湯宗斌

摘要 ?通過(guò)對(duì)合肥市植物園、各公園、苗圃山茶病害進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)山茶黑斑病發(fā)病嚴(yán)重。為了解和掌握山茶黑斑病病原物的生物學(xué)特性，研究了不同營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH及光照條件對(duì)山茶黑斑病菌菌落生長(zhǎng)量的影響。結(jié)果表明，病菌菌絲在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最快，最適pH為6.0，最適溫度為25℃，不同光照條件對(duì)該病菌生長(zhǎng)影響不大。藥劑的毒力測(cè)定結(jié)果表明43%戊唑醇懸浮劑的抑菌效果最好，其次為35%戊唑·福美雙懸浮劑，50%多菌靈超微可濕性粉劑的抑菌效果最差。

關(guān)鍵詞 黑斑病;病原鑒定;生物學(xué)特性;毒力測(cè)定

中圖分類(lèi)號(hào)：S436.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-3305（2019）02-005-03

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2019.02.003

Abstract By investigating the diseases of Camellia japonica in Hefei Botanical Garden and other parks and nurseries， it was found that the black spot of Camellia japonica was serious. In order to understand and master the biological characteristics of the pathogen of camellia black spot， the effects of different nutrition， temperature， pH and illumination conditions on the growth of bacterial colonies of camellia black spot were studied. The results showed that the mycelium grew fastest on PDA medium， the optimum pH was 6.0， and the optimum temperature was 25℃. Different light conditions had little effect on the growth of the fungus of camellia black spot. The results of toxicity test showed that 43% tebuconazole suspension had the best bacteriostasis effect， followed by 35% tebuconazole·formaldehyde suspension， and 50% carbendazim ultramicro wettable powder had the worst bacteriostasis effect.

Key words ? Black spot; Pathogen identification; Biological characteristics; Toxicity determination

山茶（Camellia japonica）又名茶花，為常綠闊葉灌木，葉色亮綠，樹(shù)冠優(yōu)美，花姿豐盈，花大色艷，花期長(zhǎng)，是園林綠化常用植物，目前在安徽合肥市也有廣泛種植。2016年春季筆者對(duì)合肥市植物園、各大公園、苗圃進(jìn)行植物病害調(diào)查發(fā)現(xiàn)，山茶葉斑病發(fā)生較嚴(yán)重，引起早落葉、落蕾和落花，甚至導(dǎo)致枝條枯死，造成植株生長(zhǎng)不良、樹(shù)勢(shì)衰落，嚴(yán)重降低其觀賞價(jià)值及綠化效果。經(jīng)室內(nèi)顯微鑒定，引起葉斑病的病原為葉枯鏈格孢[Alternaria alternate （Fr.：Fr.） Keissler]、山茶炭疽孢菌（Colletotrichum camelliae Mass）、茶擬盤(pán)多毛孢[Pestalotiopsis theae （Sawada） Stey]和山茶藻斑病 （Cephaleuros virescens Kunze）等，其中以葉枯鏈格孢引起的黑斑病發(fā)病最為嚴(yán)重、普遍。為此，筆者對(duì)山茶黑斑病菌的生物學(xué)特性進(jìn)行研究，同時(shí)對(duì)3種殺菌劑毒力進(jìn)行了解測(cè)定，以期通過(guò)環(huán)境條件控制病害發(fā)生的途徑，并篩選防治該病害的高效藥劑，為該病害的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試病原菌 山茶黑斑病菌葉枯鏈格孢（A. alternate）分離自合肥市逍遙津公園山茶上采取的新鮮病葉，經(jīng)室內(nèi)組織分離、純化，獲得純菌株。病原菌于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d后，用于后續(xù)試驗(yàn)研究。

1.1.2 供試藥劑 35%戊唑·福美雙懸浮劑（南京南農(nóng)農(nóng)藥科技發(fā)展有限公司），50%多菌靈超微可濕性粉劑（四川國(guó)光農(nóng)化股份有限公司），43%戊唑醇懸浮劑（青島奧迪斯生物科技有限公司）。

1.2 生物學(xué)特性研究

1.2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響 將直徑5 mm的病菌菌絲塊接種于20%山茶葉片煎汁瓊脂培養(yǎng)基、PDA和OA培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)，6 d后測(cè)量菌落直徑。

1.2.2 不同溫度對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響 將直徑5 mm的病菌菌絲塊接種于PDA平板中央，然后分別在5、10、15、20、25、30、35、40℃恒溫培養(yǎng)，6 d后測(cè)量菌落直徑。

1.2.3 不同pH對(duì)菌落生長(zhǎng)的影響 用稀HCl和NaOH溶液制成pH分別為3、4、5、6、7、8、9的PDA平板，將直徑5 mm的病菌菌絲塊接種其平板中央，并于25℃恒溫培養(yǎng)，6 d后測(cè)量菌落直徑。

1.2.4 不同光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響 將直徑5 mm的病菌菌絲塊接種于PDA平板中央，置于全光照、全黑、自然光3個(gè)光照處理下，于25℃恒溫培養(yǎng)，6 d后測(cè)量菌落直徑。

1.3 藥劑毒力測(cè)定

采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定藥劑毒力。將供試藥劑用滅菌水配制成母液后，按比例配制每種藥劑的7個(gè)濃度梯度PDA平板，并以不添加藥液的PDA平板為空白對(duì)照。于25℃恒溫箱中培養(yǎng)6 d，測(cè)量菌落直徑，計(jì)算抑制率，以藥劑有效成分的濃度為測(cè)試濃度計(jì)算回歸方程和抑制中濃度EC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害癥狀、病原及病原菌培養(yǎng)性狀觀察

山茶黑斑病多始于葉緣或葉尖，初期病斑為褐色，后向內(nèi)擴(kuò)展成不規(guī)則黑褐色大病斑，病斑邊緣深褐色，常造成半葉至全葉枯死，后期病斑呈灰白色，且病斑上可見(jiàn)成簇或散生的黑色霉層（圖1a）。根據(jù)顯微檢查，引起山茶葉斑病的病原為半知菌亞門(mén)絲孢目鏈格孢屬真菌——葉枯鏈格孢（A. alternate）。

在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)初期，菌落圓形，白色，隨著菌落生長(zhǎng)，菌落出現(xiàn)不明顯的同心輪紋，中間大部分為淺灰黑色，邊緣白色（圖1b）。分生孢子梗淡褐色，分生孢子橢圓形、卵形，淡褐色，有喙，具縱橫隔膜（圖1c）。

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)病菌生長(zhǎng)速率的影響

山茶黑斑病菌在20%山茶葉片煎汁瓊脂培養(yǎng)基、PDA和OA培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，但在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最快，培養(yǎng)6 d后菌落直徑達(dá)8.2 cm，其次為OA培養(yǎng)基，培養(yǎng)6 d后菌落直徑為7.8 cm，而在山茶葉片煎汁瓊脂培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)速度最慢，培養(yǎng)6 d菌落直徑6.1 cm，這表明該病菌生長(zhǎng)需大量碳源，是一種兼性腐生菌。

2.3 不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

山茶黑斑病菌在溫度為5～35℃時(shí)均能生長(zhǎng)，其中在25℃時(shí)菌落生長(zhǎng)最快，當(dāng)溫度大于30℃，菌絲生長(zhǎng)趨勢(shì)明顯下降，溫度達(dá)40℃時(shí)菌落不能生長(zhǎng)，甚至菌絲出現(xiàn)衰亡現(xiàn)象（圖2）。

2.4 不同pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

山茶黑斑病菌對(duì)酸堿度的適應(yīng)范圍比較廣，pH 3～9均可生長(zhǎng)，在pH 5～7時(shí)生長(zhǎng)最快，在第6 d時(shí)，pH 6菌落直徑達(dá)8.57 cm（表1）。pH過(guò)高或過(guò)低時(shí)，菌落生長(zhǎng)速度均較慢，表明病原菌喜中性偏酸的環(huán)境，過(guò)酸或過(guò)堿的環(huán)境均不適于該病菌生長(zhǎng)。

2.5 不同光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

山茶黑斑病菌在全光、全黑或光暗交替處理下菌落生長(zhǎng)速度大體一致，培養(yǎng)6 d后菌落直徑分別為8.45、8.23、8.13 cm，表明光照對(duì)菌落生長(zhǎng)影響不大。

2.6 室內(nèi)抑菌效果測(cè)定

3種殺菌劑對(duì)山茶黑斑病菌的毒力存在明顯差異，其中以43%戊唑醇懸浮劑毒力最高，其EC50為0.009 μg/ml，其次為35%戊唑·福美雙懸浮劑， 50%多菌靈超微可濕性粉劑毒力最低，EC50為0.723 μg/ml（表2）。

3 結(jié)論與討論

通過(guò)癥狀觀察、顯微鑒定，明確了山茶黑斑病在葉片上的危害癥狀，這為生產(chǎn)上直接診斷提供了參考依據(jù)。山茶黑斑病菌在20%山茶葉片煎汁瓊脂培養(yǎng)基、PDA和OA培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，其中以碳源最豐富的PDA培養(yǎng)基最適宜菌落生長(zhǎng)，病菌生長(zhǎng)所需養(yǎng)分以碳源為主，病菌可能為兼性寄生菌。該菌在5～35℃、pH 3～9均可生長(zhǎng)，尤其適宜25～30℃和pH 6的酸性環(huán)境，菌絲的致死溫度為40℃，菌落生長(zhǎng)對(duì)光照的要求不嚴(yán)格。

戊唑醇是一種高效、廣譜、內(nèi)吸性殺菌劑，兼具保護(hù)、治療、鏟除功能，具有藥效強(qiáng)、植物吸收快、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，已在農(nóng)業(yè)和果蔬生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。目前，植物病原菌對(duì)傳統(tǒng)農(nóng)藥產(chǎn)生抗性已多有報(bào)道，因此在園林植物病害防治過(guò)程中，應(yīng)控制傳統(tǒng)農(nóng)藥的使用次數(shù)和使用量。當(dāng)前新農(nóng)藥層出不窮，這為生產(chǎn)中農(nóng)藥的使用提供了更多選擇。該文通過(guò)與傳統(tǒng)殺菌劑多菌靈毒力測(cè)定的比較，發(fā)現(xiàn)戊唑醇和戊唑·福美雙室內(nèi)殺菌效果更好，說(shuō)明新藥劑在生產(chǎn)中有廣闊的應(yīng)用前景。為了加快新農(nóng)藥在園林植物生產(chǎn)和養(yǎng)護(hù)上的使用和推廣，今后應(yīng)對(duì)園林植物病害進(jìn)行新藥劑室內(nèi)、林間使用試驗(yàn)研究。

山茶系半陰性樹(shù)種，喜半陰、忌烈日，在土層深厚、有機(jī)質(zhì)豐富的疏陰濕潤(rùn)地或溝谷兩側(cè)生長(zhǎng)良好。因此，在園林植物搭配中，要注意山茶有一定的遮陽(yáng)效果。施用有機(jī)肥改善土壤環(huán)境，合理修剪，通風(fēng)透光良好，提高樹(shù)勢(shì)，結(jié)合使用各種高效、環(huán)保藥劑，可有效控制山茶各類(lèi)病害的發(fā)生。

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責(zé)任編輯：鄭丹丹