彭彩姣　熊正愛(ài)

[摘要] 宮頸癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤，早發(fā)現(xiàn)、早治療是預(yù)防宮頸癌的關(guān)鍵。除細(xì)胞學(xué)檢查外，HPV檢測(cè)也是宮頸癌篩查的重要方法。最初的HPV檢測(cè)方法主要是基于形態(tài)學(xué)，如細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)、免疫組化及電鏡等，但因敏感度和特異度均不理想，操作較繁瑣，臨床使用較少。目前應(yīng)用于臨床的HPV檢測(cè)方法為基于現(xiàn)代分子生物學(xué)的核酸技術(shù)，靈敏度及特異度均較高。該文就國(guó)內(nèi)、外普遍應(yīng)用的HPV檢測(cè)方法及其應(yīng)用進(jìn)展作一簡(jiǎn)述。

[關(guān)鍵詞] 宮頸癌;宮頸上皮內(nèi)瘤變;人乳頭瘤病毒;檢測(cè)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-0742（2019）07（a）-0196-03

Progress in Detection of Human Papillomavirus and Its Application

PENG Cai-jiao， XIONG Zheng-ai

The Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University， Chongqing， 400010 China

[Abstract] Cervical cancer is a common malignant tumor in women. Early detection and early treatment are the key to prevent cervical cancer. In addition to cytology， HPV testing is also an important method for cervical cancer screening. The original HPV detection method is mainly based on morphology， such as cytology， histology， immunohistochemistry and electron microscopy， but the sensitivity and specificity are not ideal， the operation is cumbersome， and the clinical applications are fewer. The current HPV detection method applied to the clinic is based on modern molecular biology nucleic acid technology， and the sensitivity and specificity are high. This paper gives a brief introduction to the domestic and foreign HPV detection methods and their application progress.

[Key words] Cervical cancer; Cervical intraepithelial neoplasia; Human papillomavirus; Detection

目前宮頸癌仍嚴(yán)重威脅全球女性的生命健康，仍是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一[1]，世界范圍內(nèi)宮頸癌居女性惡性腫瘤第4[2]，每年約有50萬(wàn)的新發(fā)病例，每年死亡病例超過(guò)26萬(wàn)，均主要發(fā)生于社會(huì)經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)[3]。隨著宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合HPV檢測(cè)的篩查模式的推廣及逐漸普及，全球?qū)m頸癌的死亡率和發(fā)生率下降明顯，但在發(fā)展中國(guó)家尤其是中低收入國(guó)家有上升趨勢(shì)，數(shù)據(jù)顯示我國(guó)則有逐漸上升[4]。

長(zhǎng)期以來(lái)宮頸癌篩查以細(xì)胞學(xué)檢查為主，隨著HPV感染和宮頸腫瘤之間的直接因果關(guān)系被證實(shí)[5-7]，HPV檢測(cè)逐漸成為宮頸癌的重要部分。HPV檢測(cè)雖特異性較低，但高敏感性、高陰性預(yù)測(cè)值等特點(diǎn)更突出，近期研究提出，聯(lián)合篩查在預(yù)防宮頸癌發(fā)揮的重大意義可能在于HPV檢測(cè)[8]，HPV檢測(cè)在預(yù)防宮頸癌方面可提供更多的保護(hù)[9]。該文將對(duì)以下HPV檢測(cè)方法及其應(yīng)用進(jìn)展作一簡(jiǎn)述。

1? HPV DNA檢測(cè)

1.1? 雜交捕獲（Hybrid Capture，HC）技術(shù)

HC-II技術(shù)1999年成為美國(guó)FDA認(rèn)證的第一個(gè)用于宮頸癌篩查的HPV檢測(cè)方法，基因雜交基礎(chǔ)上利用化學(xué)發(fā)光對(duì)抗體捕獲的信號(hào)放大原理，對(duì)高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型進(jìn)行檢測(cè)，并可進(jìn)行病毒載量半定量檢測(cè)，因有統(tǒng)一的臨床判定標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)結(jié)果客觀性較高，且重復(fù)性好，采用HPV全長(zhǎng)堿基對(duì)設(shè)計(jì)避免了因靈敏度過(guò)高導(dǎo)致的假陽(yáng)性，無(wú)需基因擴(kuò)增有效避免環(huán)境因素造成的假陰性。研究顯示HC-II法對(duì)CIN2及以上病變的敏感度及特異度分別為97.1%和85.6%[10]，因此HC-II法至今被作為HPV檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，但該方法不能具體分型、缺乏內(nèi)質(zhì)控，且成本高，與低危型HPV型也存在交叉反應(yīng)[10-11]。

careHPV檢測(cè)是一種宮頸癌快速篩查技術(shù)，2018年8月獲世界衛(wèi)生組織資格認(rèn)證。careHPV檢測(cè)同樣基于HC-II的原理，但除能檢測(cè)常見(jiàn)13種高危型HPV外，還能檢測(cè)HPV 66型，且操作簡(jiǎn)易、價(jià)格低廉、檢測(cè)用時(shí)短，因此，該方法被認(rèn)為非常適用于衛(wèi)生資源匱乏地區(qū)等發(fā)展中國(guó)家，包括中國(guó)農(nóng)村。臨床結(jié)果顯示，CcareHPV對(duì)CIN2及以上病變的靈敏度為90%，特異度為84.2%，與HC-II檢測(cè)接近[12]。

1.2? Invader 酶切信號(hào)放大法

該方法采用Invader專(zhuān)利技術(shù)，通過(guò)分子雜交和化學(xué)信號(hào)放大，直接檢測(cè)特定HPV DNA序列。2009年美國(guó)FDA批準(zhǔn)使用的Cervista HPV檢測(cè)則基于該方法，對(duì)HPV DNA的L1、E6/E7區(qū)進(jìn)行檢測(cè)，這可避免僅檢測(cè)L1區(qū)所造成的假陰性，且與多數(shù)低危型HPV無(wú)交叉反應(yīng)，降低了假陽(yáng)性率[13]，也能進(jìn)行內(nèi)質(zhì)控，其有兩種試劑盒：Cervista HR HPV和Cervista HPV16/18，前者能檢測(cè)14種高危型HPV，并將其分為A5/6、A7、A9 3組，但認(rèn)為分組檢測(cè)的臨床意義尚不能明確[14]，后者可對(duì)HPV16/18分型。Belinson等在中國(guó)廣東省納入1萬(wàn)女性的研究中Cervista HR HPV對(duì)CIN3及以上病變的靈敏度為95.1%（95%，90%～98%），與HC-II法無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但特異度顯著高于HC-II法（P<0.05）[15]。

1.3? 聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）技術(shù)

這類(lèi)方法多樣，包括常規(guī)PCR技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、PCR-酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定檢測(cè)技術(shù)、PCR結(jié)合返向雜交技術(shù)等。2011年獲FDA批準(zhǔn)用于宮頸癌篩查的Cobas 4800 HPV檢測(cè)則以實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，可檢測(cè)14種高危型HPV，并提供HPV16、18同步基因分型，但對(duì)余12種不能具體分型，敏感性和特異性均較高，且不存在與低危型HPV的交叉反應(yīng)，但因敏感性過(guò)高，易導(dǎo)致假陽(yáng)性率的增加。Mark等[16]的研究顯示，Cobas 4800 HPV檢測(cè)在靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值方面與HC-II法無(wú)明顯差異，且兩者一致性高，在CIN2以下和CIN2及以上的病變中的一致性分別為90.6%（95%，89.1%～92%）和96.2%（95%，89.5%～98.7%）。Lapierre等[17]研究發(fā)現(xiàn)，Cobas 4800 HPV檢測(cè)的重復(fù)性較好，多次檢測(cè)的一致率較高，降低了操作成本，同時(shí)能對(duì)是否行陰道鏡下活檢提供有效幫助信息?；贏THENA的研究結(jié)果[18]，2014年Cobas 4800 HPV檢測(cè)成為美國(guó)FDA唯一批準(zhǔn)用于25歲女性宮頸癌一線(xiàn)初篩的HPV 檢測(cè)方法。隨著國(guó)內(nèi)外學(xué)者深入探索，發(fā)現(xiàn)HPV自取樣技術(shù)的參與率高于細(xì)胞學(xué)篩查，群眾可接受度更高[19]，HPV自取樣或許可作為宮頸癌初篩手段[20]，且應(yīng)用基于PCR 的HPV檢測(cè)方法進(jìn)行自取樣標(biāo)本可獲得與醫(yī)生取材一樣的敏感性[21-22]，因此有學(xué)者認(rèn)為Cobas HPV檢測(cè)技術(shù)也可用于HPV自取樣。

目前在中國(guó)廣泛使用的HPV基因分型檢測(cè)結(jié)合PCR技術(shù)、導(dǎo)流雜交及基因芯片技術(shù)為一體，可同時(shí)檢測(cè)21種HPV基因型別，包括13種常見(jiàn)的高危型HPV、5種低危型HPV（6、 11、42、 43、 44、81型）和中國(guó)人常見(jiàn)基因型（HPV53、66、81型），并具體分型，判斷多重感染[23]。

今年美國(guó)FDA批準(zhǔn)的BD Onclarity HPV 檢測(cè)系統(tǒng)，同樣基于PCR技術(shù)。大多數(shù)HPV檢測(cè)方法針對(duì)的是HPV基因組L1區(qū)，而該方法針對(duì)E6/E7 DNA 癌基因，其中樣品處理、核酸提取、即時(shí)PCR擴(kuò)增、檢測(cè)以及結(jié)果報(bào)告均為自動(dòng)化處理，同樣可檢測(cè)14種高危型HPV，但其報(bào)告為：6種高危型HPV（16、18、31、45、51和52型）為獨(dú)立結(jié)果和其余8種高危型HPV另分為三個(gè)獨(dú)立報(bào)告：（33、58型）、（35、39、68型）和（56、59、66型），可降低人為干預(yù)，大幅度提高實(shí)驗(yàn)室的工作效率。

2? HPV mRNA檢測(cè)

該方法利用轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)張技術(shù)，提取HPV E6/E7mRNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下將mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增，分別對(duì)16型、18/45型和其他11種高危型HPV進(jìn)行檢測(cè)。研究數(shù)據(jù)顯示該方法既具備HPV DNA的敏感性，又有與細(xì)胞學(xué)檢查相似的特異性[24]，能較好平衡HPV檢測(cè)的敏感性和特異性，同時(shí)可降低傳統(tǒng)HPV DNA檢測(cè)對(duì)于一過(guò)性HPV感染的檢出率。E6/E7為HPV的致癌基因，在大量HPV持續(xù)被轉(zhuǎn)錄為E6/E7 mRNA ，表達(dá)大量癌蛋白時(shí)，可增加細(xì)胞惡變的風(fēng)險(xiǎn)[25-26]，因此較HPV DNA檢測(cè)，HPV mRNA檢測(cè)或許更能發(fā)現(xiàn)具有臨床意義的HPV感染[27]，真正識(shí)別高風(fēng)險(xiǎn)的宮頸癌前病變?nèi)巳篬28]。Aptima HPV檢測(cè)即為一種HPV mRNA檢測(cè)，包括Aptima HPV和Aptima HPV16/18/45 Genotype，后者可對(duì)前者陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)一步分型，兩者均在2011年獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)。但該方法同樣缺乏內(nèi)質(zhì)控，不能具體分型，也可能與低危型HPV有交叉感染。

3? 結(jié)語(yǔ)

宮頸癌篩查的目的在于盡可能識(shí)別出真正的癌前病變，避免對(duì)HPV一過(guò)性感染的過(guò)度檢查及過(guò)渡治療。HPV檢測(cè)作為作為宮頸癌的重要篩查手段，基于HPV檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，在發(fā)展中國(guó)家，尤其是經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)可能有更高的應(yīng)用前景，若合理利用，將對(duì)全球的宮頸癌防控產(chǎn)生重大意義。

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