李瑞琴 白濱 于安芬 徐瑞 郭斌

摘要：針對(duì)蘭州百合農(nóng)戶分散種植，以及產(chǎn)地區(qū)域跨度大、產(chǎn)地環(huán)境復(fù)雜多樣的現(xiàn)狀，依據(jù)國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)蘭州百合產(chǎn)地土壤環(huán)境質(zhì)量和肥力狀況進(jìn)行評(píng)價(jià)分析，結(jié)果顯示：蘭州百合產(chǎn)地土壤環(huán)境質(zhì)量等級(jí)為“1級(jí)”，為“清潔”水平;蘭州百合產(chǎn)地土壤肥力總體為富鉀、富磷，有機(jī)質(zhì)和氮不足。蘭州百合產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量符合綠色食品產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量要求。

關(guān)鍵詞：蘭州百合;產(chǎn)地土壤環(huán)境質(zhì)量;土壤肥力;分析評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)：S644.1? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ?文章編號(hào)：1001-1463（2019）011-0007-05

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2019.11.003

Study on Induction of Embryogenic Callus and Plant Regeneration of Medicago sativa L.

WANG Hongmei

（Institute of Biotechnology， Gansu Academy of Agricultural Sciences， Lanzhou Gansu， 730070， China）

Abstract：Cotyledon and hypocotyls of 5～7 day's aseptic seedlings after germination were used as explants to study the effect of different hormones and concentrations on callus induction and differentiation with the combinative concentration of hormones. The results showed the callus induction medium was MS+2，4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L. The ratio of callus was 100%. The callus grew well and proliferated fast. The embryogenic callus induction medium was MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L. The medium for embryogenic callus differentiation into seedlings was MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L， and the rooting medium was 1/2MS+ NAA 0.02 mg/L+sucrose 10 g/L.

Key words：Medicago Sativa Linn;Embryogenic callus;Induction;Plant regeneration

蘭州百合（Lilium davidii var.unicolor）為川百合變種，已有130多年的種植歷史[1 ]，其地下鱗莖含糖量高，粗纖維少，味醇香甜，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有很高的食療和藥用保健作用，是我國(guó)衛(wèi)生健康委員會(huì)審批通過的藥食兼用植 物[2 ]。2017年甘肅省百合種植面積1.31萬(wàn)hm2，產(chǎn)量7.64萬(wàn)t，產(chǎn)值13.19億元，加工企業(yè)230多家，80%的百合銷往省外和國(guó)際市場(chǎng)，具有較高的市場(chǎng)知名度。百合產(chǎn)業(yè)覆蓋蘭州市、定西市和臨夏州的6個(gè)縣（區(qū)）33個(gè)鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）、217個(gè)村、3.2萬(wàn)戶、12.04萬(wàn)人，其中貧困戶8 850個(gè)，貧困人口3.36萬(wàn)人，種植百合為主產(chǎn)區(qū)農(nóng)戶人均年增加收入2 672.2元，經(jīng)濟(jì)效益十分可觀，是甘肅省蘭州百合適宜種植山區(qū)農(nóng)民的支柱產(chǎn)業(yè)[3 ]。百合富含蛋白質(zhì)、維生素、氨基酸、礦物質(zhì)、磷脂類等多種營(yíng)養(yǎng)元素，百合具有養(yǎng)陰潤(rùn)肺、滋陰清熱、清心安神的功效，主治陰虛久咳、痰中帶血、虛煩驚悸、失眠多夢(mèng)、精神恍惚、癰腫、濕瘡等癥[4 - 8 ]。

然而，蘭州百合產(chǎn)業(yè)經(jīng)過100多年的自然培育，特別是經(jīng)歷了最近20多年的大規(guī)模栽培，品種混雜退化及連作障礙問題突出，特別是產(chǎn)地土壤環(huán)境及肥力狀況不明、底子不清[9 - 10 ]。針對(duì)蘭州百合產(chǎn)地區(qū)域跨度大、產(chǎn)地環(huán)境復(fù)雜多樣的現(xiàn)狀，依據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，通過實(shí)地調(diào)研取樣、實(shí)驗(yàn)室測(cè)試分析，對(duì)百合產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量和肥力狀況進(jìn)行評(píng)價(jià)分析，對(duì)于促進(jìn)蘭州百合特色產(chǎn)業(yè)健康有序發(fā)展顯得十分迫切和必要。

1? ?材料和方法

1.1? ?蘭州百合產(chǎn)地布局及概況

蘭州市七里河區(qū)、西固區(qū)、榆中縣及其相鄰的定西市臨洮縣、臨夏州永靖縣的二陰山區(qū)是蘭州百合的主要種植基地。該區(qū)域山大溝深，溝壑縱橫，植被良好，海拔1 700～2 700 m。降水偏少，日照充足，蒸發(fā)量大，氣候干燥。春季干旱多風(fēng);夏無酷暑，降水集中;秋季涼爽;冬季寒冷少雪。年平均氣溫為8.5～8.9 ℃，年平均降水量在300～400 mm，全年日照時(shí)數(shù)平均2 446 h，無霜期在180 d以上。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)自然災(zāi)害主要有旱災(zāi)、凍災(zāi)、雹災(zāi)、風(fēng)災(zāi)、揚(yáng)沙揚(yáng)塵及病蟲害等。

1.2? ?采樣與分析

于2016 — 2018年春季，分別在蘭州市七里河區(qū)、西固區(qū)、榆中縣及其定西市臨洮縣、臨夏州永靖縣，共5個(gè)縣區(qū)的20多個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)30多個(gè)村不同海拔高度的百合種植基地采集土壤樣品75個(gè)，采樣原則依據(jù)《綠色食品 產(chǎn)地環(huán)境調(diào)查、監(jiān)測(cè)與評(píng)價(jià)規(guī)范》（NY/T 1054-2013）有關(guān)規(guī)定。每個(gè)樣品在采集過程中，均采用全球定位系統(tǒng)（GPS）定位，同時(shí)對(duì)產(chǎn)地海拔高度、土壤類型、前茬作物、肥力狀況等進(jìn)行記錄。采樣區(qū)海拔 2 000～? ?2 690 m，供試土壤為砂質(zhì)壤土和粉砂質(zhì)壤土。土壤采樣采用對(duì)角線布點(diǎn)法，采集0～40 cm的土壤，混合均勻，采用四分法取l kg裝入樣品袋，對(duì)pH、砷（As）、汞（Hg）、鉛（Pb）、鉻（Cr）、鎘（Cd）、六六六、DDT共8個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行測(cè)試分析。

1.3? ?分析測(cè)試方法及儀器

均采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，按照農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《綠色食品? ? 產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量》（NY/T 391-2013）中規(guī)定的有關(guān)分析方法進(jìn)行。土壤樣品采用鹽酸-硝酸-氫氟酸-高氯酸四酸消解法，鉛、鉻采用火焰原子吸收法測(cè)定，鎘用石墨爐原子吸收法測(cè)定，砷和汞采用原子熒光法測(cè)定。測(cè)試儀器為RGF-8740原子熒光光度計(jì)、ICE-3500原子吸收光譜儀。測(cè)試過程中的質(zhì)量控制主要采用國(guó)家土壤標(biāo)準(zhǔn)樣和平行樣控制方法，以確保測(cè)試分析結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1.4? ?土壤重金屬污染評(píng)價(jià)

1.4.1? ? 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)? ? 根據(jù)蘭州百合土壤環(huán)境實(shí)際現(xiàn)狀，選擇《土壤環(huán)境質(zhì)量? ? 農(nóng)用地土壤污染風(fēng)險(xiǎn)管控標(biāo)準(zhǔn)》（GB 15618-2018）、 《食用農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》（HJ/T332- 2006）和《綠色食品? ? 產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量》（NY/T 391-2013）作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。由于研究區(qū)百合產(chǎn)地均為旱地，且土壤pH 均在7.5以上，因此統(tǒng)一采用標(biāo)準(zhǔn)中的旱田、蔬菜類作物、pH大于7.5的標(biāo)準(zhǔn)值作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，各項(xiàng)指標(biāo)詳見表1。

1.4.2? ? 評(píng)價(jià)方法? ? 依據(jù)《食用農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》（HJ/T332-2006 ）（表2），主要采用土壤單項(xiàng)污染指數(shù)法，同時(shí)為了突出污染指數(shù)最大的重金屬對(duì)環(huán)境質(zhì)量的影響和作用，采用內(nèi)梅羅污染指數(shù)法，即綜合污染指數(shù)對(duì)最大的單項(xiàng)污染指數(shù)進(jìn)行分析。

土壤單項(xiàng)污染指數(shù)（Pi）=土壤污染物實(shí)測(cè)值/污染物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

土壤綜合污染指數(shù)（P綜）=

1.5? ?土壤肥力評(píng)價(jià)

以《綠色食品? ? 產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量》（NY/T 391- 2013）中的旱地標(biāo)準(zhǔn)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，各項(xiàng)指標(biāo)詳見表3。

1.6? ?數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)采用Excel2007和SPSS21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和LSD多重比較，分析處理之間差異的顯著性。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?土壤重金屬含量

從表4、表5可知，重金屬汞在百合5個(gè)主要產(chǎn)地中的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)雖然最小，為0.034 mg/kg，但是變異系數(shù)是5種重金屬中最大的，其中最大的是七里河區(qū)，變異系數(shù)為0.80。重金屬鎘、鉻、鉛、砷在5個(gè)產(chǎn)地中的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)線分別為0.254、57.10、30.19、11.95 mg/kg，鎘在西固區(qū)變異最大，變異系數(shù)為0.24;鉻和砷在榆中縣變異最大，變異系數(shù)分別為0.37、0.34;鉛在西固區(qū)和榆中縣變異最大，變異系數(shù)均為0.12。

2.2? ?土壤重金屬含量變化趨勢(shì)

從土壤重金屬質(zhì)量分?jǐn)?shù)在蘭州百合5個(gè)主產(chǎn)區(qū)變化（圖1～5）可以看出，除汞外，其余4種元素在榆中縣產(chǎn)地土壤中質(zhì)量分?jǐn)?shù)均最低;鉛、鎘、砷在永靖縣百合產(chǎn)地土壤中質(zhì)量分?jǐn)?shù)均最高。土壤中鉻、汞質(zhì)量分?jǐn)?shù)最大的產(chǎn)地均為七里河區(qū)，極差分別為9.22、0.05 mg/kg;土壤中鉛質(zhì)量分?jǐn)?shù)最大的區(qū)域?yàn)榕R洮縣，極差為7.03 mg/kg，說明不同產(chǎn)地之間土壤鉻和鉛有一定的變化幅度;產(chǎn)地土壤中，砷、鎘質(zhì)量分?jǐn)?shù)最大的產(chǎn)地均為永靖縣，二者的極差分別為0.71、0.04 mg/kg，說明產(chǎn)地區(qū)域內(nèi)土壤環(huán)境質(zhì)量砷、鎘的變化幅度不大。

2.3? ?土壤環(huán)境質(zhì)量評(píng)價(jià)

以《綠色食品產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，蘭州百合5個(gè)產(chǎn)地土壤環(huán)境的重金屬檢測(cè)數(shù)據(jù)平均值均低于NY/T391-2013（綠色食品）標(biāo)準(zhǔn)中的限量指標(biāo)值，說明蘭州百合產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量符合國(guó)家綠色食品產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量的要求。

以《食用農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》（HJ/T332-2006）作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，永靖縣鎘和臨洮縣鉛的單項(xiàng)污染指數(shù)大于0.7，但綜合污染指數(shù)均為0.63，小于0.7（表6），其他產(chǎn)地的所有重金屬的單項(xiàng)污染指數(shù)均小于0.7。也就是說，蘭州百合產(chǎn)地土壤環(huán)境質(zhì)量等級(jí)為1級(jí)，為“清潔”水平。

2.5? ?土壤肥力狀況評(píng)價(jià)

按照《綠色食品? ? ?產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量》（NY/T 391-2013）標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)蘭州百合產(chǎn)地土壤中的pH、有機(jī)質(zhì)、全氮、有效磷、速效鉀、全鹽量等6項(xiàng)土壤肥力指標(biāo)結(jié)果見表7。選擇旱地土壤肥力標(biāo)準(zhǔn)作為評(píng)價(jià)依據(jù)，經(jīng)統(tǒng)合評(píng)價(jià)，蘭州百合產(chǎn)地土壤有效磷和速效鉀處于1級(jí)狀態(tài)，有機(jī)質(zhì)處于2級(jí)狀態(tài)，全氮處于3級(jí)狀態(tài)。總體上看來，蘭州百合產(chǎn)地土壤富鉀、富磷，有機(jī)質(zhì)和氮不足。百合是地下鱗莖類作物，施氮肥過多不利于百合長(zhǎng)達(dá)90～150 d的低溫貯藏。

3? ?小結(jié)

分析評(píng)價(jià)表明，蘭州百合產(chǎn)區(qū)土壤中，重金屬汞、鎘、鉻、鉛、砷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.034、0.254、57.10、30.19、11.95 mg/kg。汞在5個(gè)產(chǎn)地中的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)雖然最小，但是變異系數(shù)是5種重金屬中最大的，變異系數(shù)由大到小依次為：汞、鉻、砷、鎘、鉛。榆中縣產(chǎn)地土壤中鉻、砷、鎘、鉛4種元素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均最低，鉛、鎘、砷在永靖縣百合產(chǎn)地土壤中質(zhì)量分?jǐn)?shù)均最高。分析原因可能是榆中近年才開辟的百合新產(chǎn)地。

依據(jù)《綠色食品? ? 產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量》標(biāo)準(zhǔn)（NY/ T391-2013）評(píng)價(jià)，蘭州百合產(chǎn)地土壤環(huán)境重金屬檢測(cè)平均值均低于標(biāo)準(zhǔn)中的限量指標(biāo)值，符合國(guó)家綠色食品產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量的要求。依據(jù)《食用農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》（HJ/T332-2006）評(píng)價(jià)，蘭州百合產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量等級(jí)為1級(jí)，為“清潔”水平。

蘭州百合產(chǎn)地土壤肥力總體為富鉀、富磷，有機(jī)質(zhì)和氮不足。建議蘭州百合產(chǎn)地土壤要增施有機(jī)肥，適當(dāng)補(bǔ)充氮肥，因地制宜施用磷肥。

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（本文責(zé)編：陳? ? 珩）