郭社民姬金霞

（1 河南省濮陽市食品藥品檢驗檢測中心，河南 濮陽 457000；2 河南省濮陽市人民醫(yī)院，河南 濮陽 457000）

石金解毒口服液是結(jié)合多年中醫(yī)臨床應(yīng)用經(jīng)驗研制的醫(yī)院制劑，由金銀花、玄參、地黃、蘆根、連翹、天門冬、梔子、黃芩、龍膽草、甘草、石膏等11味藥材組成。經(jīng)臨床實踐證實，石金解毒口服液具有清熱解毒之功效，用于熱毒雍盛所致發(fā)熱、煩躁口渴、咽喉腫痛、流感、上呼吸道感染見上述癥狀者。石金解毒口服液原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量控制的方法，為提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有效控制其質(zhì)量，保證臨床用藥療效，參照有關(guān)文獻(xiàn)［1-4］，對君藥金銀花的有效成分綠原酸進(jìn)行了定量研究，建立了高效液相色譜法測定石金解毒口服液中綠原酸含量的方法。

1 儀器與試藥

安捷倫1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫）；UVIKONxl型紫外分光光度計（法國塞克曼公司）；XS205DU型電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。綠原酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為：110753-201314）；石金解毒口服液（批號分別為20180726，20181003，20181225）及陰性樣品均由濮陽市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供；甲醇、乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：XBridge C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.4% 磷酸溶液 （13∶87）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長327 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μL。在該色譜條件下，理論塔板數(shù)按綠原酸計算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲備液 精密稱取綠原酸對照品適量，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含綠原酸1.619 5 mg的溶液，作為對照品儲備液。精密量取綠原酸對照品儲備液2 mL，置50 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取石金解毒口服液3 mL，置50 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 取處方中不含金銀花的其它藥材同比例制備的陰性樣品，按“2.2.2”項下的方法，制成陰性對照溶液。

2.3 陰性干擾試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液20 μL，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，結(jié)果表明陰性對照溶液對綠原酸的測定無干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系的考察 分別精密量取對照品儲備液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，置 25 mL 棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。按“2.1”項下色譜條件分別精密吸取20 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，以綠原酸峰面積Y為縱坐標(biāo)、對照品溶液濃度（mg·mL-1）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=3.941×104+19.47，r=0.999 9。結(jié)果表明，綠原酸在0.025 9～0.103 6 mg·mL-1范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 取“2.2.1”項下的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測定綠原酸峰面積，計算RSD為0.37%（n=5），表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，室溫下放置，于0，2，4，6，8，10 h，精密吸取 20 μL，注入效液相色譜儀，測定綠原酸峰面積，計算RSD為6.53%，表明供試品溶液至少在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實驗 取同一批號供試品（批號20180726），按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液6份，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計算含量，綠原酸的平均含量為4.273 6 mg·mL-1，RSD為0.76%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗精密量取已知含量（4.273 9 mg·mL-1）的同一批樣品（批號20180726） 1.5 mL，共9份，每3份為一組，分別精密加入綠原酸對照品儲備液2.0，3.0，4.0 mL，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 綠原酸回收率試驗結(jié)果 （n=9）

2.9 樣品含量測定 取樣品，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄綠原酸色譜峰面積，按外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表2。

表2 綠原酸含量測定結(jié)果 （mg·mL-1，n=3）

3 討論

（1）近年來，隨著中醫(yī)理論和制藥工藝事業(yè)的發(fā)展，中藥醫(yī)院制劑也在迅速發(fā)展和提高，為方便醫(yī)院內(nèi)部臨床用藥，結(jié)合臨床經(jīng)驗研制出了許多使用方便、療效明顯的中藥醫(yī)院制劑。中藥制劑處方的特點是由多味中藥材組成，既要根據(jù)病人臨床癥狀表現(xiàn)對癥下藥，還要遵循中藥配伍原則，各味藥之間配伍得當(dāng)［5-6］。由于制劑的處方復(fù)雜，生產(chǎn)工藝各異，這就給質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定帶來了一定的困難，一般以處方中的主藥藥材和有效成分作為研究對象。石金解毒口服液的處方中，金銀花為主藥且用量大，金銀花為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或帶初開的花。夏初花開放前采收，干燥而得［7］。金銀花的主要成分為綠原酸、木犀草黃素及木犀草黃素-7-葡萄糖苷等［8］，其中綠原酸具有廣譜抗菌、增強免疫力及解熱抗炎等藥理活性。主要功效［9］為抗菌消炎，對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、痢疾球菌、肺炎球菌、傷寒桿菌、有明顯的抑菌效果，同時還有抗病毒、抗腫瘤、降血壓和降血脂等作用。通過方法學(xué)驗證，結(jié)果表明采用高效液相色譜法能夠準(zhǔn)確測定石金解毒口服液中綠原酸的含量，故通過建立綠原酸的含量測定方法，來更好的控制該制劑的質(zhì)量。

（2）檢測波長的選擇，在200～400 nm波長范圍內(nèi)對綠原酸對照品溶液進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果綠原酸在327 nm處有最大吸收，故選用327 nm作為測定波長。

（3）在供試品溶液制備過程中，對稀釋溶劑進(jìn)行了考察，曾分別用甲醇、乙醇、50%甲醇、50%乙醇、流動相等為溶劑試驗，結(jié)果以50%甲醇為溶劑，供試品溶液澄清，不產(chǎn)生干擾，在配置綠原酸對照品溶液時，用50%甲醇為溶劑能夠使綠原酸對照品完全溶解，故選用50%甲醇為溶劑。

（4）流動相組分和比例的選擇。曾試用乙腈∶甲醇∶冰醋酸 （96∶6∶11∶2）、乙腈∶1% 冰醋酸溶液、乙腈∶2% 磷酸溶液、乙腈∶1%磷酸溶液、乙腈∶0.4%磷酸溶液，結(jié)果流動相組分以乙腈∶0.4%磷酸溶液較好，同時發(fā)現(xiàn)流動相的比例對主峰的峰形影響較大，經(jīng)過試驗比較，以乙腈∶0.4% 磷酸溶液 （13∶87） 為流動相時，綠原酸與其他相鄰峰分離度符合要求，且峰形較好，故選乙腈∶0.4%磷酸溶液 （13∶87） 為流動相。