心瓶中，旋轉(zhuǎn)濃縮近干，再加入5 mL丙酮于40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，進(jìn)行溶劑交換2 次，最后使樣液體積約為1 mL，過0.22 μm 濾膜上機(jī)分析[7]。

1.5 檢測條件

進(jìn)樣口：250 ℃，不分流（高壓進(jìn)樣）；毛細(xì)管柱：Rtx-1701（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；柱溫采用梯度升溫：起始溫度40 ℃（1 min），以25 ℃/min 升至130 ℃，再以10℃/min 升至260 ℃（15 min）；線速度：70 cm/sec；進(jìn)樣體積：1 μL；載氣：高純氦氣。

溶劑延遲：5 min；離子源為電子電離源，溫度220℃；MS 接口溫度：260 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理及質(zhì)譜條件的優(yōu)化

乙腈對絕大多數(shù)農(nóng)藥殘留都有比較好的提取效果[9]，所以本方法選擇乙腈作為提取溶劑，加入氯化鈉飽和水相，使水相與乙腈分層，同時在后期凈化處理時，加入無水硫酸鈉去除多余水分。油桃中存在比較多的糖分、色素、維生素等物質(zhì)，如果不凈化很容易干擾測定結(jié)果，選擇CleanertS C18 柱和Cleanert PC/NH2柱可以去除絕大多數(shù)的干擾物質(zhì)。

農(nóng)藥殘留測定中基質(zhì)效應(yīng)是不可避免的，本研究將丙酮和空白基質(zhì)溶液配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別予以考量，在相同儀器條件下測定，結(jié)果表明空白基質(zhì)溶液配制的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的峰面積要比丙酮配制的高20%左右。為減少基質(zhì)效應(yīng)，標(biāo)準(zhǔn)溶液采用空白基質(zhì)溶液配制。硝苯菌酯在70 eV 電子轟擊下產(chǎn)生的碎片離子如圖1 所示（見下頁），選擇質(zhì)荷比大、響應(yīng)高的碎片離子進(jìn)行二級碎裂，得到定性定量離子對，見表1（下頁），以此建立氣質(zhì)聯(lián)用方法。相比GB23200.8-2016，該方法擴(kuò)大了使用范圍，同時串極質(zhì)譜方法較單極質(zhì)譜，有更低的檢出限和更好的抗干擾能力[10]。

圖1 硝苯菌酯碎片離子質(zhì)譜圖Fig.1 The fragment ions of meptyldinocap

表1 保留時間和質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Retention time and MRM parameters

2.2 線性范圍與檢出限

將硝苯菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液用油桃空白基質(zhì)提取液稀釋成0、0.2、0.5、1、2、4 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，以濃度與對應(yīng)的定量離子色譜峰的峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以3 倍的S/N 計(jì)算該方法的檢出限，以10 倍的S/N 計(jì)算該方法的定量限，計(jì)算結(jié)果以全果計(jì)（下同），結(jié)果見表2。

表2 線性范圍、檢出限和定量限Table 2 Linear range,detection limit and quantitative limit

2.3 加標(biāo)回收率

為驗(yàn)證方法準(zhǔn)確性，向油桃空白樣品中添加硝苯菌酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加濃度為0.05、0.1、0.2 mg/kg 三個水平，依照樣品提取方法制備提取液，平行測定3 次，結(jié)果見表3。空白樣品色譜圖見圖2，加標(biāo)樣品色譜圖見圖3。

表3 加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=3）Table 3 Recoveries and relative standard deviation (n=3)

分析表3 中數(shù)據(jù)可知，硝苯菌酯回收率在77.9%～85.3%，RSD 均低于5%，滿足國家標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)要求。由圖2、3 可以看出，硝苯菌酯保留時間附近無干擾物質(zhì)，峰型對稱，說明前處理凈化效果較好，質(zhì)譜串聯(lián)技術(shù)的運(yùn)用使得方法抗干擾能力更強(qiáng)，定性和定量更為準(zhǔn)確。

圖2 空白樣品總離子流色譜圖Fig.2 Total ion current chromatogram of blank sample

圖3 加標(biāo)樣品總離子流色譜圖Fig.3 Total ion current chromatogram of spiked sample

2.4 精密度

采用濃度為0.3 μg/mL 的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，平行測定6次，測定方法的精密度。該結(jié)果顯示精密度RSD 為3.3%，精密度良好。

3 討論

我國是農(nóng)藥生產(chǎn)和消費(fèi)大國，農(nóng)藥濫用和殘留超標(biāo)現(xiàn)象比較普遍，帶來的安全性問題不容忽視，因此對檢驗(yàn)檢測技術(shù)的要求也越來越高[11-12]。本研究采用乙腈提取，固相萃取柱凈化，利用氣相-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行測定，考察了基質(zhì)效應(yīng)對測定結(jié)果的影響，建立了油桃中硝苯菌酯農(nóng)藥殘留的快速檢測方法。結(jié)果顯示該方法具有較高靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度，線性關(guān)系良好，適合于油桃中硝苯菌酯的日?？焖贆z測。