朱波 吳君榮 舒宏 黃昭東 梁藝華 趙惠柳

[摘要] 目的 探討對(duì)氧磷酶1（PON1）對(duì)甲胎蛋白陰性原發(fā)性肝癌（AFP-PHC）的診斷價(jià)值及界值。 方法 收集2015年1～12月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院住院的60例AFP陰性肝硬化（AFP-LC）患者（AFP-LC組）和46例AFP-PHC患者（AFP-PHC組）的血清，用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)所有納入對(duì)象血清AFP水平，酶聯(lián)免疫法檢測(cè)PON1水平。 結(jié)果 AFP-PHC組血清PON1水平明顯低于AFP-LC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），PON1水平診斷AFP-PHC的受試者工作特征曲線下最大面積為0.768，當(dāng)PON1水平<234.31 pg/mL，診斷AFP-PHC的敏感性為71.7%，特異性為73.9%。血清PON1水平與AFP-PHC患者肝功能分級(jí)、病理分化程度、有無癌栓及乙型肝炎表面抗原是否陽(yáng)性均無關(guān)（P > 0.05）。 結(jié)論 血清PON1水平對(duì)診斷AFP-PHC具有一定的效能。

[關(guān)鍵詞] 對(duì)氧磷酶1;肝硬化;原發(fā)性肝癌;甲胎蛋白

[中圖分類號(hào)] R735.7? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）07（a）-0156-04

Diagnostic value of serum oxaphosphatase 1 level in α-fetoprotein negative primary liver cancer

ZHU Bo? ?WU Junrong? ?SHU Hong? ?HUANG Zhaodong? ?LIANG Yihua? ?ZHAO Huiliu

Clinical Laboratory， the Affiliated Cancer Hospital of Guangxi Medical University， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Nanning? ?530021， China

[Abstract] Objective To evaluate the diagnostic value and the threshold value of paraoxonase 1 （PON1） in α-fetoprotein negative primary liver cancer （AFP-PHC）. Methods From January to December 2015， serum samples of 60 AFP negative cirrhosis patients （AFP-LC group） and 46 AFP-PHC patients （AFP-PHC group） hospitalized in the Affiliated Cancer Hospital of Guangxi Medical University were collected. The serum AFP levels of all included subjects were detected by electrochemoluminescence immunoassay， and PON1 levels were detected by enzyme-linked immunoassay. Results The serum PON1 level in the AFP-PHC group was significantly lower than that in the AFP-LC group， and the difference was statistically significant （P < 0.05）， the maximum area under the subject operating characteristic curve for diagnosis of AFP-PHC by PON1 level was 0.768. When PON1 level < 234.31 pg/mL， the sensitivity and specificity of the diagnosis of AFP-PHC were 71.7% and 73.9% respectively. There was no correlation between serum PON1 level and liver function grade， pathological differentiation degree， tumor thrombus or positive hepatitis B surface antigen in patients with AFP-PHC （P > 0.05）. Conclusion Serum PON1 level is effective is diagnosing AFP-PHC.

[Key words] Paraoxonase 1; Liver cirrhosis; Primary hepatic carcinoma; α-fetoprotein

原發(fā)性肝癌（primary hepatic carcinoma，PHC）簡(jiǎn)稱肝癌，是指在肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞發(fā)生的惡性腫瘤，是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一。全世界平均每年約有25萬人死于肝癌，而我國(guó)約占其中的45%[1]。我國(guó)是肝炎大國(guó)，也是原發(fā)性肝癌的高發(fā)區(qū)，在腫瘤相關(guān)死亡率中位居第二，僅次于肺癌[2]。

甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）測(cè)定，是診斷原發(fā)性肝癌的特異性標(biāo)志物，但一部分原發(fā)性肝癌AFP是陰性表達(dá)。而物理診斷目前無法做到早期診斷[3]。因此，探索對(duì)原發(fā)性肝癌，特別是對(duì)AFP陰性的原發(fā)性肝癌有診斷價(jià)值的標(biāo)志物，具有非常重要的臨床意義。

對(duì)氧磷酶（paraoxonase，PON）基因家族有PON1、PON2和PON3三個(gè)成員[4]。PON1主要由肝臟合成，它能夠水解有機(jī)磷，肝細(xì)胞合成PON1后，一部分被分泌入循環(huán)系統(tǒng)，并與高密度脂蛋白中的載脂蛋白A1緊密結(jié)合，另一部分儲(chǔ)存于肝細(xì)胞微粒體中[5]。

PON1水平在與脂類代謝有關(guān)的疾病，如冠心病、糖尿病、微血管病變等疾病的研究中有較多的報(bào)道[6]。最近報(bào)道[7]PON1水平是肝慢性損傷的靈敏指標(biāo)，并且隨著肝硬化患者肝臟損傷程度的增加，血清PON1水平明顯降低。當(dāng)肝細(xì)胞受損嚴(yán)重時(shí)，PON1水平下降也越明顯。本文對(duì)PON1水平在甲胎蛋白陰性原發(fā)性肝癌（AFP-PHC）中的診斷價(jià)值進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究的對(duì)象均來自于2015年1～12月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院住院的患者，其中AFP陰性肝硬化（AFP-LC）患者60例（AFP-LC組），AFP-PHC患者46例（AFP-PHC組），LC患者符合2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)修訂的病毒性肝炎防治方案中肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，PHC患者符合中國(guó)2011年版原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]。本研究已獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。AFP-PHC患者肝臟病理分化程度以低分化為主（41%），其次為高分化（33%）和中分化（26%）;70%的AFP-PHC患者存在癌栓。兩組基線資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。見表1。

1.2 方法

采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)所有研究對(duì)象血清AFP水平，檢測(cè)儀器為德國(guó)羅氏E601及配套試劑。采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清PON1水平，試劑盒由RD公司提供，所有操作均依據(jù)試劑盒操作說明書進(jìn)行，結(jié)合酶標(biāo)儀比色，測(cè)定血清樣本PON1水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，多樣本組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以受試者工作特征曲線（ROC）評(píng)價(jià)血清PON1水平對(duì)AFP-PHC的診斷價(jià)值及界值，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清PON1水平比較

兩組患者血清PON1水平分別為（203.36±80.85）pg/mL和（327.49±181.66）pg/mL，兩組PON1水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。

2.2 兩組血清PON1水平ROC曲線分析

ROC曲線分析結(jié)果顯示，曲線下最大面積為0.769，標(biāo)準(zhǔn)誤為0.046，95%置信區(qū)間（95%CI）：0.679～0.858，P < 0.05。以尤登指數(shù)最大值來確定臨界值（尤登指數(shù)=敏感性+特異性-1），當(dāng)尤登指數(shù)最大值為0.456時(shí)，PON1水平臨界值為234.31 pg/mL，對(duì)應(yīng)的敏感性為71.7%，特異性為73.9%。見圖1。

2.3 AFP-PHC患者血清PON1水平與臨床資料分析

不同Child-Pugh分級(jí)、分化程度、癌栓、HBsAg情況的AFP-PHC患者血清PON1水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

3 討論

PON1是PON基因家族的成員之一，主要由肝臟合成，存在于血漿的高密度脂蛋白中。Camps等[10]報(bào)道，慢性肝病患者血清中PON1水平明顯降低，同時(shí)發(fā)現(xiàn)患者血清PON1水平降低越明顯，肝臟損傷程度也越嚴(yán)重，提示血清PON1水平與肝臟損傷程度具有較大的相關(guān)性。同時(shí)，Mackness等[11]通過對(duì)慢性肝病患者血清PON1水平研究也得出類似的結(jié)果。其發(fā)生機(jī)制為：肝臟受到損傷越嚴(yán)重，肝細(xì)胞合成PON1含量越少，另外肝臟合成的高密度脂蛋白減少，PON1未能與高密度脂蛋白中的載脂蛋白A1充分結(jié)合而影響其活性的檢測(cè)[12]。而肝硬化、肝癌卻是慢性肝損傷肝病的一個(gè)發(fā)展階段，損傷越嚴(yán)重，PON1水平也會(huì)越低。PON1基因多態(tài)性與冠心病[13]、動(dòng)脈粥樣硬化[14]具有相關(guān)性;但對(duì)于PON1基因多態(tài)性與原發(fā)性肝癌的發(fā)生、發(fā)展等方面的研究相對(duì)較少[15]，由于納入的病例數(shù)少且研究的多態(tài)性位點(diǎn)有限，結(jié)論有待進(jìn)一步研究。

本研究通過檢測(cè)兩組患者血清PON1水平并進(jìn)行比較分析，采用ROC曲線分析鑒別AFP-LC和AFP-PHC的PON1水平臨界濃度，得出ROC曲線下最大面積為0.769，提示血清PON1水平對(duì)區(qū)別AFP-LC和AFP-PHC具有一定價(jià)值和準(zhǔn)確性，當(dāng)PON1水平<234.31 pg/mL，PON1水平診斷AFP-PHC的敏感性為71.7%，特異性為73.9%。根據(jù)相關(guān)學(xué)者[16]的報(bào)道，PON1水平區(qū)分AFP-LC和AFP-PHC的特異性和敏感性分析為58.7%和86.7%，具有一定的準(zhǔn)確性（ROC曲線下面積為0.676，P < 0.05），且PON1水平在AFP-LC和AFP-PHC中濃度差異顯著，提示PON1水平在AFP-LC和AFP-PHC中表達(dá)有明顯變化，AFP-PHC組PON1水平明顯低于AFP-LC組，該差異與同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量驗(yàn)證結(jié)果一致。本研究結(jié)果顯示特異性優(yōu)于上述文獻(xiàn)，而敏感性稍低，經(jīng)過比較發(fā)現(xiàn)，主要原因是本研究ROC曲線下最大面積大于上述文獻(xiàn)，故而引起PON1水平在鑒別AFP-LC和AFP-PHC時(shí)存在敏感性和特異性的差異，但本研究結(jié)果具有更高的鑒別準(zhǔn)確性;另外一個(gè)原因可能是本研究每組的樣本量均多于上述文獻(xiàn)所納入的每組樣本量，故本研究的結(jié)論更具有說服力[17]。但本研究得出血清PON1水平在鑒別AFP-LC和AFP-PHC的敏感性和特異性尚不夠高，故還需后續(xù)實(shí)驗(yàn)深入研究。

AFP-LC組血清抗凝血酶-Ⅲ（AT-Ⅲ）水平明顯低于AFP-PHC組，AT-Ⅲ/PON1水平比值在鑒別AFP-LC和AFP-PHC具有更高的準(zhǔn)確性，說明單一腫瘤標(biāo)志物，無論是AFP、PON1水平還是其他標(biāo)志的變化，在診斷或者否定是罹患肝癌上具有局限性，這對(duì)以后的實(shí)驗(yàn)研究也提出了新的思考與方向。

有學(xué)者報(bào)道[18]，LC組PON1水平顯著低于健康對(duì)照組，并隨肝硬化程度加重而下降，PON1水平在LC患者Child-Pugh中，A級(jí)>B級(jí)>C級(jí)，且各分級(jí)之間PON1水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明PON1水平與Child-Pugh分級(jí)具有相關(guān)性，可反應(yīng)肝硬化的嚴(yán)重程度。PHC的肝臟損傷程度更甚于肝硬化，PON1水平應(yīng)更低。另外癌癥的發(fā)生過程中，氧化應(yīng)激是一個(gè)重要的病原學(xué)因素。PON1是人體內(nèi)源性清除系統(tǒng)之一，PON1水平下降、清除率降低，癌癥的發(fā)生率越高。而在本研究中也得出了明確的結(jié)論：肝癌組PON1水平明顯低于肝硬化組。但據(jù)相關(guān)學(xué)者報(bào)道，PON1水平與肺癌[19]、乳腺癌[20]、胃腸道惡性腫瘤[21-22]的風(fēng)險(xiǎn)性有一定的負(fù)相關(guān)性，和本研究PON1水平變化相似，提示單獨(dú)應(yīng)用PON1水平來進(jìn)行肝癌檢測(cè)的可行性較低。然而，經(jīng)過研究探討，認(rèn)為PON1水平對(duì)于肝癌，尤其是AFP陰性的原發(fā)性肝癌的診斷，在聯(lián)合其他檢測(cè)手段應(yīng)用下還是具有一定的可行性，也能為臨床提供更準(zhǔn)確的診斷依據(jù)。

綜上所述，本研究結(jié)果提示PON1水平對(duì)鑒別AFP-LC和AFP-PHC具有一定的可行性。在今后該課題的進(jìn)一步研究中，可以進(jìn)一步的擴(kuò)大樣本的數(shù)量及范圍，同時(shí)仍需探索其與其他標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)，以便實(shí)現(xiàn)早期診斷AFP-PHC的目標(biāo)。

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