黃仲義 NI Ping

摘 要 靜脈注射劑是直接進(jìn)入人體的藥物，需要高標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)與質(zhì)量管理。國(guó)產(chǎn)仿制品的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量，同歐美原研產(chǎn)品比較可能還存在著一定的區(qū)別。本研究從一個(gè)廣泛使用的腫瘤治療注射藥物多西他賽原研及其仿制品的微膠束特性比較的研究解析出發(fā)。建議在具有微膠束體系的腫瘤治療注射劑藥學(xué)等效性研究中進(jìn)一步開展微膠束直徑及有抗腫瘤活性游離藥物比例系數(shù)的一致性比較。由于這些特性差異可能會(huì)對(duì)藥物的藥效和安全性產(chǎn)生差異，建議開展更多的臨床研究和上市后監(jiān)測(cè)。

關(guān)鍵詞 仿制藥 注射用膠束制劑 藥品質(zhì)量

中圖分類號(hào)：R927.11； R979.19 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2019）15-0085-04

Characteristics of originator docetaxel and the gap between generic and originator drugs*

HUANG Zhongyi1**， NI Ping2**

（1. the GCP Office， the Central Hospital of Jingan District， Shanghai 200040， China； 2. Montpellier CMC Lab， Rond-Point René Char 34080， France）

ABSTRACT Intravenous injectable drugs are those that enter the body directly and require high standards of production and quality management. The production process and quality of domestic generic drugs may be different from that of the originator produced in Europa and America. This paper presents an analytical study of a widely used neoplastic injectable drug， docetaxel， and its complex micelle characteristics. To evaluate pharmaceutical equivalence， further studies are recommended for neoplastic injectable drugs using micelle system regarding micelle size and active anti-tumor free drug fraction. Since the identified differences in characteristics may lead to difference in the efficacy and potential safety risks， more clinical studies and post-marketing surveillance are recommended.

KEy WORDS generic drug； injection micelle preparation； drug quality

仿制藥，相對(duì)于原研藥而言，價(jià)格低，可及性高，是臨床治療疾病的重要基礎(chǔ)。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局（ CFDA） 于2013 年2 月發(fā)布了《國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局關(guān)于開展仿制藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)工作的通知》[1]，《通知》中明確指出，仿制藥是與被仿制藥具有相同的活性成分、劑型、給藥途徑和治療作用的替代藥品，具有降低醫(yī)療支出，提高藥品可及性，提升醫(yī)療服務(wù)水平等重要經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。國(guó)家開展與實(shí)施仿制藥品一致性評(píng)價(jià)工作，可以提高仿制藥質(zhì)量，有效地推動(dòng)我國(guó)醫(yī)藥產(chǎn)品質(zhì)量和醫(yī)藥工業(yè)發(fā)展，對(duì)保障人民健康和用藥安全有極大的意義[2]。

2017年，中國(guó)國(guó)家癌癥中心發(fā)布了最新一期的全國(guó)腫瘤登記中心數(shù)據(jù)，全國(guó)惡性腫瘤新發(fā)病例數(shù)380.4萬(wàn)例，平均每天超過(guò)1萬(wàn)人次患者被確診為癌癥。如此龐大的患者群存在著巨大的藥物治療訴求，藥品的質(zhì)量將直接關(guān)乎百萬(wàn)腫瘤患者的生命延長(zhǎng)及生活質(zhì)量。因此，腫瘤用仿制藥的一致性評(píng)價(jià)工作尤其需要引起重視。

微膠束（micelles）是指藥物溶解或分散在成球材料中，形成骨架型微小球或類球形微粒，與普通劑型相比，可提高藥物的穩(wěn)定性、緩控釋、靶向給藥等特點(diǎn)，廣泛用于各類腫瘤藥物中[3]。參照EMA（歐盟藥品局）的相關(guān)技術(shù)要求，使用微膠束技術(shù)的仿制藥的上市申請(qǐng)不適用生物等效性實(shí)驗(yàn)豁免，需要提供額外測(cè)試證據(jù)，包括對(duì)給藥后沉淀風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估。具體需要提交：①分散微膠束的平均大小和分布數(shù)據(jù)；②對(duì)微膠束實(shí)體濃度的估計(jì)以體現(xiàn)微膠束量；③有抗腫瘤活性游離藥物比例系數(shù)。針對(duì)這一技術(shù)要求，我們以多西他賽為例，進(jìn)行原研藥和仿制藥的相關(guān)指標(biāo)分析，進(jìn)而探討這一技術(shù)要求的合理性。

多西他賽（多西紫杉醇，docetaxel）屬于半合成類紫杉醇化合物。多年來(lái)，被廣泛使用于乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、頭頸癌等多個(gè)腫瘤的治療。因此，多西他賽得到國(guó)內(nèi)外多個(gè)指南的高級(jí)別臨床使用推薦。在腫瘤注射藥物一致性評(píng)價(jià)工作中具有一定的代表性。之前的研究表明，多西他賽仿制藥普遍存在著有效成分不足、雜質(zhì)含量超標(biāo)（>3%）的現(xiàn)象[4]，臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)也發(fā)現(xiàn)，多西他賽仿制藥在血液毒性、治療中止率等指標(biāo)方面比原研藥偏高[5]。因此，從更多的角度進(jìn)行多西他賽仿制藥質(zhì)量評(píng)價(jià)，對(duì)提升仿制藥質(zhì)量會(huì)有一定的幫助。

多西他賽本身易溶于有機(jī)溶劑，難溶于水，細(xì)胞毒性較大。在原研制作工藝中，生產(chǎn)企業(yè)使用聚山梨酯80（吐溫80）作為輔料，增加其溶解性，吐溫80與多西他賽兩者形成膠束體系。該膠束體系可增加多西他賽遞送及釋放的穩(wěn)定性。而由于吐溫80-多西他賽體系中位有效劑量為18 mg/kg，中位致死劑量為30 mg/kg，根據(jù)最新FDA定義，歸屬于窄窗治療藥物[6]。該類藥物制劑膠束穩(wěn)定性對(duì)于藥物質(zhì)量有著至關(guān)重要的影響。在一些相關(guān)研究中，吐溫80同樣可能帶來(lái)一定的不良反應(yīng)，如過(guò)敏性休克等癥狀[7]，因此，膠束穩(wěn)定性對(duì)于降低吐溫80可能帶來(lái)的不良反應(yīng)也會(huì)有一定的幫助。

原研多西他賽注射液賽諾菲泰索帝（SanofiAventis）、艾素（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司）及多帕菲（齊魯制藥有限公司）二個(gè)仿制藥均為多西他賽注射液，以上注射液有效成分為多西他賽（C43H53NO14），溶劑為乙醇的滅菌水溶液，輔料主要為聚山梨酯80。注射液通過(guò)輔料聚山梨酯80產(chǎn)生膠束體系，該膠束體系可通過(guò)兩方面進(jìn)行評(píng)估：顆粒流體力學(xué)直徑及游離藥物比例系數(shù)。本文對(duì)多品牌及不同批次多西他賽注射液膠束進(jìn)行流體力學(xué)直徑及有抗腫瘤活性游離藥物比例系數(shù)一致性比較。

1 材料與方法

1.1 樣品與試劑

泰索帝，艾素及多帕菲均從市售購(gòu)得（表1）。

實(shí)驗(yàn)使用生理鹽水（0.9%氯化鈉）；乙腈（HPLC級(jí)，Merck公司）；聚山梨酯80（HPLC級(jí)，梯希愛(ài)公司）；十水四硼酸鈉及NPN（HPLC級(jí)，Sigma公司）；水采用Milli-Q系統(tǒng)（Millipore， Direct 16）純化。

1.2 測(cè)試方法

1.2.1 動(dòng)態(tài)光散射檢測(cè)

使用Anton Paar 公司生產(chǎn)的Litesizer 500型動(dòng)態(tài)光散射儀器進(jìn)行樣品分析，該儀器采用動(dòng)態(tài)光散射模式，一次性塑料比色皿使用常規(guī)規(guī)格（10 mm×10 mm×45 mm），可見光區(qū)域檢測(cè)樣品，稀釋劑參數(shù)為生理鹽水參數(shù)。

1.2.2 多西他賽含量檢測(cè)

使用Waters H-class UPLC及色譜柱Phenomenex（150 mm×2.1 mm，3.5 mm），波長(zhǎng)230 nm[8]，0.2 ml/min流速，純水純乙腈22 min梯度模式檢測(cè)多西他賽含量。

透析裝置使用BBI Life Sciences生產(chǎn)的透析袋（截留分子量為14 kDa）。

1.2.3 聚山梨酯80膠束含量測(cè)試

使用Agilent 1200 HPLC及編織反應(yīng)線圈（35 ℃）流動(dòng)注射法[9]檢測(cè)膠束含量。紫外光吸收波長(zhǎng)為350 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為420 nm，1.5 ml/min流速，2 min 等度模式。

1.3 樣品準(zhǔn)備及處理

動(dòng)態(tài)光散射法：樣品溶液按照各自的說(shuō)明書配制。使用注射器將多西他賽所對(duì)應(yīng)的溶劑全部抽出并注射進(jìn)對(duì)應(yīng)的樣品瓶中，輕輕上下振搖至少45 s，將混合后的藥瓶室溫放置5 min，用注射器吸入混合液，注入0.9%氯化鈉注射液的離心管中，輕輕搖動(dòng)，混合均勻，配制終濃度為1 mg/ml的樣品溶液。DLS測(cè)試時(shí)稀釋樣品溶液至0.5 mg/ml，移取2 ml樣品溶液進(jìn)行溶液顆粒直徑檢測(cè)。每次測(cè)試的樣品溶液均為新鮮配制，并須在配制后4 h內(nèi)完成測(cè)試。

注意：由于輔料使用聚山梨酯80，樣品溶液混勻容易產(chǎn)生氣泡，干擾測(cè)試結(jié)果。測(cè)試應(yīng)避免比色皿中有氣泡。

透析測(cè)試：使用移液槍各移取1.5 ml溶劑加入裝有泰索帝及艾素的樣品瓶，移取3 ml溶劑加入裝有多帕菲的樣品瓶，輕輕上下振搖至少45 s，將混合后的藥瓶室溫放置5 min，用注射器吸入混合液，注入0.9%氯化鈉注射液的離心管中，輕輕搖動(dòng)，混合均勻。分別移取2 ml泰索帝及艾素的預(yù)混液，各加入18 ml生理鹽水混勻稀釋。移取4 ml多帕菲預(yù)混液，加入36 ml生理鹽水混勻稀釋。透析測(cè)試時(shí)將樣品溶液稀釋一倍，并超聲處理3 min。

自制透析裝置，選取比透析袋體積略大的外容器，確保透析裝置內(nèi)外體積比有較大差異（內(nèi)體積比外體積大5倍并且液面充分接觸。透析袋外部加入1 ml生理鹽水，透析袋內(nèi)部加入5 ml樣品溶液，靜置4 h，移取70 ml透析袋外部溶液檢測(cè)多西他賽含量，移取70 ml透析袋內(nèi)部溶液，加入270 ml生理鹽水稀釋，檢測(cè)聚山梨酯80膠束含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 動(dòng)態(tài)光散射法樣品檢測(cè)

除齊魯樣品采用方法精密度測(cè)試結(jié)果外，其余樣品據(jù)平均配置兩份，結(jié)果取平均值，如下：

多帕菲與泰索帝的動(dòng)態(tài)光散射測(cè)試基本一致，艾素三個(gè)不同批次均與原研藥品有明顯差異，主要表現(xiàn)為出現(xiàn)200～1 000 nm的粒子（遠(yuǎn)大于其他產(chǎn)品的10～11 nm）。初步判定該粒子來(lái)自析出的多西他賽形成的微晶，存在一定的潛在風(fēng)險(xiǎn)。

2.2 游離多西他賽和膠束研究測(cè)試（透析實(shí)驗(yàn)法）方法驗(yàn)證與樣品檢測(cè)

各品牌樣品分別制備4份裝置，平衡4 h檢測(cè)透析膜內(nèi)聚山梨酯80膠束含量及透析袋外多西他賽含量。三種注射液均選用一個(gè)批次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)比較

透析結(jié)果提示，泰索帝有即刻抗腫瘤活性的游離多西他賽比例系數(shù)比仿制藥高25%～67%，膠束包裹效率較高，游離吐溫80可能帶來(lái)的不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)要低于兩個(gè)仿制藥注射液。

3 討論及展望

本研究通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射及透析測(cè)試，對(duì)3個(gè)品牌及不同批次多西他賽注射液進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示，艾素不同批次樣品膠束體系穩(wěn)定性均與泰索帝和多帕菲不同，主要表現(xiàn)為出現(xiàn)200～1 000 nm的微晶（遠(yuǎn)大于其他產(chǎn)品的10～11 nm膠束粒子）。同時(shí)，泰索帝有即刻抗腫瘤活性的游離多西他賽比例系數(shù)比艾素和多帕菲高25%到67%。

基于以上結(jié)果，多西他賽原研藥與仿制藥表現(xiàn)出了一定的差異，這種差異有可能使仿制藥在臨床應(yīng)用中存在一定的潛在風(fēng)險(xiǎn)。因此，細(xì)化仿制藥一致性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)非常必要。

3.1 豐富仿制藥一致性評(píng)價(jià)中的評(píng)測(cè)方法

多項(xiàng)研究證明，即使原料和輔料相同，制藥工藝所產(chǎn)生的誤差都會(huì)影響藥物效果。因此，應(yīng)用多種評(píng)測(cè)方法推動(dòng)仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作，可以有效的推動(dòng)仿制藥工藝水平的提升，進(jìn)而提升我國(guó)仿制藥水平。以多西他賽為例，參照EMA的相關(guān)技術(shù)要求及其對(duì)仿制多西他賽注射液的上市審批實(shí)踐，多西他賽仿制藥應(yīng)額外需要參照以下EMA要求的微膠束組分在溶液中的重要技術(shù)特征進(jìn)行評(píng)定，以保障公眾用藥安全：①分散膠束的平均粒徑及粒徑分布；②估計(jì)膠束實(shí)體濃度，以反映膠束長(zhǎng)度和數(shù)量；③游離藥物比例系數(shù)。

3.2 完善仿制藥一致性評(píng)價(jià)體系

美國(guó)、日本等國(guó)家均較早開展了仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作，積累了很多寶貴的經(jīng)驗(yàn)。借鑒國(guó)外仿制藥一致性評(píng)價(jià)體系，結(jié)合國(guó)內(nèi)仿制藥現(xiàn)狀，建立更為完善的仿制藥一致性評(píng)價(jià)體系，保證我國(guó)仿制藥醫(yī)藥市場(chǎng)安全。

3.3 完善配套政策，加強(qiáng)過(guò)程監(jiān)管

我國(guó)近些年才剛剛開始仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作，這項(xiàng)工作任重而道遠(yuǎn)。仿制藥一致性評(píng)價(jià)工作需要合理的政策引導(dǎo)和監(jiān)管，一方面，給予企業(yè)相應(yīng)的指導(dǎo)和支持，保證企業(yè)順利通過(guò)過(guò)渡期；另一方面，過(guò)程監(jiān)管能夠保證相應(yīng)工作順利開展，使工作有法可依，有據(jù)可循，進(jìn)而保證藥品安全。

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