王吉 嚴(yán)思思 肖海思 劉水平 曾禹 周慧娟 謝文 文利新

摘 要：目的：模擬觀察我國(guó)居民將植物油與豬油搭配食用的習(xí)慣，探討玉米與豬油調(diào)和油，大豆與豬油調(diào)和油在兩種不同攝入水平下對(duì)肝功能、肝臟抗氧化能力及肝脂的影響。方法：將40只8周齡雄性C67BL/6J小鼠隨機(jī)均分為4組，按人均理想用油25g/d和目前中國(guó)居民實(shí)際人均用油42g/d兩個(gè)水平，分別在其基礎(chǔ)日糧下添加3.8%玉米油與豬油的調(diào)和油（CR）、6.5%玉米油與豬油的調(diào)和油（CA）、3.8%大豆油與豬油的調(diào)和油（SR）、6.5%大豆油與豬油的調(diào)和油（SA）。8周后進(jìn)行稱(chēng)重，取血，采集肝臟。結(jié)果：CR與SR比較，肝指數(shù)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）活性顯著降低;SA相比CA顯著上升AST活性;無(wú)論在推薦攝入水平還是實(shí)際攝入水平，玉米調(diào)和油相比大豆調(diào)和油能有效降低肝臟中甘油三酯（TG）水平，并顯著提升肝臟抗氧化酶活性，降低丙二醛（MDA）的含量。結(jié)論：與大豆調(diào)和油比較，玉米調(diào)和油有明顯的保護(hù)肝功能，增強(qiáng)肝臟抗氧化能力，降低過(guò)氧化損傷，并能降低肝脂質(zhì)沉積。

關(guān)鍵詞：豬油;玉米油;大豆油;調(diào)和油;肝功能;抗氧化;肝脂質(zhì)

膳食油脂中的主要成分是飽和脂肪酸（SFAs）、單不飽和脂肪酸（MUFAs）和多不飽和脂肪酸（PUFAs）。此外，動(dòng)物油脂中還有一定量的膽固醇。根據(jù)世界衛(wèi)生組織和中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)的建議，除了食物所含脂肪外，每天最佳攝入的油脂量為25～30 g，且需滿(mǎn)足SFA、MUFA和PUFA三者構(gòu)成的質(zhì)量分?jǐn)?shù)比例為1∶1∶1[1]。但是近幾年來(lái)，中國(guó)居民植物性油脂攝入增加，而動(dòng)物性油脂的攝入減少。有研究證明，若長(zhǎng)期只食用植物油而不食用動(dòng)物油脂會(huì)導(dǎo)致食欲不振、傷口不易愈合、牙齒松動(dòng)等營(yíng)養(yǎng)不良的現(xiàn)象，還會(huì)增加糖尿病、貧血和心血管疾病等慢性疾病的風(fēng)險(xiǎn)[2]。隨著中國(guó)居民生活水平的提高和中國(guó)城市化發(fā)展進(jìn)程加快，我國(guó)居民日均油脂總攝入量達(dá)到42.1g/d，超過(guò)推薦攝入量的1/3。長(zhǎng)期高脂飲食會(huì)導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)沉積，造成非酒精性脂肪肝，還能引起脂質(zhì)過(guò)氧化，造成肝臟氧化損傷。本課題研究小組在前期研究中發(fā)現(xiàn)與單一油脂比較，植物油與豬油搭配能有效降低體重和血脂[3]，抑制脂肪酸的合成，促進(jìn)甘油三酯（TG）的分解[4]，其中玉米油與豬油的調(diào)和油不但顯著改善血脂水平還有效減輕肝臟氧化損傷[5];相比大豆油和豬油調(diào)和油，玉米油和豬油搭配食用后會(huì)降低腎功能損傷和痛風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)[6]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上根據(jù)中國(guó)人的飲食習(xí)慣，以小鼠為模型，用兩種不同的植物油與豬油進(jìn)行調(diào)和，按照推薦攝入量25g與實(shí)際攝入量42g（換算為小鼠日糧中油脂添加量為3.8%、6.5%）飼喂12w以后，探究其對(duì)肝脂質(zhì)沉積、肝功能及肝臟抗氧化能力的影響，為人們?nèi)粘Ｅ胝{(diào)油脂的選擇和搭配提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

8w齡SPF級(jí)雄性C57BL/6J小鼠，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK（湘）2016-0002。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

1.2.1 材料與試劑 大豆油，中糧糧油工業(yè)有限公司的一級(jí)大豆油;玉米油，三星集團(tuán)的一級(jí)玉米油;豬油，湖南煙村生態(tài)農(nóng)牧有限公司提供的煉制豬板油;谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）試劑盒，邁瑞190全自動(dòng)分析儀配套的試劑盒;抗氧化試劑盒，南京建成科技有限公司;ELISA試劑盒，上海博谷生物科技有限公司;

1.2.2 儀器與設(shè)備 電子天平，日本島津有限公司;BS190 全自動(dòng)生化分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司;Infinite M200 Pro 全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀，奧地利TECAN 公司;CX41光學(xué)顯微鏡，日本Olympus有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 將40只8w齡SPF級(jí)雄性C57BL/6J小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，隨機(jī)分為4組，每組10只，根據(jù)中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)所建議的中國(guó)居民油脂攝入量（25g/d）和中國(guó)居民實(shí)際平均油脂攝入量（42.1g/d），由攝入油脂供能比折算成小鼠飼料的2個(gè)油脂添加水平，即低水平（3.8%）和高水平（6.5%），實(shí)驗(yàn)分為4組，分別為玉米油與豬油調(diào)和油推薦攝入量組（CR）、玉米油與豬油調(diào)和油實(shí)際攝入組（CA）、大豆油與豬油調(diào)和油推薦攝入量組（SR）、大豆油與豬油調(diào)和油實(shí)際攝入量組（SA），按表1所示配制日糧。飼養(yǎng)過(guò)程自由采食及飲水，溫度控制在22～26℃，第56天禁食不禁水12h，稱(chēng)重，摘眼球取血，斷頸椎處死，采集肝臟并拍照稱(chēng)重，分裝保存。

1.3.2 肝指數(shù)的計(jì)算 按照式（1）計(jì)算肝指數(shù)。

肝指數(shù)=[肝重（g）/體重（g）]*100%（1）

1.3.3 肝功能檢測(cè) 采集小鼠血液于4℃靜置2h后，3 000r/min離心8min，取血清，采用深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司BS190全自動(dòng)生化分析儀，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清中肝功能指標(biāo)。

1.3.4 肝臟抗氧化能力及肝脂質(zhì)檢測(cè) 取小鼠肝組織0.1g加入900μL生理鹽水制成10%的肝臟勻漿，并在2 500r/min的條件下離心10min，取上清。根據(jù)南京建成科技有限公司的操作說(shuō)明書(shū)檢測(cè)肝臟中總超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、TG、膽固醇（TC）的含量。

1.3.5 肝臟病理切片制作 取小鼠肝組織于4%中性甲醛溶液中固定，進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，5μm切片，依次經(jīng)脫蠟、染色、脫水、透明、封片后，置光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行鏡檢。

1.3.6 數(shù)據(jù)處理及作圖 對(duì)所有結(jié)果運(yùn)用 SPSS17.0 軟件進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析，再運(yùn)用最小顯著性差異（LSD）法比較各組數(shù)據(jù)均值顯著性，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同水平的兩種調(diào)和油對(duì)小鼠肝功能的影響

由圖1可知，在推薦攝入水平下，與SR比較，CR的肝指數(shù)、ALT、AST、ALP水平均顯著降低（P<0.05）;而在實(shí)際攝入水平下，與SA比較，CA的AST水平極顯著降低（P<0.01），兩組之間的肝指數(shù)、ALT、ALP水平比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。攝入推薦量的玉米油豬油調(diào)和油能顯著改善其高劑量造成的肝指數(shù)和AST的升高（P<0.01）。

2.2 不同水平的兩種調(diào)和油對(duì)小鼠肝臟抗氧化能力的影響

由圖2可知，在推薦攝入水平下，CR相對(duì)于SR能顯著升高SOD水平（P<0.05），降低肝臟中MDA含量（P<0.01）。在實(shí)際攝入水平下，CA顯著升高GSH-Px，降低MDA含量（P<0.05）。在同一油脂不同攝入水平，與SR相比較，SA的GSH-Px水平顯著降低（P<0.05）。與CR比較，CA組的SOD水平極顯著降低（P<0.01）。GSH-Px水平顯著上升（P<0.05）。

2.3 不同水平的兩種調(diào)和油對(duì)小鼠肝脂質(zhì)的影響

由表2可知，在不同油脂同一攝入水平下，大豆豬油調(diào)和油組相對(duì)玉米豬油調(diào)和油組的TG水平顯著升高（P<0.05）;推薦劑量下攝入大豆調(diào)和油能極顯著降低其高水平下造成的TC含量升高（P<0.01）;與CA組相比較，SA組顯著升高肝臟中TC水平（P<0.01）。

2.4 不同水平的兩種調(diào)和油對(duì)小鼠肝臟病理組織形態(tài)的影響

由圖3可知，小鼠肝臟切片中，肝小葉位置清晰、肝細(xì)胞索清晰，細(xì)胞間隙適中，門(mén)管區(qū)清晰，細(xì)胞內(nèi)未出現(xiàn)圓形空泡，無(wú)明顯脂肪組織的浸潤(rùn)，且顯微觀察無(wú)明顯病理變化，未對(duì)肝臟造成器質(zhì)性的病理變化。

3 討論

肝臟作為代謝性器官，因各種因素?fù)p傷后，導(dǎo)致肝細(xì)胞變性、 壞死，或者補(bǔ)償增生，以至于血清酶學(xué)和肝指數(shù)會(huì)發(fā)生明顯變化[7-8]，存在于肝細(xì)胞內(nèi)的ALT、ALP在肝臟受到損壞時(shí)，就會(huì)從受損肝細(xì)胞釋放到血液中，導(dǎo)致血清中ALT、ALP水平升高。AST主要存在于肝臟線(xiàn)粒體中，當(dāng)肝臟線(xiàn)粒體膜破裂時(shí)，血清中AST會(huì)大幅度升高[9-10]。在本實(shí)驗(yàn)中，在推薦攝入水平下，CR組肝指數(shù)、ALT、AST、ALP水平顯著低于SR組（P<0.05）。在實(shí)際攝入水平，CA組AST水平較SA組極顯著降低（P<0.01）。而從切片結(jié)果來(lái)看，各組肝小葉位置清晰且細(xì)胞內(nèi)未出現(xiàn)圓形空泡，無(wú)明顯脂肪組織的浸潤(rùn)，說(shuō)明無(wú)論在推薦油脂攝入水平還是實(shí)際油脂攝入水平并未使肝臟造成脂肪變性。但也有研究認(rèn)為，AST、ALT水平的升高可以作為脂肪肝早期診斷的血清學(xué)指標(biāo)[11]。綜上所述，在推薦劑量下攝入玉米調(diào)和油更能有效降低脂肪肝的風(fēng)險(xiǎn)，保護(hù)肝功能，油脂攝入量的增加會(huì)升高脂肪肝的風(fēng)險(xiǎn)，并且玉米調(diào)和油能有效降低肝臟線(xiàn)粒體損傷風(fēng)險(xiǎn)。

普遍認(rèn)為，在肝病許多的發(fā)病機(jī)制中，脂質(zhì)過(guò)氧化是非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。肝臟氧化反應(yīng)增強(qiáng)，氧化代謝產(chǎn)物增多，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化進(jìn)而引起肝臟脂肪變性[12]。前氧化物與抗氧化酶之間失去平衡會(huì)導(dǎo)致肝臟的氧化應(yīng)激，前氧化物主要是肝臟線(xiàn)粒體中產(chǎn)生的活性氧（ROS）。當(dāng)攝入高脂飲食時(shí)，脂肪酸在肝臟中蓄積，產(chǎn)生大量的ROS[13]。SOD、GSH-PX作為機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的重要組成成分，廣泛分布于肝臟中。肝臟氧化應(yīng)激會(huì)使得造成其合成抗氧化酶能力下降，從而進(jìn)一步加重肝臟氧化應(yīng)激作用，形成惡性循環(huán)。本研究顯示，在推薦劑量下，玉米調(diào)和油組相對(duì)于大豆調(diào)和油組能顯著提升血清中SOD活性（P<0.05），極顯著降低MDA含量（P<0.01），在實(shí)際攝入水平下，玉米調(diào)和油組則能顯著提升血清中GSH-PX活性（P<0.05），顯著降低MDA含量（P<0.05）。這表明玉米調(diào)和油能通過(guò)提升抗氧化酶的活性，降低肝臟中脂質(zhì)過(guò)氧化物的含量。這其中原因可能是玉米油中含有非常豐富的維生素E，維生素E作為抗氧化劑能作用過(guò)氧化物，能降低過(guò)氧化速度[14]。有研究表明，維生素E可以通過(guò)維持遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性和保持神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性，預(yù)防疲勞，調(diào)節(jié)機(jī)體代謝活動(dòng)，起到抗氧化的作用[15-16]。

肝脂質(zhì)檢測(cè)主要指的是肝臟內(nèi)TG、TC的含量。有研究認(rèn)為，肝細(xì)胞中TG、TC 合成和排出不平衡是形成脂肪肝的主要原因[17]，膳食因素特別是膳食中的脂肪會(huì)影響膽固醇和TG水平的代謝[18]。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，無(wú)論在推薦攝入水平還是實(shí)際攝入水平，玉米調(diào)和油能有效降低肝臟中TG水平（P<0.05）。并且在實(shí)際攝入水平下，玉米調(diào)和油與大豆調(diào)和油相比，能極顯著降低肝臟膽固醇的含量（P<0.01）。當(dāng)油脂攝入水平升高，玉米調(diào)和油組小鼠肝臟TC含量無(wú)顯著性差異變化，這可能與玉米油中含有較多PUFAs有關(guān)。玉米油中的亞油酸能夠與膽固醇結(jié)合成酯，促進(jìn)膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)，并促進(jìn)膽固醇轉(zhuǎn)變?yōu)槟懰崤懦鲶w外，有良好的降脂作用，還能抑制血小板在血管內(nèi)壁上凝集，防治血栓形成，起到抗動(dòng)脈粥樣硬化，預(yù)防心血管疾病的作用[19]。

4 結(jié)論

無(wú)論在推薦攝入水平還是實(shí)際攝入水平，與大豆調(diào)和油比較，玉米調(diào)和油能保護(hù)肝功能，增強(qiáng)肝臟抗氧化能力，降低過(guò)氧化損傷，并能降低肝脂質(zhì)沉積，減少患脂肪肝的可能。但過(guò)度油脂攝入玉米調(diào)和油，會(huì)輕度損傷肝功能，降低了肝臟抗氧化能力，增加了肝臟中TG的沉積。

參考文獻(xiàn)

[1]中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì).中國(guó)居民膳食營(yíng)養(yǎng)素參考攝入量[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2001，23（3）：193-196.

[2]溫文.低膽固醇的危害[J].食品與生活，2005（10）：17.

[3]王吉，謝文，嚴(yán)思思，等.植物油與豬油的1∶1調(diào)和油對(duì)小鼠血脂及肝臟脂質(zhì)代謝的影響[J].中國(guó)油脂，2016，41（9）：59-64.

[4]Ji Wang，Sisi Yan，Haisi Xiao，et al.Anti-obesity effect of a traditional Chinese dietary habit-blending lard with vegetable oil while cooking[J].Sci Rep.，2017，7（1）：14689.

[5]王吉，劉必英，嚴(yán)思思，等.玉米油與豬油復(fù)合油對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)及肝臟抗氧化能力的影響[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2016（5）：16-20.

[6]嚴(yán)思思，劉水平，肖海思，等.植物油與豬油的調(diào)和油對(duì)小鼠血脂和腎功能的影響[J].中國(guó)油脂，2017，42（10）：80-83.

[7]Giannini E G，Testa R，Savarino V.Liver enzyme alteration：A guide for clini-cians[J].Canadian Medical Association Journal，2005，172（3）：367.

[8]周中凱，王俊軒，李瑩.抗性淀粉、殼寡糖及其復(fù)合物對(duì)高脂飲食誘發(fā)氧化應(yīng)激及脂肪肝抑制作用研究[J].中國(guó)食品添加劑，2016（7）：59-65.

[9]周燕，王績(jī)凱，黃凱，等.脂肪肝患者肝功能與血脂水平關(guān)系[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2011，27（1）：101-102.

[10]張慧敏，鞏文彥.脂肪肝血脂和肝功能檢測(cè)結(jié)果分析[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2008，12（29）：905-906.

[11]周濤.探討肝功能中ALT、AST及血脂中TG、TC在脂肪肝診斷中意義[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2016，22（8）：38-39.

[12]范建高.非酒精性脂肪肝的病因和發(fā)病機(jī)制[J].胃腸病學(xué)，2003，8（6）：363-365.

[13]章一凡，朱雄雄，朱惠萍，等.丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)高脂性脂肪肝大鼠肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化的影響[J].蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2009，29（6）：1076-1080.

[14]張亞非，周羽并，吳鳳蘭，等.玉米油和豬油對(duì)大鼠血脂血糖代謝和腦脂褐質(zhì)影響的比較研究[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，1996（3）：274-279.

[15]劉風(fēng)民.有機(jī)硒和維生素E對(duì)地方雜交雞抗氧化和抗熱應(yīng)激性能的影響[D].山東泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

[16]蔣守群，周桂蓮，林映才，等.飼糧維生素E水平對(duì)22～42日齡黃羽肉雞生長(zhǎng)性能、免疫功能和抗氧化能力的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2013，25（2）：289-298.

[17]李瑪，陳忠城，黃建華，等.總膽固醇、甘油三酯和胰島素敏感指數(shù)對(duì)非酒精性脂肪肝診斷價(jià)值的比較[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013（10）：2307-2310.

[18]Nishina P M，Lowe S，Verstuyft J，et al.Effects of dietary fats from animal and plant sources on diet-induced fatty streak lesions in C57BL/6J mice[J].Journal of Lipid Research，1993，34（8）：1413-1422.

[19]馬愛(ài)勤，李峰，張魯杰，等.玉米胚芽油輔助降血脂效果臨床觀察[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2010（6）：67-69.

Abstract：Objective Simulate the habit of consuming blended oil by different vegetable oil and lard in our country and investigate the effects of two blended oil that corn oil and lard blended and soybean oil and lard blended on liver function，liver anti-oxidative capacity and liver lipid in two different intake levels influences.Method Forty eight-week-old male C67BL / 6J mice were randomly divided into 4 groups，according to the ideal per capita oil consumption of 25g/d and the current average per capita oil consumption of Chinese residents 42g/d.3.8% corn oil and lard oil（CR），6.5% corn oil and lard oil（CA），3.8% soybean oil and lard oil（SR），6.5% soybean oil and lard oil（SA），respectively，were added to their basal diet.After 8 weeks weighed，blood，liver collection.ResultThe liver index，AST，ALT，ALP activity of CR significantly decreased compared with those of SR，SA significantly increased the activity of AST compared with CA，both at the recommended intake level and the actual compared with soybean oil and lard blend oil，corn oil and lard blend oil could effectively reduce triglyceride （TG）in liver and significantly increase liver antioxidant enzyme activity and reduce MDA content.ConclusionCompared with soybean oil and lard blend oil，corn oil and lard blended oil has a significant protection of liver function，enhance liver antioxidant capacity，reduce peroxide damage，and can reduce liver lipid deposition.

Keywords：lard;corn oil;soybean oil;blended oil;liver function;antioxidant;liver lipid

（責(zé)任編輯 李婷婷）